高危HPV基因型檢測(cè)在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值

蘇 華，陳 琛

高危HPV基因型檢測(cè)在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值

蘇 華，陳 琛

目的探討高危人乳頭狀瘤病毒(HR-HPV)基因型檢測(cè)在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值。方法選取我院2012年1月—2016年2月行宮頸癌篩查的10 482例，均行宮頸脫落細(xì)胞液基細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)和人乳頭狀瘤病毒(HPV)基因型檢測(cè)，觀察HPV基因型與年齡、TCT結(jié)果及病理分型的相關(guān)性。結(jié)果與<21歲組比較，21～29歲組低危人乳頭狀瘤病毒(L-HPV)陽(yáng)性率降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與21～29歲組比較，30～65歲組、>65歲組HR-HPV陽(yáng)性率均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與30～65歲組比較，>65歲組HR-HPV陽(yáng)性率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。不同TCT結(jié)果HR-HPV及L-HPV陽(yáng)性率比較均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；病理分型為正常(慢性宮頸炎)、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅱ級(jí)、CINⅡ～Ⅲ級(jí)、CINⅢ級(jí)及宮頸浸潤(rùn)癌的HR-HPV及L-HPV陽(yáng)性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論HR-HPV基因型檢測(cè)在宮頸癌篩查中具有重要的臨床意義。

宮頸癌；人乳頭狀瘤病毒；基因檢測(cè)

持續(xù)的高危人乳頭狀瘤病毒(HR-HPV)感染是宮頸癌癌前病變的危險(xiǎn)因素。通過HR-HPV基因型檢測(cè)，可早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌癌前病變，從而降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率。本文對(duì)HP-HPV基因型檢測(cè)與宮頸病理分型進(jìn)行調(diào)查分析，旨在探討HR-HPV與宮頸病變的相關(guān)性，為臨床篩查提供理論依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院2012年1月—2016年2月行宮頸癌篩查的10482例，其中<21歲組54例，21～29歲組1420例，30～65歲組8855例，>65歲組153例，均行宮頸脫落細(xì)胞液基細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)和人乳頭狀癌病毒(HPV)基因型檢測(cè)，符合2012年美國(guó)宮頸癌篩查推薦指南[1]，同時(shí)排除伴急性生殖道炎癥及其他婦科疾病、既往行全子宮切除術(shù)、1周內(nèi)有陰道用藥史、近期接受過HPV治療者。所有患者均知情同意且簽署知情同意書，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查并通過。

1.2檢查方法

1.2.1TCT檢測(cè)方法：嚴(yán)格按照宮頸脫落細(xì)胞取樣步驟常規(guī)取材，即擴(kuò)陰器充分暴露宮頸口，擦去分泌物，用宮頸刷深入宮頸口，順時(shí)針方向采集移行帶宮頸脫落細(xì)胞送檢。經(jīng)Thin Prep 2000全自動(dòng)超薄液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)(美國(guó)Hologic公司)制備成均勻的薄層細(xì)胞涂片，將玻片進(jìn)行染色固定，請(qǐng)專業(yè)婦科病理醫(yī)師進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷。采用2001年診斷報(bào)告分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[2]，分為正常(炎癥)、非典型鱗狀細(xì)胞(ASCUS)、鱗狀上皮內(nèi)低度病變(LSIL)、鱗狀上皮內(nèi)高度病變(HSIL)及鱗狀細(xì)胞癌(SCC)。

1.2.2HPV基因型檢測(cè)：采用HPV基因分型檢測(cè)基因芯片試劑盒(廣東凱普生物技術(shù)有限公司)，定性檢測(cè)宮頸樣本中常見的23種HPV基因型，包括17種高危型(即HR-HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)和6種低危型(即L-HPV6、11、42、43、81、83)。所需儀器包括PCR儀、核酸分子快速雜交儀、基因芯片-微陣列掃描分析儀，常規(guī)提取宮頸黏液脫落細(xì)胞DNA，并進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)體系嚴(yán)格按照說(shuō)明書，擴(kuò)增條件為：25℃ 10 min，94℃ 10 min，94℃ 20 s，56℃ 30 s，72℃ 20 s，循環(huán)40次，72℃ 5 min延伸，擴(kuò)增后產(chǎn)物HPV DNA與基因芯片探針進(jìn)行雜交，通過洗脫、顯色、掃描分析等步驟確定標(biāo)本是否感染及感染亞型。

1.2.3病理學(xué)檢查：若TCT出現(xiàn)異常，于可疑病變區(qū)行一點(diǎn)或多點(diǎn)宮頸活組織病理形態(tài)學(xué)檢查，由2位以上病理專家進(jìn)行診斷。病理分級(jí)：①正常(慢性宮頸炎)；②宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ級(jí)；③CINⅡ級(jí)；④CINⅢ級(jí)/宮頸原位癌(CIS)；⑤宮頸浸潤(rùn)癌。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，以率(%)表示。以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1不同年齡段人群HPV基因型陽(yáng)性率比較 本文HPV總感染率為17.7%(1856/10482)，其中HR-HPV占13.1%(1371/10482)，L-HPV占4.6%(485/10482)。與<21歲組比較，21～29歲組、30～65歲組HR-HPV及L-HPV陽(yáng)性率降低，>65歲組HR-HPV陽(yáng)性率升高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而>65歲組L-HPV陽(yáng)性率降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與21～29歲組比較，30～65歲組、>65歲組HR-HPV陽(yáng)性率均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而L-HPV陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與30～65歲組比較，>65歲組HR-HPV陽(yáng)性率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而L-HPV陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 不同年齡段人群HPV基因型陽(yáng)性率比較[例(%)]

注：HPV指人乳頭狀瘤病毒，HR-HPV指高危型人乳頭狀瘤病毒，L-HPV指低危型人乳頭狀瘤病毒；與<21歲組比較，aP<0.05；與21～29歲組比較，cP<0.05；與30～65歲組比較，eP<0.052.2不同TCT結(jié)果及病理分型與HPV基因型檢測(cè)結(jié)果比較 TCT結(jié)果異常852例，異常率為8.1%。不同TCT結(jié)果HR-HPV及L-HPV陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；病理分級(jí)為正常(慢性宮頸炎)、CINⅡ級(jí)、CINⅡ～Ⅲ級(jí)、CINⅢ級(jí)、宮頸浸潤(rùn)癌HR-HPV及L-HPV陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同TCT結(jié)果及病理分級(jí)與HPV基因型檢測(cè)結(jié)果比較[例(%)]

注：TCT指宮頸脫落細(xì)胞液基細(xì)胞學(xué)檢查，HPV指人乳頭狀瘤病毒，HR-HPV指高危型人乳頭狀瘤病毒，L-HPV指低危型人乳頭狀瘤病毒，ASCUS指非典型鱗狀細(xì)胞，LSIL指鱗狀上皮內(nèi)低度病變，HSIL指鱗狀上皮內(nèi)高度病變，SCC指鱗狀細(xì)胞癌，CIN指宮頸上皮內(nèi)瘤變2.3TCT結(jié)果與病理分級(jí)的相關(guān)性 病理診斷為慢性宮頸炎569例，TCT為452例，符合率79.4%，病理診斷宮頸浸潤(rùn)癌的18例，TCT為13例，符合率為72.2%，見表3。

表3 不同年齡人群(10 482例)宮頸脫落細(xì)胞液基細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果與病理分級(jí)的相關(guān)性[例(%)]

注：ASCUS指非典型鱗狀細(xì)胞，LSIL指鱗狀上皮內(nèi)低度病變，HSIL指鱗狀上皮內(nèi)高度病變，SCC指鱗狀細(xì)胞癌，CIN指宮頸上皮內(nèi)瘤變

3 討論

臨床侵襲性宮頸癌多為HR-HPV16和HR-HPV18感染所致[3]，其次為HR-HPV45、31和33感染。由于HPV感染是一個(gè)無(wú)癥狀、病情不斷演變的過程，疾病早期不易察覺，往往錯(cuò)過最佳治療時(shí)機(jī)，因此，通過早期篩查HR-HPV可盡早預(yù)測(cè)和發(fā)現(xiàn)宮頸癌及癌前病變。本研究TTC分型為SCC中HR-HPV感染率高達(dá)92.9%，推測(cè)HR-HPV篩查可發(fā)現(xiàn)部分宮頸癌患者。然而，宮頸癌HR-HPV篩查最重要的意義并不是證實(shí)癌變患者HR-HPV高感染率，而是在疾病早期發(fā)現(xiàn)更多的癌前病變患者，爭(zhēng)取早期治療。本研究顯示，CINⅠ、CINⅡ、CINⅡ～Ⅲ、CINⅢ及宮頸浸潤(rùn)癌HR-HPV感染率分別為38.0%、36.1%、61.9%、68.8%、75.7%、94.4%，其感染率隨病理分級(jí)嚴(yán)重程度的增加而逐漸升高，與趙旭曄等[4]研究一致。

宮頸癌篩查結(jié)果與年齡密切相關(guān)[5]。本研究對(duì)不同年齡段人群HPV感染情況進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)<21歲組與>65歲組HR-HPV感染率較高。有研究顯示，<20歲組HR-HPV感染率較高，但多為單次一過性HPV感染陽(yáng)性，無(wú)長(zhǎng)期持續(xù)性感染，其組織學(xué)病理診斷多為陰性，過度的干預(yù)和治療可能會(huì)潛在影響生育能力[6]。Rositch等[7]對(duì)持續(xù)HR-HPV感染進(jìn)行了系統(tǒng)評(píng)價(jià)，通過對(duì)全球HPV持續(xù)感染模式進(jìn)行綜合分析，探討女性宮頸HPV感染的持續(xù)時(shí)間及其對(duì)宮頸異常病變的影響，將持續(xù)性定義為至少兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的HPV陽(yáng)性，發(fā)現(xiàn)12個(gè)月之后HPV復(fù)檢陽(yáng)性與宮頸癌前病變密切相關(guān)。HPV感染持續(xù)性因地域和基因型的不同而產(chǎn)生差異，其平均持續(xù)時(shí)間為9.8個(gè)月，HR-HPV持續(xù)時(shí)間(9.3個(gè)月)較L-HPV持續(xù)時(shí)間(8.4個(gè)月)更長(zhǎng)，其中HR-HPV16、31、33和52持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)，而HR-HPV16持續(xù)時(shí)間(12.4個(gè)月)較廣泛關(guān)注的HR-HPV18持續(xù)時(shí)間(9.8個(gè)月)更長(zhǎng)。有文獻(xiàn)報(bào)道，大范圍篩查不宜在<20歲女性中開展[6]，而30～65歲為宮頸病變和HR-HPV持續(xù)感染的高發(fā)人群，建議對(duì)潛在HR-HPV感染的女性進(jìn)行長(zhǎng)期、有序的組織學(xué)隨訪。

本研究分析HPV在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值，為臨床早期篩查提供理論基礎(chǔ)，盡早發(fā)現(xiàn)潛在的宮頸癌前病變，避免過度醫(yī)療。

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R737.33

B

1002-3429(2017)09-0075-03

10.3969/j.issn.1002-3429.2017.09.027

2017-05-04 修回時(shí)間：2017-06-13)

河北省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)青年基金項(xiàng)目(20120158)；河北省張家口市科技計(jì)劃項(xiàng)目(12110051D)

075000 河北 張家口，河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科(蘇華)，重癥醫(yī)學(xué)科(陳琛)