五種貴州常用農(nóng)藥對滅蚊真菌貴陽腐霉及致倦庫蚊的影響

摘要：觀察5種貴州常用農(nóng)藥(敵敵畏、敵殺死、甲氰菊酯、氰戊菊酯、乙酰甲胺磷)對貴陽腐霉菌絲生長的抑制作用，計算出各農(nóng)藥在SFE培養(yǎng)基上分別抑制貴陽腐霉菌絲體生長率10％和50％的濃度(IC₁₀和IC₅₀)；并采用生物測定方法，測定這5種農(nóng)藥對本實驗室飼養(yǎng)的致倦庫蚊半數(shù)致死濃度(LC₅₀)。結(jié)果表明，敵殺死對貴陽腐霉的毒力最強(IC₅₀值最小)，其余按毒力遞減排列為：甲氰菊酯、敵敵畏、乙酰甲胺磷、氰戊菊酯；LCC₅₀值的比較說明，敵殺死對致倦庫蚊的毒力最強，其余按毒力遞減排列為：敵敵畏、甲氰菊酯、氰戊菊酯、乙酰甲胺磷；并且這5種農(nóng)藥對致倦庫蚊的LCC₅₀遠低于其對菌絲體的IC₅₀。

關(guān)鍵詞：貴陽腐霉；農(nóng)藥；蚊蟲；綜合治理

中圖分類號：S481.9文獻標識碼：A文章編號：1006—6500{2008)03—0047—04

蚊蟲是重要的醫(yī)學(xué)昆蟲之一。它不但能叮刺、吸血、騷擾人群，影響正常生活，還是多種病原體的傳播媒介，嚴重危害人畜健康。常見蚊媒病有瘧疾、絲蟲病、登革熱、流行性乙型腦炎等，除上述外，還有黃熱病、西尼羅熱、東方馬腦炎、西方馬腦炎、委內(nèi)瑞拉馬腦炎、圣路易腦炎、基孔肯雅熱等。

控制蚊媒病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是治療病人和防治蚊蟲。到目前為止，防治蚊蟲的主要手段還是使用化學(xué)殺蟲劑。然而，經(jīng)過半個多世紀的大面積無節(jié)制使用化學(xué)合成殺蟲劑所帶來的“3R”問題，即：Resistance(抗性)、Residues(殘留)、Resurgence(再猖獗)日益突出，嚴重污染環(huán)境，破壞生態(tài)環(huán)境、危害人類的健康生存?；瘜W(xué)農(nóng)藥給世界經(jīng)濟造成的直接和間接損失是驚人的。我國化學(xué)合成殺蟲劑的使用量也在世界前列?；瘜W(xué)防治蚊蟲的危害被逐漸認識，因此，從20世紀末期，蚊蟲防治開始走上了綜合治理的道路。其中采用蚊蟲病原微生物防治蚊蟲的方法越來越得到重視。但是目前能用于蚊蟲防治的微生物種類有限。為適應(yīng)不同生態(tài)環(huán)境，針對不同媒介蚊蟲的控制的需要，必須大力開發(fā)新的滅蚊微生物。

貴陽腐霉(Pythium guiyangense Su)是蘇曉慶教授1994年在貴陽醫(yī)學(xué)院土壤中分離得到的一株滅蚊真菌，屬于鞭毛菌亞門、卵菌綱、霜霉目、腐霉科、腐霉屬。經(jīng)過十幾年的觀察和大量的試驗已證明貴陽腐霉具有滅蚊能力強、滅蚊譜廣、繁殖速度快、易于人工培養(yǎng)、可移植性強、對非靶生物相對安全、能耐受的酸堿范圍廣、還能耐受貴陽地區(qū)的極端溫度(-4～35℃)等諸多優(yōu)點，是一株極具開發(fā)前景的生物滅蚊真菌，并得到國家發(fā)明專利保護(專利號ZL 200510003027.7)。

貴陽腐霉是在蚊蟲孳生的水體中起作用。但由于農(nóng)業(yè)上廣泛使用的農(nóng)藥可被雨水或灌溉水帶到蚊蟲孳生的水體中，從而可能對其中的貴陽腐霉產(chǎn)生影響。水體中的農(nóng)藥濃度可能變異很大，而且多數(shù)情況下可能受到稀釋。但是如果農(nóng)藥使用量過多，次數(shù)頻繁，會使水體中農(nóng)藥含量增多。為了解含農(nóng)藥的水環(huán)境中貴陽腐霉可能出現(xiàn)的情況，本研究重點觀察了5種貴州常用農(nóng)藥(主要是菊酯類和有機磷兩大類)對貴陽腐霉的影響。同時也觀察了致倦庫蚊幼蟲對這些農(nóng)藥的敏感性。

1 材料和方法

1.1 材料

貴陽腐霉(Pythium guiyangense Su)是1994年在貴陽醫(yī)學(xué)院土壤中分離的，經(jīng)轉(zhuǎn)化后接種于SFE(葵花籽抽提物)培養(yǎng)基和KPYG2培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，每5～7d轉(zhuǎn)種一次，每3個月復(fù)壯并保種一次，培養(yǎng)于(25+1)℃的恒溫培養(yǎng)箱中。

本研究所用的5種農(nóng)藥皆為市場銷售產(chǎn)品。敵敵畏：含量80％乳油，四川省好利爾生物化工有限公司生產(chǎn)。敵殺死：含2.5％溴氰菊酯乳油，四川福建農(nóng)用化工有限公司分裝。甲氰菊酯：含量20％，江西施普潤農(nóng)化有限公司生產(chǎn)。氰戊菊酯：含量20％乳油，甘肅省華實農(nóng)業(yè)科技有限公司生產(chǎn)。乙酰甲胺磷：含量30％，重慶農(nóng)藥化工有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 5種農(nóng)藥對貴陽腐霉菌絲體生長的影響

(1)農(nóng)藥濃度的選定。對敵敵畏、敵殺死、甲氰菊酯、氰戊菊酯4種農(nóng)藥，在推薦濃度的50％～200％范圍內(nèi)，設(shè)立多個濃度進行觀察，最終篩選一個最佳濃度作為自定義濃度，以這個自定義濃度的10％～200％之間設(shè)5個濃度進行觀察。而在乙酰甲胺磷的推薦濃度中菌絲體不能生長，所以在推薦使用濃度的10％～20％范圍內(nèi)，設(shè)立一個自定義濃度，經(jīng)加入培養(yǎng)基后使其終濃度分別達到自定義濃度的50％，75％，100％，150％，200％。選取這5個濃度進行觀察。

(2)試驗設(shè)計。按傳統(tǒng)方法制備SFE瓊脂培養(yǎng)基，高壓滅菌20min，移入無菌超凈臺中，待燒瓶溫度下降到40～50℃時，迅速用微量移液器向各分裝燒瓶中加入用無菌雙蒸水稀釋的不同濃度的農(nóng)藥，迅速倒平板(直徑90mm、厚度2mm)備用。每一種農(nóng)藥的每一個濃度觀察3個培養(yǎng)。各組均設(shè)無農(nóng)藥對照組，重復(fù)3次。將載有生長3～5d貴陽腐霉菌絲體的無農(nóng)藥SFE瓊脂培養(yǎng)基，在無菌條件下切取1cm×cm²瓊脂塊，菌絲體向下，接種于已準備好的不同農(nóng)藥濃度的平板上，置(25±1)℃培養(yǎng)，并分別于第2，3，4天測量菌斑直徑(mm)，以該直徑的平均增長速度(mm/d)表示菌絲的生長速度。

(3)數(shù)據(jù)處理。試驗共計觀察了270個培養(yǎng)皿，獲得810個測量數(shù)據(jù)，全部用SPSS統(tǒng)計軟件處理。計算出無農(nóng)藥對照組中菌絲平均生長速度及每種農(nóng)藥在各種濃度中菌絲平均生長速度，再按下式計算出試驗組的菌絲生長平均抑制率(IRA)。

抑制率(％)=[(對照組菌絲體平均生長速度一試驗組菌絲體平均生長速度)×100]÷對照組菌絲體平均生長速度

求出每種農(nóng)藥的菌絲平均抑制率與濃度對數(shù)(log₁₀)的回歸方程，再分別求出各農(nóng)藥對SFE培養(yǎng)基中貴陽腐霉菌絲體生長抑制10％和50％的濃度估計值，即：IC₁₀和IC₅₀。

1.2.2.5 種農(nóng)藥對致倦庫蚊(Culex quinquefaciatus Say)的毒力測定蚊蟲培養(yǎng)條件為溫度(25±1)℃，RH64％，光照L：D=14h：10h，幼蟲食物為兔肝粉。試驗用致倦庫蚊皆為晚2齡或早3齡的幼蟲。由于各農(nóng)藥的毒力不一樣，對各農(nóng)藥選定一個自定義濃度，并分別在自定義濃度的1/20000～1/100范圍內(nèi)各取5個不同的濃度作為測試濃度。

取一次性水杯，每組試驗3杯，每杯放100mL過夜自來水、20只致倦庫蚊幼蟲、4％新鮮兔肝粉懸液6滴、各組加入各農(nóng)藥使其達到預(yù)定的測試濃度。并設(shè)立空白對照組，置于(25±1)℃，連續(xù)觀察3d，記錄死亡數(shù)，計算校正死亡率，繪制死亡率曲線，求出不同農(nóng)藥對致倦庫蚊的LC₅₀。

2 結(jié)果與分析

由表1可知，敵殺死對貴陽腐霉的IC₁₀o和IC₅₀最低，說明它對貴陽腐霉的毒力最高。其余按毒力遞減排列為：甲氰菊酯、敵敵畏、乙酰甲胺磷、氰戊菊酯。5種農(nóng)藥對貴陽腐霉的IC₅₀大多數(shù)低于其推薦使用濃度(表1)。農(nóng)藥對致倦庫蚊的LC₅₀又遠低于其對貴陽腐霉菌絲體的IC₅₀。其中敵殺死對致倦庫蚊的LC₅₀還不到抑制貴陽腐霉菌絲體IC₅₀的0.1％(表2)。

3 結(jié)論

農(nóng)藥是滅蚊真菌貴陽腐霉將要面臨的重要環(huán)境因素之一。Merriam和Axtell曾觀察了15種美國常用的殺蟲劑、除真菌劑和除草劑對著名滅蚊真菌大鏈壺菌NC和LA分離株的抑制作用。鄒復(fù)診和蘇曉慶也觀察了6種貴州常用農(nóng)藥對大鏈壺菌的影響。為大鏈壺菌的田間使用提供了重要的環(huán)境因素的參考資料。本研究采用貴州普遍使用的5種農(nóng)藥進行試驗，觀察它們對貴陽腐霉的影響。結(jié)果表明，貴州常用的這5種農(nóng)藥對貴陽腐霉都有抑制作用。這對于將來貴陽腐霉的實際應(yīng)用有重要的參考價值。

所觀察的5種農(nóng)藥對貴陽腐霉菌絲體的IC₅₀大多數(shù)低于其推薦使用濃度，即如按推薦濃度施用這些農(nóng)藥，將對環(huán)境中的貴陽腐霉起明顯的抑制作用。

在農(nóng)藥滅蚊試驗中觀察到這些農(nóng)藥對蚊幼蟲的LC₅₀遠低于其對貴陽腐霉的抑制濃度，說明這幾種農(nóng)藥在施用很低的濃度時就可以殺死蚊蟲而不影響貴陽腐霉。這為制備既含少量可以快速擊倒蚊蟲的化學(xué)殺蟲劑，又含對生態(tài)友好的可以長期制約蚊蟲的貴陽腐霉的配方滅蚊劑提供了理論依據(jù)。

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