嬰兒肺炎沙眼衣原體培養的臨床分析

陳正國

摘 要:我院182例嬰兒鼻咽拭子細胞培養沙眼衣原體22%(40/182)呈陽性,筆者認為鼻咽拭子與鼻咽部抽吸物培養效果相當,前者更適宜于臨床應用;另從標本采集與貯藏溫度角度提出方法學改進以提高培養的靈敏度,總結出嬰兒沙眼衣原體肺炎常見的特征性癥狀體征,從而引起兒科醫師對本病的高度重視。

關鍵詞:沙眼衣原體;嬰兒;肺炎;細胞培養

中圖分類號:R374+.1文獻標識碼:A文章編號:1673-2197(2009)06-0073-02

沙眼衣原體(Chlamydia Trachomatis,CT)是西方發達國家最常見的性病病原體[1],嬰兒CT感染主要是通過被感染的產道獲得。宮頸CT感染者其陰道產兒60%~70%可被感染,其中20%~50%發生包涵體結膜炎,10%~20%發生CT肺炎[2]。為探討嬰兒CT肺炎的發病情況及臨床特點,筆者對我院2007年6月-2008年5月收治的182例肺炎患兒進行了實驗室檢查及臨床分析。

1 資料和方法

1.1 資料

1.1.1 研究對象 2007年6月-2008年5月,于本院就診的肺炎患兒182例,其中男嬰110例,女嬰72例;剖宮產兒31例。納入標準:年齡2周-3月;病史和體檢診斷為感染性肺炎;X胸片證實為肺炎。

1.1.2 主要材料 McCoy細胞株(小鼠細胞)為本室保存,RP-MI1640培養基,胎牛血清。

1.2 檢測方法

按美國CDC推薦方法并略作改良[3]:

1.2.1 標本采集

①鼻咽拭子:將套上無菌小塑料管的特制竹簽脫脂棉拭子經鼻前庭插入鼻咽部,用力旋轉約5s后立即退入塑料管內,隨管一并取出以免被鼻腔內細菌污染;②鼻咽抽吸物:將無菌新生兒胃管經鼻插入鼻咽部,用20mL無菌空針抽吸,見抽吸物量>0.2mL后拔管,將所采集的標本充分混懸于2SP轉運培養基中,擠盡液體棄去棉拭子。不能在8h內接種者置-70℃保存。

1.2.2 細胞培養

(1)單層細胞的準備。培養瓶中生長良好的McCoy細胞用0.02%EDTA消化后,加入RPMI1640培養液均勻混懸細胞,以1mL分裝于24孔培養板中,使細胞濃度為1×105/mL～2×105/mL,36℃0.5%CO₂孵箱內孵育48h,使之長為均勻融合的細胞單層。

(2)標本接種、培養。冰壺保存者直接接種。-70℃保存者先用37℃水浴融解,再用滴管用力吹打標本后,接種于準備好的細胞單層,3000rpm35℃離心1h,再35℃孵育2h,棄上清換含防線菌酮(1ng/L)和70g/L聚乙二醇的1640培養基,36℃5%CO₂下孵育48h后,-70℃凍融3次再盲傳2代。

(3)碘染色、鏡檢。棄培養液用PBS輕輕沖洗細胞2次,以無水甲醇固定10min后加過濾的John氏染液1mL染色20～30min,1∶1碘甘油封固。在400倍光學顯微鏡下發現被染色細胞胞漿中有棕黑色包涵體者為陽性。所有鏡檢均在盲傳后48～72h內完成。

1.3 統計學處理

χ²檢驗(SAS統計軟件)。

2 結果

2.1 鼻咽拭子培養

182例鼻咽拭子培養中,除去被細菌污染的17例,CT培養陽性率為23.6(40/165)。臨床特點如下:①剖宮產兒CT均陰性.而非剖宮產兒CT陽性率27.2%(40/147),差異有顯著性,χ²=15.13,P<0.01;②低熱(腋溫37.5℃～38℃或24h內體溫波動>1℃)24例(60.0%),無熱15例(37.8%),僅2例高熱(2.5%);③40例均有呼吸增快,34例(85.0%)有陣陣單咳,28例(70.0%)有紫紺,27例(67.5%)有中細濕啰音,7例(17.5%)有喘鳴音;④16例(40.0%)有結膜炎或結膜炎史;⑤X線胸片均顯示不同類型的浸潤陰影,肺紋理增粗,33例(82.5%)有過度充氣;⑥平均病理期為21d。

2.2 鼻咽拭子與鼻咽抽吸物培養結果

對63名患兒作自身配對經左右鼻孔同時取鼻咽拭子和鼻咽抽吸物培養,前者CT陽性11例(17.46%),略高于后者10例(15.87%),經χ²檢驗兩者污染率χ²=0.315,P>0.05及陽性率χ²=0.05,P>0.05之間無顯著差別。

3 討論

細胞培養是確診CT感染的傳統金標準,其特異性為100%,可從以下兩方面提高培養的陽性率:①標本采集:CT肺炎的診斷以從呼吸道獲取標本為主,可為鼻咽拭子和氣管或鼻咽抽吸物,3者中以氣管抽吸物的特異性最好,但取材困難,需借助喉鏡或支氣管鏡,鼻咽抽吸物和鼻咽拭子取材則較容易,對診斷CT肺炎亦有較高特異性。本實驗鼻咽拭子陽性率高的原因,主要是采樣時均用無菌塑料管套住拭子,防止了鼻腔內其它菌污染拭子;②標本貯藏溫度:室溫(23℃)貯存1d陽性率銳減到34.4%,2d則降為0%;4℃貯存1d陽性率可保存95.7%,3d降為56.4%,8d即降為0%;-70℃貯存3d保存91.7%的陽性率。本文標本均為當時接種或-70℃凍存,得出少數民族地區小嬰兒CT肺炎發病率為20.9%,發病常在4周~11周,常不發熱或僅有低熱,開始可有上呼吸道感染癥狀;下呼吸道主要表現為呼吸增快和特征性的陣發性單聲咳嗽,呼吸增快有時可為唯一的線索;X線胸片顯示雙肺過度充氣,散在的雙側間質性浸潤或小片肺泡浸潤。對年齡在6個月內尤其是3個月內出現上述特征的、病程>1周以上的嬰兒,用青霉素類、氨基糖甙類或頭孢菌素類治療無效者應考慮為CT肺炎。治療首選紅霉素50mg/kg/d持續14d,一般用藥5~7d癥狀即可改善,同時CT培養轉陰,約1個月內X線胸片轉為正常。嬰兒患CT肺炎后數年遷延不愈可發生慢性呼吸功能不全,因此,嬰兒CT肺炎應引起廣大兒科醫師的高度重視。

參考文獻:

[1] SCHACHTER J.Epidemiology of chlamydia trachomatis infections.Proceedings 7th international symposium on chlamydia infections[M]. Cambridge:Cambridge university press,1995.

[2] REMINGRON JS,KLEIN JO.Infectious diseases of fetus and newborn infants[M]. Philadelphia:Saunders,1990.

[3] BIRD BR,FORRESTER FT(全國性病防治中心譯).沙眼衣原體感染的臨床和實驗室診斷[M].南京:全國性病防治中心,1990.

[4] WEISS SG,NNEWEOMB RW,BEEM MO.Pulmonary assessment of children after chlamydia trachomatis pneumoia in infancy[J]. pediatr,1986,6(2):36.

(責任編輯:姜付平)