益氣溫陽、活血利水法預防急性肺血栓栓塞的實驗研究

摘要：目的：探討益氣溫陽、活血利水法在預防急性肺血栓栓塞(APTE)的作用及其可行性。方法：48只健康新西蘭大耳白兔，隨機分力4組，每組12只，即空白對照組、栓塞對照組、益氣溫陽活血利水中藥防治組(中藥組)、華法林組。每只兔均經耳緣靜脈取血，制成自體血栓栓子備用。4組均給予常規飼料喂養，中藥組加益氣溫陽活血利水作用的中藥灌胃，含生藥0.8 g/kg，華法林組加華法林溶液胃，0.06 mg/kg，每日1次。空白對照組、栓塞對照組同時給等量生理鹽水灌胃。1周后，分別經右股靜脈注入自體血栓栓子，于栓塞后1 h，4 h采血測定動脈血氣分析、一氧化氮(NO)、內皮素－1(ET－1)、血栓素B₂(TXB₂)，并于4 h后處死兔，進行肺病理學觀察，結果：益氣溫陽、活血利水中藥組栓塞后病理損傷明顯輕于其他組，莊入栓子1 h，4 h后，中藥組NO、血氧分壓(PaO₂)水平均高于栓塞對照組(P＜0.05)，ET－1，TXB₂均低于栓塞對膽組(P＜0.05)，血二氧化碳分壓(PaCO₂)與栓塞對照組無統計學意義，中藥組NO，PaO₂高于華法林組，ET－1低于華法林組，PaCO₂和TXB₂與華法林組無統計學意義。結論：預防性應用益氣溫陽活血利水法可減輕APTE后肺缺血損傷，改善缺氧狀態，調節血管內皮功能，抑制血小板分泌血栓素A₂(TXA₂)。此法在預防APTE方面具有可行性，有效性。

關鍵詞：益氣溫陽活血利水法；急性肺血栓栓塞；內皮旁－1；一氧化氮；血栓素B₂

中圖分類號：R563.5 R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1672－1349(2007)09－0835－03

急性肺血栓栓塞(acute pulmonary thromboembohsm，APTE)是臨床常見的危急重癥，盡管近年來其診治水平有所提高，但死亡率仍很高。國外有關文獻報道APTE死亡率為23％～38％，其中90％在2 h內死亡。因而積極預防肺血栓栓塞有非常重要的意義。由于APTE大多發生于大手術創傷之后，顧慮抗凝預防性治療會引起出血而受到限制。中醫益氣溫陽、活血利水法在防治深靜脈血栓形成取得了很好的療效，并在肺血栓栓塞的預防中顯示出一定的臨床意義。本研究采用自體血栓回輸的方法，通過動物實驗觀察益氣溫陽、活血利水法在預防APTE中的可行性。

1 材料與方法

1．1 材 料

1．1．1 實驗動物：健康新西蘭大耳白兔48只，雌雄各半，體重(2.5±0.3)kg，月齡(4±1)月，河北醫科大學動物實驗室提供。

1．1．2 實驗藥物：中藥購于河北滄州藥材公司，將生附子、黃芪、茯苓等中藥浸泡1 h，文火煎2次混合，煎煮時間3 h以上；干地龍研沫，與前煎劑混勻，制成40％溶液(生藥的濃度)，4℃左右冷藏備用；華法林，規格3 mg，由芬蘭奧立安制藥廠生產，批號1084667。

1．2 方 法

1．2．1 實驗動物的準備：實驗前，在嚴格消毒條件下，自兔耳緣靜脈取血2mL，加入20U凝血酶后，于5mL注射器內，室溫下靜置過夜，形成牢固血栓，4℃左右冷藏備用，做好栓子與兔對應標記。實驗時，動物稱重后，經兔耳緣靜脈緩慢注射20％烏拉坦(1 mg/kg)麻醉；固定于操作臺上，行正中切口，分離和切開頸總動脈，留置導管采血；同時分離右股靜脈，注入血栓栓子。

1．2．2 分組方法及處理：給兔標號，選取隨機數字，隨機分為4組：空白對照組、栓塞對照組、益氣溫陽活血利水中藥防治組(中藥組)和華法林組，每組12只兔。空白對照組、栓塞對照組給予常規兔飼料喂養；中藥組在常規兔飼料喂養的基礎上加用中藥煎劑灌胃，生藥含量0.8 g/kg(人體用藥的等效劑量)，每日1次，華法林組在常規兔飼料喂養的基礎上加用華法林0.06mg/kg(人體用藥的等效劑量)，溶解于5 mL生理鹽水中灌胃，每日1次。空白對照組、栓塞對照組同時給等量生理鹽水灌胃。療程均為1周。

1．2．3 肺血栓栓塞動物模型的建立：分組處理1周后，將術前制備的相對應的血栓栓子置于消毒平皿上，將其全部制成直徑2 mm－4 mm，長5mm～7mm栓子若干，然后用10 mL注射器吸取血栓栓子和生理鹽水3 mL，經右股靜脈導管緩慢注入，隨后注入生理鹽水2 mL，確保栓子全部注入(每只均注入等量的2 mL耳緣靜脈血制成的全部血栓)；空白對照組只注入等體積的生理鹽水5 mL。

1．2．4 實驗指標：分別于造模(注入栓子和/或生理鹽水)后1h，4 h測定動脈血氣分析、一氧化氮(NO)、內皮素－1(ET－1)、血栓素B₂(TXB₂)，并于4 h后立即處死兔，進行肺病理學觀察。NO采用硝酸還原酶法測定，ET－1，TXB₂采用ELISA法測定，均按試劑盒說明操作。

1．3 統計學處理：以SPSS11.0統計軟件對實驗數據進行統計學處理。計量資料以均數±標準差(x±s)表示，組間參數比較采用方差分析，兩兩比較采用q檢驗，P＜0.05為有統計學意義。

2 結 果

2．1 肺組織病理學改變

2．1．1 大體標本觀察空白對照組肺臟表面光滑均一，呈淡粉紅色；栓塞對照組和華法林組相似，可見肺組織充血、腫脹，表面可見點片狀出血灶，呈雙側性分布，下肺野病變重于上肺野；中藥組病理改變同栓塞對照組、華法林組，但程度較輕。

2．1．2 光鏡下病理切片觀察：空白對照組可見肺泡壁薄，肺泡膨脹好，肺泡與肺間質未見炎細胞浸潤及出血；栓塞對照組和華法林組相似，可見肺泡周圍有大量炎細胞浸潤，肺泡及間質內可見有局灶性出血，肺動脈內可見注入的血栓凝塊，血栓凝塊周圍有少量的纖維素血栓形成；中藥組可見肺泡周圍有少量炎細胞浸潤，肺胞及間質內可見有局灶性出血，肺動脈內可見注入的血栓凝塊，血栓凝塊周圍未見纖維索血栓形成。

2．2 觀察組各指標變化。

3 討 論

APTE與下肢深靜脈血栓形成(DVT)是一個疾病的兩個不同階段，70％肺栓塞的血栓來自下肢深靜脈，50％的DVT的病人發生了肺栓塞。本實驗應用自體靜脈血制成靜脈血栓栓子，并經股靜脈將其緩慢注入，較好地模擬人體肺血栓栓塞發生過程，從空白對照組和栓塞對照組實驗結果分析，造模成功。

近年來研究表明APTE的病理生理學變化由解剖學上的肺血管床面積減少與神經、體液因素參與的兩部分組成，其中神經體液因素是造成肺組織進一步損傷的主要原因。NO與ET－1是內皮細胞分泌的一對血管活性物質。APTE時，NO/ET失衡，ET升高，NO降低，導致肺支氣管及血管收縮增強，引起肺動脈高壓、肺通透性增加，加重肺水腫和缺血缺氧，進一步加重血管內皮與肺組織損傷，形成惡性循環。本研究表明APTEt時，栓塞對照組NO/ET失衡與以往研究結果一致；中藥組和華法林組結果提示，益氣溫陽活血利水中藥能調節APTE時NO/ET平衡，推測與保護肺血管內皮、提高組織的抗缺氧能力、防止缺血再灌注損傷有關，而預防性應用華法林不能減輕發生APTE的肺損傷。

TXA₂是血小板聚集、釋放和平滑肌收縮的有效誘導劑，由于TXA₂生物半衰期短，難以測定，目前以測定TXB₂來判定其濃度。本實驗提示：AETE后TXA₂迅速升高，這與文獻[9，10]報道一致，升高的TXA₂導致肺小動脈強烈收縮，并可能促進APTE后新血栓的形成，這可能是肺血栓栓塞后肺損傷進一步加重的原因之一。益氣溫陽活血利水中藥防治組TXB₂水平明顯低于栓塞對照組(P＜0.05)，與華法林防治組相似，提示預防性應用益氣溫陽活血利水中藥可能通過抑制血小板分泌TXA₂而減輕APTE后肺損傷。

肺血栓栓塞常見于久臥、大手術后病人，表現為突發喘息、胸痛、咯血、咳嗽、水腫、發紺、出汗等。中醫認為本病為久臥傷氣，創傷之后陽氣更虛，水濕內停，氣血運行不暢，心肺閉阻而發病。益氣溫陽、活血利水法方藥由附子、黃苠、茯苓、地龍等組成，具有振奮心陽、宣肺利水、補氣活血功效。從血氣分析結果與病理解剖來看，預防性應用益氣溫陽、活血利水法能改善AFFE后缺氧狀態，減輕肺水腫。機制可能為其有效抗血小板聚集，抑制血小板分泌TXA₂，減輕APTE后繼發血栓形成；拮抗神經內分泌的激活，調節APTE時NO/ET平衡，減輕氣血比例失調，從而改善癥狀。華發林可以預防血栓形成，但對已發生的APTE不具有肺的保護作用。本實驗證實益氣溫陽活血利水法在預防肺血栓栓塞中具有可行性、有效性。

本文編輯 王雅潔