實(shí)驗(yàn)動(dòng)物黑斑模型的建立及其研究

丁克祥　陳華東　趙莉　何曉賓 羅斌　黃冰　梁碧麗

丁克祥，男，1958年生，第三軍醫(yī)大學(xué)海軍醫(yī)學(xué)院畢業(yè)，現(xiàn)任海軍廣州中心醫(yī)院副院長、海軍抗衰老研究中心主任，中山醫(yī)科大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士研究生導(dǎo)師，本刊編委，《中國老年學(xué)雜志》等8家學(xué)術(shù)期刊副主編、編委，發(fā)表學(xué)術(shù)論文一百多篇，專著7部參編2部，獲軍隊(duì)科技進(jìn)步獎(jiǎng)18項(xiàng)(1等1項(xiàng)，2等6項(xiàng)，3等8項(xiàng)，4等3項(xiàng))

摘要目的：為幫助臨床和美容科研人員尋找祛斑藥物和治療的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。方法：采用微量定點(diǎn)注射法將黑斑形成液注入動(dòng)物皮下不同深度，并輔用紫外線照射法。結(jié)果：受試動(dòng)物皮下可形成肉眼可見的黑斑，通過皮膚組織切片染色并用光鏡和透射電鏡觀察，黑斑形成處皮膚組織細(xì)胞學(xué)結(jié)構(gòu)與正常對(duì)照組有明顯區(qū)別。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物黑斑模型的建立，對(duì)推動(dòng)美容醫(yī)學(xué)色素性皮膚疾病的研究和治療具有積極意義。

關(guān)鍵詞黑斑模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚

STUDY NO THE FOUNDATION OF BLACK SPOTS MODES

IN EXPERIMENTAL ANIMAL

Guangzhou Naval Central Hospital(Guangzhou,510318)

Ding KexiangChen HuadongZhao Li et al

AbstractObjective:To look for a brug ang a therapy method of cleaning spots inlevel of preclinical medicine. Methods:Toadopt methods of micro-fixed-point injection and ultraviolet radiation,We inject formatixe liquid of biack spots into varying depth subcutaneous layer of animal. Results:Visible black spots come into being in subcutaneous layer of experimental animal.There is notable difference in skin histiocytic structure between tsst of skin becoming black spots and control group,by way of skin tissue slice staining and observatiopn with optical and transmission electron microscope.Conclusion: The black spots model in experimentalanimal may be founded under rigid experimental circumstances It will promote the study on pigmentary diseases in medical cosmetology.

Key wiordsBlack spotsModelExperimental animlSkin

皮膚代謝性色素沉著系單純性基底細(xì)胞層黑色素增多，是臨床美容皮膚科常見的皮膚疾病。其種類和表現(xiàn)因其病因機(jī)制不同而不定，有些發(fā)病機(jī)制尚不清楚⁽¹⁾。由于皮膚黑斑影響美容，嚴(yán)重時(shí)也影響皮膚的正常結(jié)構(gòu)和功能，因此，人們希望在祛斑上尋找一些更加快速和有效的治療藥物和方法⁽²⁾。為了避免或減少新的祛斑藥物和治療方法對(duì)人體的損傷和副作用、探索藥物最佳的劑量彩奔湫вΓ同時(shí)也為了對(duì)皮膚色素沉著形成的病因機(jī)制作進(jìn)一步深入研究，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是非常必要的。我們采用幼年家豬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物并建立了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物黑斑模型，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)報(bào)告如下。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物幼年家豬，2頭，年齡80天～90天，體重20kg～22kg,雌雄各半，由中山醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。經(jīng)一周檢疫后即投入實(shí)驗(yàn)。

1.1.2受試器材全套特制微型注射器、精密游標(biāo)卡尺、特制黑斑定位板及其它手術(shù)器械。

1.1.3儀器設(shè)備紫外線燈、切片機(jī)、蠟封機(jī)、顯微鏡、透射電鏡及其配套設(shè)備等。

1.1.4制劑黑斑形成液、切片染色液、麻醉劑、生理鹽水等。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備先將動(dòng)物用水沖洗干凈，用3%戊巴比妥和4.3%水合三氯乙醛麻醉劑，按1ml/kg體重劑量進(jìn)行腹腔注射。為了保證麻醉效果，本實(shí)驗(yàn)兩種麻醉劑交叉使用。動(dòng)物被麻醉后迅速抬上手術(shù)臺(tái)固位、剪毛、再清洗和消毒。

1.2.2實(shí)驗(yàn)方法采用特制黑斑定位板固定在動(dòng)物已備皮處，用碘酒-酒精消毒后，將已配制好的黑斑形成液充分混勻后抽入特制無菌微型注射器中，并按設(shè)計(jì)要求分別換上不同規(guī)格的特制針頭，依次進(jìn)行皮下注射，記錄注射時(shí)間，并作好標(biāo)記。以后每天1次用黑斑形成液輕輕點(diǎn)擦外部相應(yīng)處并每天用紫外線燈照射，連續(xù)60天。對(duì)照組除用生理鹽水代替黑斑形成液外，其它方法類同。實(shí)驗(yàn)期間，動(dòng)物保持正常飼養(yǎng)的最適條件，并防止環(huán)境污染。

1.2.3切片染色及光鏡、電鏡檢查法分別取豬背部的對(duì)照皮膚和黑斑形成處皮膚進(jìn)行切片、染色，并用光鏡和電鏡參照參考文獻(xiàn)進(jìn)行^(3,4)觀察。

2結(jié)果

2.1肉眼觀察結(jié)果黑斑形成液皮下注射的深淺對(duì)黑斑的形成有一定的影響。注射初期，注射部位可見黑斑形成液本身的顏色，且顏色因注射深淺略有差異。一周后，黑斑形成液的本色逐漸變淡，有些被皮下注射造成的創(chuàng)面痂皮掩蓋，黑斑難辨。兩周后創(chuàng)面痂皮脫落，暴露新生皮膚。30天后，淺表開始出現(xiàn)黑斑印跡，黑斑雖有些模糊不清，但已隱約可見，特別是皮下1.5mm～2.5mm處，黑斑形成較為清晰明顯，形成類似雀斑形狀和大小的黑斑斑點(diǎn)，隨著時(shí)間的延長，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)斑點(diǎn)更加明顯、清晰。

2.2光鏡和電鏡觀察結(jié)果表明，經(jīng)黑斑形成液皮下注射并在紫外線作用下所形成的黑斑皮膚表皮基底細(xì)胞層，其黑色素細(xì)胞產(chǎn)生的黑色素顆粒較正常對(duì)照組明顯增多，光鏡檢查經(jīng)Masson-Fontana黑色素染色的切片發(fā)現(xiàn)，表皮各層細(xì)胞內(nèi)，特別是基底細(xì)胞層和棘細(xì)胞層內(nèi)黑色素顆粒也較對(duì)照組明顯增多，且這些表皮層細(xì)胞內(nèi)黑色素顆粒也較正常皮膚增多；真皮淺層與表皮深層交接處的乳頭狀邊接處也有程度不同的黑色素顆粒，與正常組對(duì)照比較，分布明顯密集，散在范圍也明顯擴(kuò)大。

電鏡檢查，表皮角質(zhì)層內(nèi)的殘存橋粒以及棘細(xì)胞和基底細(xì)胞內(nèi)的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的變性程度較正常對(duì)照組明顯增多和加重，黑色素細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，增生較正常對(duì)照組明顯活躍，無橋粒及胞漿內(nèi)無張力絲，胞體增大，突起增多，胞漿內(nèi)可見到增加的黑色素及黑色素小體，黑素顆粒也較正常對(duì)照組明顯增多。進(jìn)一步觀察還發(fā)現(xiàn)，黑斑形成處皮膚基層細(xì)胞層的黑色素細(xì)胞較正常對(duì)照組明顯活躍，數(shù)目增加，多巴陽性反應(yīng)持久，甚至發(fā)現(xiàn)個(gè)別較大的黑色素細(xì)胞和較多樹狀突起的黑色素細(xì)胞。

3結(jié)論

3.1動(dòng)物黑斑模型是色斑，特別是雀斑治療和研究的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀ｋm然動(dòng)物模型的黑斑與人體雀斑病因?qū)W和發(fā)生機(jī)制完全不同，出現(xiàn)的條件和影響因素也有很大差異，但動(dòng)物模型所形成的黑斑與雀斑在外部形狀、大小以及內(nèi)部組織學(xué)結(jié)構(gòu)及色素改變都比較相似。作者曾通過對(duì)動(dòng)物模型黑斑的外部形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)與比較典型的雀斑進(jìn)行對(duì)比，并通過病理切片、染色、鏡檢，也得出比較相似結(jié)論，因此，可以用此黑斑的動(dòng)物模型進(jìn)行雀斑的治療和研究。

本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ筒捎糜啄昙邑i其皮膚的結(jié)構(gòu)、功能、代謝特征、甚至血管分布、皮膚微循環(huán)等生理學(xué)和組織學(xué)指標(biāo)均與人類皮膚極其相似⁽⁵⁾，但皮膚表皮基底細(xì)胞層中的黑素細(xì)胞的功能與人類略有差異，特別是人類雀斑的形成主要由顯性遺傳誘發(fā)色素代謝紊亂所致，并受內(nèi)分泌、藥物、季節(jié)、日光、心理等多種因素影響，而動(dòng)物黑斑則完全依賴黑斑形成液和紫外光等外源性因素誘導(dǎo)產(chǎn)生，且動(dòng)物所處的實(shí)驗(yàn)環(huán)境已基本不受雀斑形成因素的影響，因此尚不能完全將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物黑斑模型與雀斑等同看待。

3.2關(guān)于動(dòng)物皮膚黑斑形成的作用機(jī)制可能與黑斑形成液中的有關(guān)成分和紫外光輔助照射密切相關(guān)。黑斑形成液中含有制斑素、內(nèi)皮素、黑素細(xì)胞和酪氨酸酶激活劑及其相關(guān)制劑等，這對(duì)剌激和促進(jìn)黑素細(xì)胞的分裂、增殖以及多巴陽性反應(yīng)活性，加快黑素顆粒的形成和色素沉積有一定的作用^(6,8)，加上紫外光照射及被紫外光激活或促進(jìn)的黑斑形成制劑的介導(dǎo)，使黑素細(xì)胞和黑素反應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)，表皮基底細(xì)胞層黑色素進(jìn)一步積累、沉著、黑斑形成更加明顯^(9,10)。

本實(shí)驗(yàn)也證實(shí)黑斑形成與黑素細(xì)胞增殖，特別是黑素細(xì)胞功能和作為色素沉著決定因子的酪氨酸酶的活性和反應(yīng)增強(qiáng)有關(guān)^(11,12)。但黑斑形成液中相關(guān)成分如何促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖，提高黑素細(xì)胞功能以及這些成分的最佳比例對(duì)黑斑形成的時(shí)效擦啃Ч叵擔(dān)黑斑形成后的維持時(shí)間及其代謝變化規(guī)律尚有待于在今后的實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步研究和完善。參考文獻(xiàn)

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