一起豬流感的診治

姚 靜 范 鋒 周慶新 毛愛民

摘要針對無錫市惠山區某規模化養豬場豬群發病的臨床癥狀、發病情況、病理變化,初步診斷為豬流感,并對其進行了防治。在此基礎上,就其傳播途徑、診斷方法以及防治措施等展開討論。

關鍵詞豬流感;癥狀;病理變化;診斷;防治

中圖分類號S851.3文獻標識碼B文章編號 1007-5739(2009)09-0256-01

豬流感(swine Influenza,SI)是由豬流感病毒(SIV)引起的一種豬的急性、高度接觸性呼吸道傳染病。SIV引起的臨床癥狀與人流感相似,病豬表現為高熱(40.5～41.7℃)、精神沉郁、食欲不振、呼吸困難、咳嗽等,典型的發病還可見打噴嚏、流鼻涕等癥狀,并迅速蔓延整個豬群。單純的豬流感病毒感染表現為發病率高(100%),死亡率低(約5%),其嚴重程度與流行毒株、豬只日齡和健康狀況、環境條件及細菌性繼發感染相關。如不及時確診、治療,經常會伴有豬副嗜血桿菌、巴氏桿菌等細菌性繼發感染,使病情加重。豬流感病毒主要存在于病豬和帶毒豬的呼吸道分泌物中,經排出后污染環境并交叉循環感染,蒼蠅、老鼠以及唾液、空氣流通等都能造成本病的傳播。本病常發生于晚秋、早春及寒冷的冬季,但在近年來,由于集約化的豬場增多,在火熱的夏季,氣候驟變、密度過大、通風不良、陰雨連天等都會造成豬流行性感冒的暴發流行。如不及時治療,能使病情變復雜,繼發巴氏桿菌、嗜血桿菌、肺炎性鏈球菌等,使死亡率增高,如果不及時控制,由此引發的經濟損失會更為慘重。

1發病情況

無錫市惠山區某規模化養殖場,存欄基礎母豬1 383頭,育肥豬2 447頭,育成豬和哺乳仔豬3 630頭。10月份天氣突變,氣溫驟降,連續陰雨,晝夜溫差加大。首先是育成豬發病,主要表現為體溫上升、食欲明顯下降或廢絕,呼吸道感染癥狀明顯,隨后哺乳仔豬、育肥豬相繼發病,死亡率以哺乳仔豬最高,其次是育成豬,而育肥豬和母豬沒有死亡,僅少數懷孕母豬發生流產、早產、弱仔和死胎。

2臨床癥狀

最初發病的是育肥豬,潛伏期很短,2d內集中全群發病,測試體溫40.5～41.5℃,個別豬高達42℃以上,表現為食欲廢絕,精神萎靡,成群地臥地一角,不愿走動,流清鼻液或稠鼻液,有時鼻液帶有血色,眼分泌物增多,眼結膜潮紅,咳嗽,呼吸加快,個別病例轉為慢性病例,常因持續咳嗽、消化不良和進行性消瘦而死亡。部分妊娠母豬表現為流產、早產、產死胎和產出弱仔數增多。大部分患病豬只的癥狀4～5d后消失,7～10d內自然康復,但哺乳仔豬出現約1%的死亡率。

3剖檢病理變化

未發病豬未見明顯病理變化,病死豬病理變化為:呼吸道可見鼻、咽、喉、氣管、支氣管黏膜充血、腫脹;表面覆蓋大量黃白色粘稠的液體。肺部心葉、尖葉、隔葉下緣變、變韌,氣腫與塌陷。心內外膜出血,且稍有腫大。肝臟腫大,邊緣鈍圓,有充血現象;肝臟表面散狀分布針尖大小的白色結節。腎臟輕微腫大,顏色褐黃,質地較軟,切面隆起,邊緣外翻;部分病例有點狀出血。脾臟淤血、腫大,局部有梗死灶。大腸有斑塊狀出血。胃大彎處充血嚴重。淋巴結腫大。

4診斷

4.1初步診斷

根據發病情況、臨床癥狀、病理變化以及天氣驟變時突然發病,迅速波及全群;病豬高熱、鼻液增多、咳嗽和呼吸困難等發病特點,初步診斷為豬流感。

4.2RT-PCR診斷

4.2.1樣品采集。病死或撲殺豬,取肺、扁桃體和腦等組織備用;待檢活豬,用注射器取全血5mL,血凝后取血清備用;要求送檢病料新鮮,嚴禁反復凍融病料。

4.2.2引物設計。鑒別H1和H3亞型的2套引物序列為:HF1:5′-GGGACATGTTACCCAGGAGAT-3′,HR1:5′-G CATTGTATGTCCAAATATCCA-3′,HF3:5′-TATGCCT G GTTTTCGCTCAA-3′,HR3:5′-TTCGGGATTACAGTT T GTTG-3′。第1套引物擴增片段長度為1 006bp,為H1亞型特異性;第2套引物擴增片段長度為663bp,為H3亞型特異性。

4.2.3病毒RNA的提取及逆轉錄。0.5g組織病料或100μL血清和1mL Trizol加于1.5mL離心管,輕微振蕩數次,室溫放置5min;加200μL氯仿,振蕩混勻,4℃下12 000rpm離心10min,取上清加入500μL異丙醇,室溫放置10min后12 000 rpm,離心15min,棄上清,用DEPC水配置的700μL乙醇洗滌沉淀2次,棄去乙醇,沉淀置于37℃溫箱烘干。干燥后加3μL DEPC水。提取的病毒RNA作為RT-PCR模板用于反轉錄試驗或置-20℃保存備用。逆轉錄反應按常規方法進行。

4.2.4PCR擴增。反應體系為25μL,取反轉錄產物2μL,分別加10×PCR buffer 2.5μL,稀釋為0.02mmoL/L的上下游引物各1μL、2.5mmoL/L的dNTP 2μL,Taq DNA聚合酶為2.5U,用滅菌超純水補足至25μL,混勻后按以下程序進行反應,95℃預變性3min,然后94℃變性1min,54℃退火45s,72℃延伸45s,共進行35個循環。

4.2.5鑒別診斷。對豬圓環病毒2型、豬呼吸與繁殖綜合征(下轉第259頁)

(上接第256頁)

病毒、豬瘟純化病毒及空白對照進行同樣步驟的RNA提取和RT-PCR擴增,同時以H1、H3、H5和H9亞型豬流感病毒為陽性對照。

4.2.6結果判定。通過RT-PCR方法的擴增結果可見,該病毒為H1亞型流感病毒,利用H3的特異性引物不能擴增獲得HA,而通過H1特異的引物進行擴增,則可見1.7kb的陽性條帶,從而判定該豬場為H3亞型豬流感病毒感染。

5綜合防治

初步診斷為疑似豬流感,馬上封鎖隔離,嚴禁妊娠舍、保育舍等飼養員串棟,全場用滅毒王每天進行1次帶豬消毒。發病無食欲豬上午用復方SD甲氧嘧啶(SMM)0.2mL/kg體重加柴胡肌注,下午用病毒靈2支肌注,連用3d,同時在飲水中添加小蘇打和電解多維質至全群豬康復。大群用特效抗流感藥物飲劑1袋對水100 kg,供自由飲用,連用5～7d。

6討論

SIV在豬群中傳播主要通過呼吸道途徑。在急性發病期,病豬鼻腔分泌物含有大量病毒,豬只通過直接或間接接觸而感染傳播,其中人和禽類也能攜帶病毒進行傳播。豬流感危害豬體健康,影響了育肥豬的上市時間,并增加了飼養成本,對養豬業造成的損失不容忽視。此外,豬流感病毒也是豬呼吸道疾病復合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)的一種重要原發性病原。豬呼吸性疾病復合征是近年來危害世界(包括我國)豬群的嚴重疾病,其病原復雜,呈雙重或多重病原感染,包括病毒性病原(豬流感病毒、PRRSV、豬圓環病毒Ⅱ型、偽狂犬病毒和豬呼吸道冠狀病毒),細菌性病原(巴氏桿菌、豬鏈球菌、豬副嗜血桿菌)和豬衣原體等。一種觀點認為豬流感病毒不僅損傷呼吸系統,還可能引起機體免疫抑制,增加了其他病原的感染幾率;反過來,一些細菌性病原(如葡萄鏈球菌)分泌的蛋白酶能夠促進豬流感病毒HA蛋白的裂解,而HA蛋白的裂解對流感病毒的感染至關重要。因此,豬流感和其他病原混合感染并相互作用,就會使病程延長,死亡率增加,對豬體健康的危害也就更加嚴重。

SI的診斷可分為臨床診斷和實驗室診斷。實驗室診斷包括病毒分離、抗原和病毒核酸檢測、特異性抗體檢測等。國外報道認為PCR診斷方法的陽性率與病毒分離的陽性率等同或者稍高。本試驗中整個試驗過程所需時間較短,在6h之內即可完成從提取RNA、反轉錄、PCR擴增到瓊脂糖凝膠電泳等全部試驗過程,而傳統的病毒分離所需時間較長,一般需要4～12d,豬流感RT-PCR診斷方法的建立為快速診斷各亞型豬流感奠定了基礎。

豬流感的防治同樣遵循預防為主,防重于治的原則。執行嚴格的生物安全措施,避免豬與雞、鴨、火雞混養,這就最大限度地限制了禽流感病毒跨物種傳播給豬;做好豬舍的通風、干燥、保暖和清潔工作;避免從外面引進豬只,若需引進要進行隔離觀察;避免豬群移動和混群;實行全進全出制度,限制流感的傳播;減少豬群的應激反應;對豬群進行疫苗免疫接種;患病豬進行抗病毒治療和抗生素治療,以減少或避免繼發感染。

7參考文獻

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