看P3實驗室如何“揪出”新冠病毒

龍躍梅 陳淑華 王蒙

核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標準”，而檢測流程中的每一個環節都是精細活，容不得半點馬虎。“這里是與病毒‘零距離接觸的地方，整個實驗室完全密封，室內處于負壓狀態，我們喜歡用‘三流來形容它，即人流、物流、氣流的單向流動，確保在里面的污染物不會泄漏到外面而造成污染?！睆V東省第二人民醫院P3實驗室主任林劍國說。而他說的“這里”指的就是P3實驗室（生物安全防護三級實驗室）。廣東省第二人民醫院每天400多份新冠病毒核酸檢測就是在這里開展的。

現在，讓我們揭開廣東省第二人民醫院P3實驗室的神秘面紗，看看在這里病毒究竟是怎樣被“揪出來”的？

檢測流程每個環節都是精細活

核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標準”，而檢測流程中的每一個環節都是精細活，容不得半點馬虎。

實驗室內的檢測流程可分為5個步驟：樣本進入“傳遞窗”—滅活處理—開蓋加樣和核酸提取—擴增反應判斷結果—高壓滅菌。

第一步，采集的檢測樣本如咽拭子或肛拭子，在進入P3實驗室前就得先進入一個特殊的窗口——“傳遞窗”，這個窗口也叫Air Lock，空氣鎖，顧名思義，與空氣有關。這個傳遞窗有不能同時打開的雙重門，保證傳遞樣本時帶進去的空氣被隔離在雙重門中，確保實驗室外的環境不受污染。這也是“三流”中“物流”，樣本從這里開啟了其在實驗室中短暫的一生。

第二步，樣本在水浴箱經半個小時56℃的高溫滅活，使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，使實驗員在對樣本進行檢測時相對安全，但是病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。

第三步，進行開蓋加樣和核酸提取。

第四步，提取的核酸送到核酸檢測室內，就要上儀器了。提取的核酸加入擴增試劑中，通過熒光PCR儀進行RT-PCR反應，先將提取的核酸逆轉錄成DNA，再以DNA為模版，對特定位點進行擴增，利用不同的溫度進行變性、退火和延伸，每個循環采集熒光值，45個循環后繪制熒光曲線，用時約110分鐘，實驗員根據熒光曲線分析判斷結果的陰性和陽性。

第五步，實驗過程產生的污物通過高壓滅菌后，按相關普通醫療垃圾處理?！拔锪鳌痹谶@里就結束了。

檢測結果經歷重重比對與復核

任何一個環節出現問題都可能導致檢測結果差錯。因此，為保障檢測的質量，檢測結果將經歷重重的比對與復核。

據介紹，檢測質量的保障措施在檢測前就已經開始了，樣本采集的醫務人員必須經過嚴格的培訓和考核才能上崗，樣本的質量與采集的技術密切相關，每個動作流程都必須按規定進行，樣本采集完成后的護送工作也需按照嚴密的程序，由專人專道配送到實驗室。

在檢測過程中，實驗員始終保持謹慎的態度進行每一次測試，不錯過任何一個可疑樣本，針對可疑樣本，還會選用不同的試劑進行復核確定;其次，按照流程，每進行一批實驗，均會隨機插入三個以上空白對照，針對陽性樣本還會進行病毒基因的測序比對，以防止“假陽性”的出現。檢測后，實驗室還會定期隨機抽取檢測樣本送到第三方實驗室進行檢測，對數據進行對比分析，同時實驗室也會參加衛生主管部門和廣東省臨床中心的室間質評，保障檢測的準確性。

病毒“偵察兵”業務過硬又英勇

在操作中，實驗員面對眼前的樣本，需要“一個一個地揭開蓋子，進行開蓋加樣和核酸提取”，這無疑是與病毒的正面交鋒。核酸檢測的宗旨是高效、有序和安全。其中安全是重中之重，尤其是實驗員的安全。

因此實驗員要進入P3實驗室，首先應在清潔區內穿戴中級防護服，通過緩沖間進入實驗室負壓工作間，在這里進行標本處理，核酸提取及檢測，完畢后進行空間、表面消毒，再按順序脫下防護服，通過淋浴間更衣后，回到清潔區。這些步驟必須嚴格執行，一個都不能少。

廣東省第二人民醫院P3實驗室檢測團隊目前有21人，實行一天三班制。在疫情暴發階段，為了滿足檢測需求，縮短檢測時間，實驗室又在原有團隊基礎上，從風濕免疫科、血液科等科室的實驗室調配了人員。這些病毒“偵察兵”70%以上是碩士以上學歷，均經過分子生物學的培訓，并擁有多聚酶鏈反應（PCR）上崗證。

實驗室嚴格遵照“新型冠狀病毒肺炎診療方案”及生物安全要求，檢測人員需在P3實驗室負壓密閉的空間里穿著三級防護裝備，5個小時不吃不喝，甚至穿戴成人紙尿褲以解決上廁所的問題，隨時需要面對因負壓差及裝備嚴密導致的頭暈、嘔吐等癥狀。

“與戰斗在病房里的醫護人員不同，他們藏在實驗室里，每天與病毒近距離接觸，是人們看不見的‘最前線?！绷謩f。