黃皮甲醇提取物的抑真菌作用

摘要 采用生長速率法測定了黃皮植株甲醇提取物對香蕉炭疽病菌等12種植物病原真菌的生物活性，研究結果表明：黃皮植株甲醇提取物，對香蕉炭疽病菌和辣椒炭疽病菌等有一定的活性；在10mg/mL的濃度下，黃皮果核、樹皮、枝葉和花索的甲醇提取物，對香蕉炭疽病菌菌絲生長的抑制率分別為88.83％、84.61％、72.23％和50.11％；黃皮果核甲醇提取物對香蕉炭疽病菌的EC₅₀為4.34 mg/mL。黃皮果核甲醇提取物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取組分對香蕉炭疽病菌的活性研究表明，氯仿層的活性最高，抑制率為86.11％。黃皮果核甲醇提取物的氯仿萃取物對香蕉炭疽病菌的EC₅₀為2.37 mg/mL。

關鍵詞 黃皮；香蕉炭疽病菌；抑真菌活性

中圖分類號 S482.292

黃皮為蕓香科(Rutaceae)黃皮屬(Clausena)植物，具有廣泛的藥理活性，國內外學者對此進行了深入的研究。本屬植物全世界約有30種，分布于熱帶、亞熱帶地區，我國有近10種，分布于長江以南各省，以云南南部、廣東、廣西、四川、海南及臺灣等省分布較為集中，資源豐富，中藥中應用較廣。該屬植物在我國自古即為藥用，古代及現代的中草藥書籍中多有收載，民間應用更為廣泛。藥理研究表明：黃皮屬植物具有保肝、降脂、解痙、抑菌及抗癌等生物活性。本文就黃皮甲醇提取物對幾種植物病原真菌的抑制作用報道如下。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 植物材料

采自華南農業大學殺蟲植物標本園內，經鑒定為黃皮[Clausena lansium(Lour．)Skeels]。

1．1．2 供試菌種

稻瘟病菌(Pyricularia grisea)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici)、水稻紋枯病菌(Rhizoctoniasolani)、香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)等為本實驗室保存菌種；玉米莖基腐病菌(Fusarium rose- um f.sp.cerealis)、玉米大斑病菌(Exserohilumturcicum)、小麥根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)、蔥紫斑病菌(Alternaria porii)、棉花黃萎病菌(Verticilliumdahliae)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfetum)為華南農業大學植物病理學系提供。

1．2 試驗方法

1．2．1 甲醇提取物的制備

將采集的新鮮黃皮果核、樹皮、枝葉和花索分別陰干，50℃烘干，經粉碎機粉碎(40～60目篩)，所得植物粉用密封袋于遮光處保存備用。定量稱取黃皮果核、莖和葉柄粉，用甲醇在避光處浸泡提取，濾液用旋轉蒸發儀濃縮至于，4℃冰箱中保存備用。

1．2．2 生物活性測定方法

采用菌絲生長速率法，用10％丙酮將植物提取物配制成一定濃度的供試藥液，制成所需濃度的帶毒培養基；以混入相同體積的lO％丙酮作為對照。在直徑為7.5 cm的培養皿內加入適量PDA培養基，接人供試病菌培養。待菌絲即將長滿整個培養皿時，在培養皿邊緣菌絲生長旺盛處用打孔器打取直徑為0.5 cm的菌餅，接種于帶毒培養基中央(有菌絲的一面向下)，每培養皿放置1個菌餅，每處理重復3次。置于25℃電熱恒溫培養箱黑暗培養。采用十字交叉法測定菌落直徑，按以下公式計算抑制率：

抑制率＝[(CK菌落直徑-0.5)-(處理菌落直徑-0.5)]/(CK菌落直徑-0.5)×100％。

1．2．3 抑菌譜的測定

以香蕉炭疽病菌、辣椒炭疽病菌等12種病原真菌為供試病菌，用1.2.2的方法，在10 mg/mL濃度下，測定黃皮植株甲醇提取物的抑菌作用效果。

1．2．4 黃皮抑菌活性物質的初步分離

用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇分別萃取黃皮果核甲醇提取物，合并相應提取液，旋轉蒸發儀濃縮至干。測定不同萃取組分在5 mg/mL的濃度下對香蕉炭疽病菌的活性。

2 結果與分析

2．1 黃皮植株粗提物的抑菌效果

從表1可以看出，黃皮植株甲醇提取物均有一定的抑菌活性，在10 mg/mL的濃度下，對12種植物病原病菌等存在一定的抑制活性，其中黃皮植株甲醇提取物對香蕉炭疽病菌和辣椒炭疽病菌菌絲的生長抑制率分別為85.53％和81.32％。

2．2 黃皮果核甲醇提取物對香蕉炭疽病菌的抑制

作用

結果表明(表2)，不同濃度黃皮果核甲醇提取物均對香蕉炭疽病菌有一定的抑制作用，1.25 mg/mL的濃度下的抑制率分別為32.21％，而20 mg/mL的濃度下抑制率為93.57％。抑制率與甲醇提取物濃度成正相關。黃皮果核甲醇提取物對香蕉炭疽病菌的EC₅₀為4.34 nag/mL。

2．4 黃皮果核甲醇提取物的萃取成分對香蕉炭疽

病菌的活性

結果表明(表3)，在5 mg/mL的濃度下，氯仿、正丁醇層、石油醚和乙酸乙酯均對香蕉炭疽病菌有一定的抑制活性，抑制率分別為86.12％、81.34％、65.69％和10.53％，氯仿層的活性明顯高于其他萃取層。而水層卻存在促進生長活性，水相的抑制率為-12.64 9/6。

2．5 黃皮果核甲醇提取物的氯仿萃取物對香蕉炭

疽病菌的活性

結果表明(表4)，不同濃度的黃皮果核甲醇提取物的氯仿萃取物均對香蕉炭疽病菌有一定的抑制作用，0 .312 5 mg/mL的濃度下的抑制率為10.20％，而5 mg/mL的濃度下抑制率為85.08％。抑制率與濃度成正相關。各個濃度的抑制率之間有顯著的差異。

3 討論

目前，醫藥界對黃皮各組織的化學成分均已進行了研究，并作了相關報道。但這些研究大多是醫藥界為了確定其藥用價值而進行的，應用于農業上的研究較少。朱亮鋒等曾對齒葉黃皮果核的精油進行了化學成分的鑒定，其精油的愛草腦含量高達93.1 9/5，對7種霉菌具有較強的抑菌活性。

已有醫學工作者指出川黃柏樹皮、果核和愈傷組織對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌都有較好的抑菌效果。A.Chakraborty等研究了黃皮中咔唑類生物堿的抑菌活性，結果表明：這類化合物不僅對革蘭氏陰性、陽性菌有良好的抑制活性，同時對真菌也有明顯的抑制活性。說明此類化合物具有潛在的抗菌應用價值，將黃皮提取物應用于農業植物病害的防治上將為殺菌劑的發展開辟一條新路。

本研究結果表明黃皮果核的甲醇提取物對香蕉炭疽病菌的EC₅₀為4.34 mg/mL。進一步用氯仿萃取黃皮果核甲醇提取物，在5 mg/mL的濃度下，對香蕉炭疽病菌菌絲生長的抑制率為85.08％，氯仿層對香蕉炭疽病菌的EC₅₀為2.13 mg/mL，比同濃度的黃皮果核甲醇粗提物活性提高了1.70倍。

本研究證實黃皮果核的甲醇提取物中含有具有抑真菌活性的次生物質，進一步研究表明，該活性物質溶于氯仿、石油醚、正丁醇等有機溶劑，對香蕉炭疽病病原菌敏感，對進一步開發利用黃皮資源具有一定的指導意義，但是關于他的作用方式、作用機理有待于進一步的研究。