ＣＸＣＲ３在銀屑病患者的表達(dá)及其臨床意義

【摘要】 目的 研究銀屑病患者皮損內(nèi)趨化性細(xì)胞因子受體CXCR3的表達(dá)及其臨床意義。方法 利用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法測(cè)定20例尋常型銀屑病患者皮損內(nèi)及17例正常對(duì)照者皮膚中CXCR3 mRNA的定量表達(dá)，采用直線相關(guān)回歸分析方法分析CXCR3 mRNA的表達(dá)與銀屑病病情嚴(yán)重程度(PASI)的關(guān)系。結(jié)果 銀屑病皮損內(nèi)CXCR3 mRNA高于正常對(duì)照者皮膚內(nèi)的表達(dá)水平(P<0.01)。銀屑病皮損內(nèi)CXCR3 mRNA的表達(dá)與患者病情嚴(yán)重程度呈顯著的正相關(guān)(r=0.72465，P<0.01)。結(jié)論 趨化性細(xì)胞因子受體CXCR3可能在銀屑病的發(fā)病中起重要作用。

【關(guān)鍵詞】 銀屑病；趨化性細(xì)胞因子受體；CXCR3；熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)

文章編號(hào)：1003-1383(2007)04-0362-02

中圖分類號(hào)：R 758.63

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Expression and clinical significance of CXCR3 mRNA in patient with psoriasis vulgaris

MA Ze-lin1，ZHOU Zhi-gang1，Li Chang-xing1，Hu-Bin2

(1.Dongguan Hospital of Chronic Disease，523008 Dongguan，2.Daan Gene Diagnostic Center of Sun Yat-sen University，510080 Guangzhou)

【Abstract】 Objective To study the expression and clinical significance of chemokines receptor CXCR3 in psoriatic lesional skin.Methods Twenty adult patients with psoriasis vulgaris and 17 health people were sequentially chosen in this study. The production CXCR3 mRNA was measured by Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction Method. The relationship between CXCR3 and disease severity(PASI) was assessed by linear regression and correlation.Results Expression of CXCR3 mRNA in psoriasis lesional skin was higher than that in control group(P<0.01).Expression of CXCR3 mRNA was markedly positive correlation with PASI(r=0.72465，P<0.01).Conclusion Our data suggest an important role of CXCR3 in the development and advance of psoriasis vulgaris.

【Key words】 psoriasis vulgaris；chemokines receptor；CXCR3；Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction Method

銀屑病是一種慢性炎癥性增生性疾病，嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量，人群發(fā)病率為0.5%～4%，其發(fā)病機(jī)制可能與遺傳、細(xì)胞因子及其受體、新生血管形成、細(xì)胞凋亡異常等有關(guān)^[1~3]。炎性細(xì)胞浸潤(rùn)運(yùn)動(dòng)需要在局部形成適當(dāng)?shù)内吇蜃訚舛忍荻龋瑫r(shí)相應(yīng)的靶細(xì)胞在趨化因子的作用下向局部遷移^[3]，因而趨化因子及其受體在本病發(fā)病機(jī)制中的研究越來(lái)越受到重視。為進(jìn)一步研究趨化因子受體在銀屑病發(fā)病中的作用，本研究采用熒光定量PCR法定量測(cè)定CXCR3在銀屑病患者皮損內(nèi)的表達(dá)及探討其臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

資料和方法

1.一般資料 20例尋常型銀屑病患者為2006年1～6月東莞市慢性病防治院皮膚科門診患者(進(jìn)行期)，其中男11例，女9例；年齡范圍20～46歲(平均36.8歲)；病程10天～3年。所有患者治療前2個(gè)月內(nèi)未系統(tǒng)應(yīng)用免疫抑制劑或皮質(zhì)類固醇制劑或中藥制劑；銀屑病皮損嚴(yán)重指數(shù)(PASI)為8.9~48.6(30.1±14.1)。正常對(duì)照組17例為健康者外科整形手術(shù)切除的皮膚，其中男9例，女8例，年齡范圍20～46歲(平均36.8歲)。

2.方法

(1)RNA的提取：組織塊置勻漿器，加TRIZol冷凍勻漿，提取后的RNA，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)RNA樣品鑒定：電泳檢查：每樣品取5 μl RNA置1%的瓊脂糖凝膠上電泳，泳畢溴化乙錠染色20 min，置紫外燈下觀察。紫外分光光度計(jì)測(cè)吸光度值及計(jì)算樣品濃度。

(3)引物的設(shè)計(jì)和合成：參考16 sRND基因文庫(kù)設(shè)計(jì)引物，CXCR3引物序列如下：FO：5'-CCG TCC AGT GGG TCT TTG G -3'，RO：5'-CTG CGT AGA AGT TGA TGT TGA AGA G -3'，引物擴(kuò)增片斷長(zhǎng)度為72 bp，TaqMan Probe：5'-FAM- TCT GGC CTC TGC AAA GTG GCA -TAMRA-3'，由ABI 3900臺(tái)式高通量DNA合成儀合成。

(4)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：取4 μl RNA模板做逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，儀器為PE9700PCR儀，反應(yīng)體系如下：(德國(guó)QIAGEN 公司RT PCR試劑盒)5×逆轉(zhuǎn)錄buffer 4 μl，上游引物(10 pM/μl)0.4 μl，下游引物(10 pM/μl)0.4 μl，dNTPs(25 mM)0.2 μl，MMLV(10 U/μl)1 μl，DEPC水10 μl，總體積20 μl。反應(yīng)條件：37℃ 1 h，然后95℃ 3 分鐘。

(5)熒光定量PCR反應(yīng)體系進(jìn)行：由熒光定量?jī)xPE 7000型PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增完成。反應(yīng)體積為50 μl，反應(yīng)體系：5×定量PCR buffer 10 μl，上游引物F1 μl，下游引物R1 μl，dNTPs0.5 μl，熒光探針1 μl，Taq 酶1.5 μl，cDNA 5 μl，ddH2O 30 μl(PCR buffer成分：10 mM Tris-HCl (pH8.0)，50 mM KCl，2 mM MgCl2)。反應(yīng)條件為：93℃ 2分鐘，然后93℃45秒，55℃45秒，共40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，計(jì)算待測(cè)樣本CXCR3 mRNA表達(dá)量(copy/μg RNA)。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SAS 8.01 for window 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用秩和檢驗(yàn)和直線相關(guān)回歸分析。

結(jié)果

1.銀屑病患者皮損內(nèi)CXCR3 mRNA的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照者皮膚中的表達(dá)(表1)。

表1 銀屑病治療前皮損和正常皮膚內(nèi)CXCR3 mRNA的表達(dá)分組例數(shù)CXCR3 mRNA(拷貝/μg RNA)uPCXCR3組2086662.68 ±64471.11 -4.0990<0.0001正常對(duì)照1717169.08 ±27978.81

2.銀屑病中CXCR3 mRNA表達(dá)與病情PASI(30.1±14.1)呈顯著正相關(guān)性(r=0.72465，P=0.0003)。見(jiàn)圖1。

討論

銀屑病組織病理學(xué)主要特征是角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增生、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、新生血管形成^[2，3]。炎性細(xì)胞浸潤(rùn)運(yùn)動(dòng)需要在局部形成適當(dāng)?shù)内吇蜃蛹捌涫荏w濃度梯度，同時(shí)相應(yīng)的靶細(xì)胞在趨化因子及其受體的作用下向局部遷移^[4]。趨化因子最初發(fā)現(xiàn)的功能與炎性細(xì)胞趨化有關(guān)，但近年研究表明趨化因子及其受體與細(xì)胞因子共同參與免疫系統(tǒng)的調(diào)控^[5]，因而趨化因子及其受體在本病發(fā)病機(jī)制中的研究越來(lái)越受到重視。IP-10在銀屑病患者的皮損中表達(dá)持續(xù)上調(diào)，在活動(dòng)期斑塊型銀屑病的角質(zhì)形成細(xì)胞和真皮浸潤(rùn)細(xì)胞可測(cè)到IP-10，有效治療后IP-10表達(dá)減少^[6]。趨化因子的生物活性是通過(guò)結(jié)合趨化因子受體來(lái)實(shí)現(xiàn)的。CXCR3為IP-10特異性的受體，在IL-2活化的T細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞高度表達(dá)，而在其他T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞和桿狀細(xì)胞上未能檢測(cè)出^[7]。但關(guān)于CXCR3銀屑病患者皮損內(nèi)表達(dá)如何的研究甚少。本研究發(fā)現(xiàn)銀屑病患者和健康者皮膚均有CXCR3 mRNA的表達(dá)，但銀屑病患者的表達(dá)量明顯高于健康對(duì)照者。此外，銀屑病患者皮損內(nèi)CXCR3 mRNA的表達(dá)與病情嚴(yán)重程度呈顯著的正相關(guān)，即CXCR3 mRNA的表達(dá)量越高其病情越重，反之亦然。這些研究結(jié)果表明，銀屑病患者CXCR3的過(guò)度表達(dá)可能直接或間接與其配體結(jié)合促進(jìn)了炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和新生血管形成，最終形成銀屑病皮損。

參考文獻(xiàn)

[1]張錫寶，何玉清，吳志華，等.銀屑病患者外周血CD4+T細(xì)胞內(nèi)干擾素γ、白介素4表達(dá)與發(fā)病的關(guān)系[J].中華皮膚科雜志，2003，36(3)：151-153.

[2]李常興，張錫寶，吳志華，等.甲氨蝶呤對(duì)銀屑病患者皮損內(nèi)VEGFmRNA影響的研究[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2005，19(9)：522-524.

[3]張錫寶，李常興， 何玉清.甲氨蝶呤對(duì)銀屑病患者皮損T細(xì)胞內(nèi)IFN-γmRNA影響的研究[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2005，19(10)：592-595.

[4]Imai T，Nagira M，Takagi S，et al.Selective recruitment of CCR4-bearing Th2 cells toward antigen-presenting cells by the CC chemokines thymus and activation-regulated chemokine and macrophage-derived chemokine[J].Int Immunol，1999，11(1)：81-88.

[5]Campbell JJ，Hedrick J，Zlotnik A，et al.Chemokines and the arrest of lymphocytes rolling under flow conditions[J].Science，1998，279(5349)：381-384.

[6]Giustizieri ML，Mascia F，F(xiàn)rezzolini A，et al.Keratinocytes from patients with atopic dermatitis and psoriasis show a distinct chemokine production profile in response to T cell-derived cytokines[J].J Allergy Clin Immunol，2001，107(5)：871-877.

[7]Akahira-Azuma M，Szczepanik M，Tsuji RF，et al.Early delayed-type hypersensitivity eosinophil infiltrates depend on T helper 2 cytokines and interferon-gamma via CXCR3 chemokines[J].Immunol，2004，11(3)：306-317.

(收稿日期：2007-06-18 修回日期：2007-07-20)

(編輯：潘明志 英文審校：鐘京梓)

“本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內(nèi)容請(qǐng)以PDF格式閱讀原文”