川參膠囊對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈所致心肌缺血的影響

摘要：目的觀察川參膠囊對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈所致心肌缺血的影響。方法結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支致心肌缺血模型，用川參膠囊分別以0.15 g/kg，0.30 g/kg，0.60 g/kg灌胃給藥14 d，觀察川參膠囊的藥理作用。結(jié)果：川參膠囊對(duì)心肌缺血大鼠的心臟功能有明顯的改善作用，能增強(qiáng)心肌收縮力，改善心肌舒張的順應(yīng)性，表現(xiàn)為心率加快，頸動(dòng)脈血壓、左心室內(nèi)收縮壓、左心室內(nèi)壓±dp/dt明顯增高，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)；模型組與假手術(shù)組比較血青中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脫氫酶(LDH)、心肌肌酸激酶(CK)含量顯著升高，丙二醛(MDA)顯著降低；川參膠囊能明顯減少血青中SOD，LDH，CK含量，增加血清中MDA含量，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)；模型組大鼠出現(xiàn)明顯的心肌缺血和心肌梗死，川參膠囊各組心肌缺血及心肌梗死程度與模型組比較，其病變程度顯著減輕(P＜0.01)，光鏡和電鏡觀察可見(jiàn)川參膠囊能明顯減輕心肌病理?yè)p傷。結(jié)論：川參膠囊對(duì)大鼠結(jié)扎冠狀動(dòng)脈所致心肌缺血損傷具有明顯的保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞：川參膠囊；冠狀動(dòng)脈結(jié)扎；心肌缺血；大鼠

中圖分類號(hào)：R542.2 R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672－1349(2007)09－0842－03

川參膠囊系中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)藥物研究所研制的復(fù)方中藥制劑，經(jīng)臨床試用表明該藥具有活血化瘀，行氣止痛，平肝熄風(fēng)的功效，可用于治療心肌缺血、冠心病、腦動(dòng)脈硬化癥之血瘀氣滯、肝虛風(fēng)動(dòng)證。為明確其藥理作用，現(xiàn)進(jìn)一步觀察川參膠囊對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈所致心肌缺血的影響。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)材料：藥品為川參膠囊藥粉，由本所制劑室提供，臨用前用蒸餾水配成不同濃度備用。陽(yáng)性對(duì)照藥為地奧心血康膠囊(成都地奧制藥集團(tuán)有限公司生產(chǎn))。試劑為紅四氮唑，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，伊文思藍(lán)(Evan’s blue，F(xiàn)luka)進(jìn)口分裝，上海化學(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站經(jīng)銷；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脫氫酶(LDH)及肌酸激酶(CK)試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。儀器，獨(dú)立換氣籠盒(IVC)飼養(yǎng)系統(tǒng)(上海紹豐實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司)；日立KY2000型半自動(dòng)生化分析儀；德國(guó)蔡司Axioskop 40顯微鏡；DH－140動(dòng)物人工呼吸機(jī)(浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器實(shí)驗(yàn)廠)；RM－6280型多道智能生理信號(hào)采集、處理系統(tǒng)，JEM－2000EX透射電鏡。動(dòng)物，SD大鼠80只，雌雄各半，體重(240±20)g，10周齡，由中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：scxk(軍)字第2002－005號(hào)。

1．2 冠狀動(dòng)脈結(jié)扎造模參見(jiàn)文獻(xiàn)[1]方法造模。

1．3 分組術(shù)后第4天選擇冠狀動(dòng)脈結(jié)扎手術(shù)成功(符合實(shí)驗(yàn)要求)的50只動(dòng)物將其隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為模型組、陽(yáng)性藥物組(地奧心血康膠囊0.30 g/kg)及川參膠囊小劑量組(0.15 g/kg)、中劑量組(0.30 g/kg)、大劑量組(0.60 g/kg)。另設(shè)假手術(shù)組10只。各組動(dòng)物每日給藥1次(模型組和假手術(shù)組動(dòng)物給等體積蒸餾水)，連續(xù)給藥14 d。

1．4 評(píng)價(jià)指標(biāo)

1．4．1 心功能檢測(cè)：術(shù)后穩(wěn)定30 min后開(kāi)始記錄采集信號(hào)，觀察心電圖、頸動(dòng)脈血壓、左心室內(nèi)收縮壓、左心室壓力微分±dp/dt的改變。

1．4．2 生化指標(biāo)的測(cè)定，于心功能指標(biāo)檢測(cè)結(jié)束后，頸動(dòng)脈取血5 mL－6 mL，靜置，待血凝后離心(2 500 r/min，15 min)，取血清，按試劑盒標(biāo)示方法用日立KY2000型半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中SOD，MDA含量及LDH和CK活力。

1．4．3 心肌缺血及梗死范圍：頸動(dòng)脈取血后，將0.3％伊文思藍(lán)3.0 mL通過(guò)頸動(dòng)脈注入心臟，開(kāi)胸取出心臟，用生理鹽水沖洗，吸水紙沾去多余水分后稱左心室濕重。在心臟結(jié)扎線以下，平行冠脈溝將心室橫切成相等厚度(3min)的5片，放入用0.1％的磷酸緩沖液(pH 7.4)新配制的10 g/L紅四氮唑溶液中，在37℃恒溫水浴染色15min。梗死部分不被染色，未梗死部分呈藍(lán)色，將未著色的缺血區(qū)域小心切下，并稱濕重。用以下公式計(jì)算缺血心肌占左心室重量的百分比，心肌梗死范圍％＝(未著色的缺血區(qū)域濕重/左心室濕重)×100％。

1．4．4 病理組織學(xué)檢查：切取左心室固定于10％甲醛中固定后，流水沖洗，經(jīng)各級(jí)乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟包埋，切片，HE染色，封固，光鏡觀察其顯微結(jié)構(gòu)。

1．4．5 心肌細(xì)胞超做結(jié)構(gòu)檢，切取左心室固定于3％戊二醛溶液中，經(jīng)各級(jí)丙酮脫水，環(huán)氧丙烷浸透，Epon812包埋，65℃聚合，切片，電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)。

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所測(cè)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，用SPLM軟件以t檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié) 果

2．1 川參膠囊對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎大鼠心功能的影響，川參膠囊大、中、小劑量組灌胃給藥14 d后對(duì)心肌缺血大鼠的心臟功能有明顯改善作用，能增強(qiáng)心肌收縮力，改善心肌舒張的順應(yīng)性，表現(xiàn)為心率加快，頸動(dòng)脈血壓、左心室內(nèi)收縮壓增高，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。

2．2 川參膠囊對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎大鼠血生化指標(biāo)的影響，與假手術(shù)組比較，模型組血清中SOD，LDH，CK含量顯著升高，MDA含量顯著降低。川參膠囊中、大劑量組灌胃給藥14 d均能明顯減少血清中SOD，LDH，CK含量，而血清中MDA含量明顯增加，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。

2．3 川參膠囊對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎大鼠心肌缺血及梗死范圍的影響模型組大鼠出現(xiàn)明顯的心肌缺麻和心肌梗死，川參膠囊各劑量組灌胃給藥14 d，心肌缺血及心肌梗死程度與模型組比較，其病變程度顯著減輕(P＜0.01)，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。

2．4 病理組織學(xué)檢查：鏡下觀察可見(jiàn)假手術(shù)組動(dòng)物心肌排列正常，心臟橫紋清晰，個(gè)別標(biāo)本肌橫紋稍欠清楚，肌核輕度增生，未見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組與假手術(shù)組比較，心肌呈明顯腫脹、變性，肌橫紋消失，部分標(biāo)本肌組織變性、壞死，肌糖原被溶解樣，胞漿幾乎呈空泡化，個(gè)別區(qū)域肌核明顯增生，有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)及灶狀心肌梗死。川參膠囊小、中、大劑量組和地奧心血康組僅個(gè)別動(dòng)物心肌呈輕度變性，區(qū)域肌橫紋不清，肌核輕度增生，而大部分動(dòng)物心肌基本正常；各治療組之間對(duì)比觀察，心肌橫紋等形態(tài)學(xué)改變有一定劑量關(guān)系，即劑量越大其病理改變相對(duì)較輕。

2．5 心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)檢查：電鏡下觀察可見(jiàn)假手術(shù)組動(dòng)物心肌細(xì)胞Z線規(guī)則，肌小節(jié)清晰，肌絲排列規(guī)則、整齊，三聯(lián)體明顯，線粒體嵴清晰，在肌絲束間排列成單排，模型組與假手術(shù)組比較，部分心肌細(xì)胞Z線尚規(guī)則，但肌絲束間線粒體明顯增多，排成多排，肌小節(jié)縮短、肌絲斷裂，少數(shù)肌絲灶性溶解，細(xì)胞內(nèi)水腫電子密度降低，線粒體明顯增大，嵴呈同心圓排列，部分嵴不清晰、三聯(lián)體無(wú)明顯變化，并可見(jiàn)壞死肌纖維，線粒體散布在細(xì)胞外，川參膠囊小、中、大劑量組和地奧心血康組心肌細(xì)胞z線基本規(guī)則，肌小節(jié)尚清晰，肌絲排列基本規(guī)則、整齊，三聯(lián)體的巍池略擴(kuò)張，線粒體嵴基本清晰，部分嵴模糊不清，在肌絲束間多排列成單排。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)采用完全性結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支的方法，造成心肌缺血模型，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，模型組CK，LDH含量明顯升高，心肌細(xì)胞壞死增多，而川參膠囊中、大劑量組CK與LDH含量均低于模型組，這表明川參膠囊能有效緩解缺血對(duì)心肌造成的損傷，使酶的外漏減少，從而對(duì)缺血心肌起到保護(hù)作用。

大量氧自由基的生成是心肌缺血造成損傷的主要機(jī)制之一。心肌缺血時(shí)產(chǎn)生大量的氧自由基，進(jìn)而對(duì)心肌造成損傷。SOD和MDA是目的反映氧自由基損傷的客觀指標(biāo)，隨著心肌缺血程度的不斷加深，對(duì)心肌細(xì)胞具有毒性作用的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物MDA含量逐漸減少，而對(duì)氧自由基具有特異性抑制作用的SOD活性逐漸增高，導(dǎo)致心肌壞死。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，川參膠囊中、大劑量組及陽(yáng)性藥物組能顯著降低心肌缺血大鼠血中SOD活性，同時(shí)增高M(jìn)DA含量，使心肌細(xì)胞壞死明顯減少，具有抗心肌缺血損傷的作用。

左室舒張末壓、左室內(nèi)壓及其最大上升、下降速率(±dp/dt)可綜合評(píng)價(jià)心肌收縮和舒張功能。本實(shí)驗(yàn)采用結(jié)扎法后，用血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)證實(shí)用參膠囊具有顯著改善心肌缺血時(shí)的心肌舒縮功能；心肌梗死范圍可作為觀察心肌缺血的主要指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)同時(shí)采用1％紅四氮唑溶液大體標(biāo)本染色測(cè)量心肌梗死范圍，結(jié)果證實(shí)川參膠囊可明顯縮小冠脈結(jié)扎大鼠的心肌梗死范圍，能不同程度地減輕心肌缺血及心肌梗死程度．減輕心肌缺血的病理改變。提示川參膠囊對(duì)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈所致大鼠心肌缺血損傷具有明顯的保護(hù)作用。

本文編輯 王雅潔