四君子湯中多糖的提取和含量測定

劉玉紅

摘 要：目的：提取四君子湯中的多糖，并進行含量測定。方法：采用熱水法提取、乙醇沉淀制備總多糖；蒽酮-硫酸法測定多糖含量。結果：總多糖中多糖的含量為61.44%。結論：四君子湯中多糖的含量為4.97%。

關鍵詞：四君子湯；多糖；提取；含量測定

中圖分類號：R284文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2009）02-0043-02

四君子湯出自宋代《太平惠民和劑局方》，由人參、白術、茯苓、炙甘草組成，具有益氣健脾之功效，主治脾胃氣虛證。研究報道四君子多糖具有顯著的免疫調節作用，可用于腫瘤等的輔助治療［1~3］。本文采用蒽酮-硫酸法對四君子湯水煎劑中多糖的含量進行了測定。

1 儀器與試藥

WFZ-UV-2102 PC型紫外-可見分光光度計（尤尼柯中國上海儀器有限公司），RE-52C旋轉蒸發器（河南鞏義市英峪予華儀器廠），LXJ-Ⅱ離心沉淀機（上海醫用分析儀器廠），ZKXF-1型電熱真空干燥箱（上海樹立儀器儀表有限公司）。四君子湯藥材(濟南建聯中藥有限公司)。葡聚糖4萬（中國醫藥集團上海化學試劑公司），蒽酮（上海五聯化工廠）。

2 方法與結果

2.1 四君子總多糖的提取

精密稱取四君子湯34g（人參10g，白術9g，茯苓9g，甘草6g），投入到15倍量的沸水中0.5h，以滅活共存酶，浸泡過夜，95℃提取3次，每次3h，六層紗布過濾，濾液合并，50℃減壓濃縮至30mL，離心，棄去殘渣，上清液加四倍量無水乙醇，沉淀過夜，離心，收集沉淀，依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，將沉淀置于有五氧化二磷的真空干燥箱中，50℃真空干燥24h，得四君子總多糖樣品2.75 g。精密稱取四君子總多糖樣品20mg，定容于250mL的容量瓶中，為供試品溶液A，供多糖的含量測定用。

2.2 標準曲線的測定

采用蒽酮－硫酸法［4］測定多糖含量。

葡聚糖標準品溶液的配制：精密稱取干燥至恒重的葡聚糖25mg，加適量蒸餾水溶解，轉移至250mL容量瓶中，加水至刻度，即得0.1g/L的葡聚糖標準品溶液。

蒽酮試劑：0.2g蒽酮溶解于100mL濃硫酸中，當日配制使用。

標準曲線制備：移液管分別量取0.1g/L葡聚糖標準溶液2mL、4mL、6mL、8mL、10mL轉于10mL容量瓶，蒸餾水補至刻度，各取1mL于試管中并按順序編號1、2、3、4、5，后分別加入4.00mL蒽酮試劑，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后充分振搖均勻，并一同浸入沸水浴中，管口加蓋開始反應。自水浴沸騰時起，準確煮沸10min，自來水冷卻，室溫放置約10min，振搖均勻，以蒸餾水為空白，在λ620nm處測定吸光度A。以吸收度A為縱坐標，糖濃度C為橫坐標，得回歸方程A=5.8965C+0.0478，r=0.9998。

2.3 精密度試驗

按復方配比取四君子湯藥材10.02g，精密稱定，按2.1項提取制得供試液，取1mL依法重復測定5次，吸收度值的RSD為0.67%（n=5）。

2.4 重現性試驗

按復方配比取四君子湯藥材5 份，各10.02g，精密稱定，依2.1項下提取后，進行多糖的含量測定，每份測定3次，取平均值，5份樣品中多糖的含量分別為4.67%、4.98%、4.76%、4.86%、4.73%，計算RSD為2.54%（n=5）。

2.5 穩定性試驗

對同一供試品液，蒽酮-硫酸法顯色后，分別于0、10、20、40、60min 時在620nm處測定吸收度值，計算RSD為1.64%（n=5），表明吸收度值在1h內基本穩定。

2.6 樣品含量測定

取供試品溶液1mL，依法進行測定，計算四君子總多糖中多糖的含量為61.44%，由粗多糖中多糖含量折合成四君子湯中多糖的含量為4.97%。

2.7 回收率試驗

取已知多糖含量的四君子湯藥材5份，各6.8g，精密稱定，于每份中加入一定量的葡聚糖對照品，按2.1項下提取，依法測定多糖含量，計算得平均回收率為101.52%，RSD為3.20%(n=5)。結果見表1。

3 討論

蒽酮-硫酸法測定多糖含量，為避免氧化，蒽酮試劑要現用現配，由于硫酸密度比水大，容易分層，因此樣品加入蒽酮試劑后和紫外測定前一定要振搖充分。結果表明，該法測定多糖含量，可獲得良好的線性關系（r=0.9998），回收率較高（101.52%），而且精密度試驗、穩定性試驗均符合分析要求，方法準確，重現性好，可用于四君子湯中多糖的含量測定。

參考文獻：

［1］ 周華，劉良，王培訓，等. 四君子湯復方總多糖口服和注射給藥對免疫功能影響的對比研究［J］. 中藥新藥與臨床藥理，2001，12(5)： 602-902.

［2］ 寧康健，何玉意，呂錦芳. 四君子湯對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響［J］. 中獸醫醫藥雜志，2005，(5)： 30-32.

［3］ 劉良，周華，王培訓，等. 四君子湯復方總多糖對小鼠腸道粘膜相關淋巴組織的影響［J］. 中國免疫學雜志，2000（17）： 402-602.

［4］ 張惟杰. 糖復合物生化研究技術（第二版）［M］.杭州：浙江大學出版社，1999：12.

（責任編輯：姜付平）