急腹癥Ⅲ號對呼吸機相關性肺炎大鼠內毒素及細胞因子的影響

王瑞明，馮為民，秦舒能，佟麗妍，陳 杰

(杭州市中醫院 急診科，浙江 杭州 310007)

腸道被認為是危重病應激的“中心器官”和多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)的“始動器”[1]。腸道粘膜屏障是人體抵御外界細菌入侵的重要屏障，腸道粘膜屏障破壞可導致腸道通透性增高、免疫功能抑制、腸道菌群移位、甚至發展為MODS[2]。呼吸機相關性肺炎可導致腸道粘膜屏障破壞[3]。祖國醫學認為肺與大腸相表里，互為絡屬，互相影響，肺氣不降，津不下達，腑氣不通。大腸實熱，腑氣阻滯，亦可影響肺的宣降。急腹癥Ⅲ號是杭州市中醫院院內制劑，基本成分為生大黃、川樸、枳殼、丹參，川芎、生山梔和蒲公英等。急腹癥Ⅲ號主要是根據《傷寒論》大承氣湯加減化裁而成，具有泄熱通腑，清熱解毒等功效，臨床上多應用于熱瘀所致的腑實證。本研究基于“肺腸表里”理論觀察急腹癥Ⅲ號對呼吸機相關性肺炎大鼠內毒素和細胞因子的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選用雄性SD大鼠80 只，體重280～320 g，浙江中醫藥大學動物實驗中心提供，實驗動物使用許可證號：SYXK(浙)2013-0184。

1.2 實驗儀器 光學顯微鏡(日本Olympus公司)，RM2135型石蠟切片機(德國徠卡)，低溫高速離心機 (德國Beckman公司)，SX-300S凝膠圖像分析處理系統(上海小源科技有限公司)，高效液相色譜儀(美國water公司)，精密電子天平(德國Sartorius公司)，電泳儀(美國Bio-Rad公司)。

1.3 實驗試劑 急腹癥Ⅲ號由杭州市中醫院制劑室提供(批準文號：浙藥制字Z20100112)，谷氨酰胺購自日本壽制藥株式會社，酶聯免疫吸附法內毒素(ET)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、核因子κB(NF-κB)試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司。

1.4 造模方法 參考文獻[4]建立大鼠呼吸機相關性肺炎模型，造模成功的標準：①出現肺炎臨床表現；②肉眼可見大鼠肺葉不同程度的融合性出血性病灶；③光鏡下觀察大鼠肺組織呈小葉性肺炎特征；④外周血和肺泡灌洗液(BALF)細菌學培養呈陽性。

1.5 給藥方法 將大鼠隨機分為4組各20只。①急腹癥Ⅲ號組：建模大鼠每日灌胃急腹癥Ⅲ號2 mL×5 d；②谷氨酰胺組：建模大鼠每日灌胃谷氨酰胺顆粒2 mL×5 d；③急腹癥Ⅲ號聯合谷氨酰胺組：建模大鼠灌胃急腹癥Ⅲ號及谷氨酰胺顆粒各2 mL×5 d；④安慰劑組：建模大鼠每日灌胃生理鹽水2 mL×5 d。

1.6 觀測指標 給藥5 d后處死大鼠，取門靜脈血3 mL，加10%EDTA搖勻，30 min內2000 r/min離心10 min后取上層血漿，-80 ℃凍存待檢。采用酶聯免疫吸附法檢測大鼠血漿IL-2，IL-6，ET，NF-κB水平。

1.7 統計學分析 采用SPSS 17.0軟件分析數據，三組間連續變量差異采用單因素方差分析，采用Tukey’s多重比較法進行兩兩比較，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

單因素方法分析結果顯示，各組大鼠血漿IL-2、IL-6、ET、NF-κB水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。兩兩比較結果顯示，急腹癥Ⅲ號組、谷氨酰胺組、急腹癥Ⅲ號聯合谷氨酰胺組大鼠血漿的IL-2、IL-6、ET水平均低于安慰劑組，差異均有統計學意義(P<0.05)；谷氨酰胺組、急腹癥Ⅲ號聯合谷氨酰胺組大鼠血漿的NF-κB水平低于安慰劑組，急腹癥Ⅲ號聯合谷氨酰胺組IL-2、ET水平均低于急腹癥Ⅲ號組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠內毒素及細胞因子比較

注：a與安慰組比較，P<0.05；b與急腹癥Ⅲ號組比較，P<0.05。

3 討論

呼吸機相關性肺炎是指應用機械通氣治療后48 h和停用機械通氣拔除人工氣道48 h內發生肺實質的感染性炎癥[5]。腸道是機體最大細菌和毒素庫，多種原因可導致腸道菌群失調，屏障功能破壞，有可能成為呼吸機相關性肺炎患者的菌血癥來源。腸道通透性與危重癥病情呈正相關，病情越重，腸道通透性越高，而通透性增高又加重病情[6]。腸黏膜屏障的損傷萎縮、機體免疫功能的下降及腸道菌群失調都是促進細菌移位的機制。

內毒素及細胞因子參與了全身嚴重反應綜合征的啟動，激發機體產生炎癥介質，最終可導致多臟器功能衰竭[7]。IL-6是機體創傷和修復過程中一種重要的急性期反應介質，可以加劇創傷后炎癥介質的產生[8]。IL-2具有廣泛生物活性，是T細胞亞群的生長因子，可促進活化B細胞增殖，為調控免疫應答的重要因子，也參與抗體反應[9]。內毒素對宿主有毒性，當細菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細胞后，內毒素釋放出來可導致發熱反應、白細胞反應和內毒素休克[10]。

中醫學認為“肺與大腸相表里”。肺與大腸的表里關系主要體現在肺氣的肅降和大腸傳導相互為用的關系。肺氣肅降，氣機條達，布散津液，有利于糟粕的排出，同理大腸傳導正常，糟粕下行，也有利于肺氣的肅降。呼吸機相關性肺炎以腑實證候為多，急腹癥Ⅲ號是杭州市中醫院院內制劑，中醫認為“六腑以通為用”，六腑傳化水谷，需不斷收納、消化、傳導和排泄，虛實更替，宜通而不宜滯，因此通腑法在腑氣不通及胃腸功能受損方面屢有見效。方中大黃為君，苦寒泄熱，祛瘀通便。大黃作為通腑要藥在《神農本草經》中早有記載：“蕩滌腸胃，推陳致新，通利水谷，調中化食，安和五臟”。厚樸，枳殼為臣，行氣除脹，消積導滯，輔以丹參，川芎，生山梔，蒲公英活血祛瘀行氣之功。現代藥理研究表明：大黃可防治內毒素血癥，抑制內毒素介導單核巨噬細胞產生細胞因子，減少細胞因子的瀑布效應，拮抗全身炎癥反應綜合征[11]。藥理研究表明，急腹癥Ⅲ號具有抗凝，抑制血小板粘附、聚集、釋放，擴張血管的作用，保護腸黏膜屏障功能，減少細菌易位，改善腸黏膜微循環的作用[12]。

谷氨酰胺可以危重患者減輕腸屏障損害[13]，抑制內毒素和細胞因子的產生，防止腸源性感染，抑制小腸粘膜萎縮。本研究結果表明：急腹癥Ⅲ號組、谷氨酰胺組、急腹癥Ⅲ號聯合谷氨酰胺組大鼠血漿的IL-2、IL-6、內毒素水平均明顯低于安慰劑組，提示急腹癥Ⅲ號及谷氨酰胺均可抑制內毒素和相關細胞因子的產生；急腹癥Ⅲ號聯合使用谷氨酰胺后IL-2、ET水平明顯低于急腹癥Ⅲ號，可能與谷氨酰胺促進免疫球蛋白的合成，防止細菌移位及內毒素入血、維持腸道屏障完整性有關。本研究結果還需大樣本進一步研究證實，急腹癥Ⅲ號具體作用成分及毒副作用也有待進一步研究。