多倍體萱草的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)

摘要：以多倍體萱草的芽和花蕾為外植體，以Ms為基本培養(yǎng)基，進(jìn)行組織培養(yǎng)與快速繁殖的研究。結(jié)果表明，MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L為最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基，MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.01mg/L為較好的增殖培養(yǎng)基。1/2mS+NAA0.02mg/L為較好的生根培養(yǎng)基，用腐葉土和珍珠巖4：1比例做基質(zhì)移栽苗成活率可達(dá)80％以上。

關(guān)鍵詞：多倍體萱草；組織培養(yǎng)；快速繁殖

中釁分類號(hào)：S682.1⁺9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1006—6500(2008)03—0045—03

多倍體萱草又名大花萱草，是百合科萱草屬宿根花卉，為萱草變種。它以花大色艷、花姿優(yōu)美、適應(yīng)性強(qiáng)、管理簡(jiǎn)便而倍受人們青睞。我國(guó)于20世紀(jì)70年代中期從美國(guó)引入，由于它具有既耐熱又耐寒的特點(diǎn)，在南北各地的綠化美化中均有著廣泛的發(fā)展前景。目前，多倍體萱草繁殖以分株為主，不僅需要大片的土地和栽培母株，而且繁殖系數(shù)低、周期長(zhǎng)，限制了新品種的應(yīng)用速度。采用組織培養(yǎng)方法可以大大地提高繁殖系數(shù)，短時(shí)間內(nèi)就可以生產(chǎn)出大量的種苗投放市場(chǎng)，加快了新品種的應(yīng)用步伐。

1 材料和方法

1.1 材料

大花萱草取自天津花圃，取自然生長(zhǎng)狀態(tài)下分蘗芽和花蕾作外植體。

誘導(dǎo)培養(yǎng)基：(1)Ms+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；(2)MS+6-BA0.5mg/L+NAA2.0mg，L；(3)MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L。

增殖培養(yǎng)基：(1)MS+6 BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L；(2)MS+6-BA1mg/L+NAA0.5mg/L；(3)MS+6 BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L；(4)MS+6-BA0.5mg/L。

生根培養(yǎng)基：(1)1/2 MS+NAA0.1mg/L+0.2％活性炭；(2)1/2 MS+NAA0.05mg/L+0.2％活性炭；(3)1/2 MS+0.2％活性炭。

以上培養(yǎng)基均加蔗糖2％，瓊脂0.6％，pH5.8～6.0。

1.2 方法

分蘗芽先去除葉片和花蕾一起用自來水沖洗干凈，在超凈工作臺(tái)上用75％酒精表面消毒30s，再用0.1％升汞消毒6～7min，用無菌水沖洗4～5次，花蕾切成0.1cm的小塊，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，置于25℃、光強(qiáng)2 001x、光照10h/d的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出芽后，切割叢芽轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基中作繼代培養(yǎng)，在增殖培養(yǎng)基中不斷繼代培養(yǎng)，根據(jù)生產(chǎn)需要試管苗增殖達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，切下增殖培養(yǎng)中較大的芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根，生根后試管苗移入栽培基質(zhì)假植煉苗，成活后正常養(yǎng)護(hù)，并記錄植株的成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比對(duì)外植體誘導(dǎo)的影響

由表1可以看出，用多倍體萱草的芽、花蕾作外植體，均以MS為基本培養(yǎng)基，添加6-BA 2.0mg/L和NAA 0.2mg/L的培養(yǎng)基誘導(dǎo)效果好，但以芽為外植體萌動(dòng)早，約20d左右形成愈傷組織，40d后就可以分化出芽。以花蕾作外植體萌動(dòng)晚，25d以上形成愈傷組織，50d左右分化出芽。但以花蕾作外植體成活率高。

2.2 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)試管苗增殖的影響

對(duì)誘導(dǎo)出的芽進(jìn)行繼代培養(yǎng)，在以MS為基本培養(yǎng)基，添加6-BA 0.5mg/L和NAA 0.01mg/L的培養(yǎng)基中增殖效果最好，增殖倍數(shù)可達(dá)3～4倍，且芽生長(zhǎng)健壯(表2)。

2.3 不同培養(yǎng)基對(duì)試管苗生根的影響

切取生長(zhǎng)健壯的芽接種于添加3種不同NAA濃度的1/2MS培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，每組處理組合接種30株，經(jīng)15d的培養(yǎng)后觀察生根情況，結(jié)果見表3。從表3可以看出，添加NAA0.05mg/L的1/2MS培養(yǎng)基是促進(jìn)生根的較佳培養(yǎng)基，生根率達(dá)86％。

2.4 試管苗的移栽

將試管生根苗從培養(yǎng)瓶中取出，用清水洗凈培養(yǎng)基移栽于經(jīng)不同處理的不同基質(zhì)中，栽后置于溫室內(nèi)保持空氣相對(duì)濕度70％以上10d。每處理組合移栽200株，重復(fù)3次，調(diào)查成活率，結(jié)果見表4、表5。

從表4中可以看出，試管苗移栽基質(zhì)經(jīng)消毒處理后試管苗的成活率均達(dá)到75％以上，尤以消毒處理的腐葉土：珍珠巖=4：1為配比的基質(zhì)，試管苗的移栽成活率最高，達(dá)到85％以上。

從表5中可以看出，采用不同消毒方法處理的基質(zhì)對(duì)移栽成活率有影響。以蒸汽消毒20min和500倍40％的五氯硝基苯噴施后燜24h處理的基質(zhì)試管苗的移栽成活率高，均達(dá)到85％以上。但在工廠化生產(chǎn)中蒸汽消毒比較困難，成本高，而藥劑消毒更容易操作。從表4、表5中可以得出，以用500倍40％的五氯硝基苯消毒的腐葉土：珍珠巖=4：1配比的基質(zhì)萱草試管苗的移栽效果好。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用了植株的芽和花蕾做外植體，均獲得了較好的誘導(dǎo)效果，試驗(yàn)結(jié)果表明，MS+6-BA2.0mg/L+NAAO.2mg/L是多倍體萱草較佳的誘導(dǎo)培養(yǎng)基；Ms+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L是其較好的增殖與分化培養(yǎng)基；而1/2 MS+NAA0.02mg/L則是其較為有效而簡(jiǎn)便的生根培養(yǎng)基，幼苗移栽時(shí)消毒的腐葉土和珍珠巖以4：1的配比能夠獲得較好的植株成活率和生長(zhǎng)良好的小苗。

參考文獻(xiàn)：

[1]裘文達(dá).園藝植物組織培養(yǎng)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1986：50—54.

[2]徐兆義，劉兆偉，許紀(jì)龍，等.“蘋果棗”試管苗商業(yè)化生產(chǎn)工藝技術(shù)[J].林業(yè)實(shí)用技術(shù)，2002(2)：40

[3]申巖，吳國(guó)智，郝硯英，等.切花寒丁子的組織培養(yǎng)技術(shù)[J].天津園林，2004(2)：20—22.

[4]蘇浴源，武永禎，曲占禮，等.仙客來幼芽組織培養(yǎng)的研究[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2002，17(增)：203—205.