不同產地連錢草藥材中總黃酮成分含量測定

楊曦亮　肖玉秀

(1.武漢科技大學醫學院，湖北 武漢 430065；2.武漢大學藥學院，湖北 武漢 430072)お

摘 要：目的：建立連錢草藥材中總黃酮成分含量的測定方法。方法：分光光度法。結果：7個湖北產地連錢草的總黃酮含量平均為64.78mg?g^-1，三個混淆品的總黃酮含量平均為34.37mg?g^-1。總黃酮含量的不同可在一定程度上區別連錢草和其混淆品。結論：連錢草的總黃酮含量與其栽培方式、采收時間密切相關；多數產地的連錢草與其混淆品相比，總黃酮含量顯著增加，故總黃酮的含量測定可作為連錢草真偽鑒別的參考依據。

關鍵詞：連錢草；分光光度法；黃酮；含量測定

中圖分類號：R284文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2009）01-0021-03オ

連錢草Herba Glechomae，別名活血丹、銅錢草等，《中國藥典》收載為唇形科植物活血丹Glechoma longituba(Nakai)Kupr的干燥地上部分，具有利濕通淋、清熱解毒、散瘀消腫的功能^[1]，主治尿路感染、尿路結石、胃及十二指腸潰瘍、黃疸性肝炎、肝膽結石等癥，在治療膽結石、跌打損傷及斷肢再造方面有獨特作用^[2-3]。我國連錢草資源極為豐富，除新疆、甘肅、青海、西藏以外其它各省均有連錢草分布^[4]。本實驗^[5-7]測定了10種不同來源連錢草藥材（7種湖北產地連錢草，3種連錢草的混淆品種）中總黃酮的含量，并進行了比較分析，為連錢草藥材的質量控制提供了評價依據。

1 材料

1.1 儀器

UV-2101PC紫外可見分光光度計（日本島津）；CQ250超聲波清洗儀(上海超聲波儀器廠)。

1.2 試藥

蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號0080-9705）；亞硝酸鈉(分析純，太倉化工二廠，批號20001201)；三氯化鋁（分析純，中國金山區興塔美興化工廠，批號990829）；氫氧化鈉（分析純，威爾昆化學試劑有限公司上海華美藥房經銷，批號20020130）；連錢草樣品見表1。

2 方法

2.1 對照品溶液的配制

精密稱取120℃常壓干燥至恒重的蘆丁對照品0.0110g，置于100mL容量瓶中，用60mL 60%乙醇超聲溶解（容量瓶密塞），放冷，用60％乙醇定容，得到0.11mg?mL^-1蘆丁對照品溶液。

2.2 供試品溶液的配制

精密稱取經干燥的連錢草粉末約0.5g，置100mL具塞容器中，精密加60mL 60%乙醇，密塞，稱重，超聲提取30min。放冷，密塞，再稱重，用60%乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續濾液即得供試品溶液。

3 結果與討論

3.1 測定波長的選擇^[7]

精密稱取蘆丁對照品5mg，置于25mL容量瓶中，加60%乙醇約15mL，超聲使其溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻，得蘆丁標準溶液（0.2mg?mL^-1）。精密吸取蘆丁標準溶液8mL，置于25mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，加三氯化鋁試液1mL，搖勻，放置6min，再加5%的氫氧化鈉10mL，加水至刻度，搖勻，于波長200~800nm范圍內掃描，發現在510nm處有一最大吸收峰。精密稱取2g連錢草粗粉，置于具塞錐形瓶中，加50mL 60%乙醇，超聲50min，過濾，取續濾液，不顯色，直接于波長200~800nm范圍內掃描；再取續濾液1mL，照對照品蘆丁一樣顯色后，于波長200~800nm范圍內掃描，發現在504nm處有一最大吸收峰。見圖1。

3.2 標準曲線

精密量取蘆丁對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.0mL，置于10mL容量瓶中，分別加入60%乙醇使成7mL，精密加入5%亞硝酸鈉0.3mL，搖勻，放置6min；精密加入10%三氯化鋁0.3mL，搖勻，放置6min；加入1mol/L的氫氧化鈉2mL，用60%乙醇定容，搖勻，以不加蘆丁對照品溶液其它同法操作得到的溶液作為空白對照，在504nm處測定吸光度。求得回歸方程為：C(mg?mL^-1)=0.075215A+0.001532(r=0.9996，n=6)；蘆丁對照品在0.01~0.07mg?mL^-1范圍內呈良好的線性關系。

3.3 精密度實驗

取蘆丁對照品溶液適量，配成高、中、低三個濃度，每個濃度3份，分別顯色后測定吸收度。結果表明，測定方法的精密度良好（表2）。

3.4 穩定性試驗

取對照品溶液3.0mL，進行顯色，每隔5min測定一次吸收度，共測定至40min，計算總黃酮的平均含量為0.0297mg?mL^-1，RSD=0.96%(n=9)，結果表明顯色后的溶液在40min內穩定。

3.5 重復性試驗

取同一產地（湖北武漢）的連錢草粉末5份，每份約0.5g，精密稱定，按“2.2供試品溶液配制”項下的方法提取。精密量取供試品溶液0.5mL，顯色后測定吸收度，測得總黃酮的平均含量為56.67mg?g^-1，RSD=0.68%(n=5)，結果表明該方法重復性良好。

3.6 加樣回收率試驗

取3批已知總黃酮含量的連錢草粉末（恩施）約0.1g，加入蘆丁對照品適量，精密稱定，按“2.2供試品溶液配制” 項下的方法提取。精密量取供試品溶液1mL，按“3.2”項下方法測定總黃酮的含量，結果見表3。實驗結果表明，該測定方法準確性高。

3.7 不同產地連錢草中總黃酮含量測定

取不同產地的連錢草約5g，按“2.2供試品溶液配制”項下的方法提取。精密吸取供試品溶液0.5mL，按“3.2”項下方法測定不同產地連錢草中總黃酮的含量，結果見表4。

從表4可知，除荊州2外，湖北產地連錢草的總黃酮含量均高于連錢草混淆品種的總黃酮含量；7個湖北產地連錢草的總黃酮含量平均為64.78mg?g^-1，三個混淆品的總黃酮含量平均為34.37mg?g^-1。總黃酮含量的不同可在一定程度上區別連錢草和其混淆品。

兩種湖北荊州連錢草的產地相同，栽培方式和采收時間不同（家種，5月；野生，8月），但在7個湖北產地連錢草中，荊州1(92.85mg?g^-1)總黃酮含量最高，而荊州2（36.35mg?g^-1）最低。兩個采收時間不同（5月，9月）的湖北恩施野生連錢草中總黃酮含量也有較大差異。除武漢和丹江產地連錢草的總黃酮含量比較接近外，其它湖北產地連錢草的總黃酮含量都有一定差異。這說明栽培方式、采收時間和湖北省內不同地區的生長環境均影響連錢草的總黃酮含量。

4 結論

七種湖北產地連錢草的總黃酮含量差異較大。連錢草的總黃酮含量不僅與栽培方式、采收時間密切相關，而且湖北省內不同地區的生長環境對連錢草的總黃酮含量也有影響。 因此在選用連錢草時一定要注意具體產地和用量，以確保療效；同時要合理栽培、采收連錢草。多數產地的連錢草與其混淆品相比，總黃酮含量顯著增加，故總黃酮的含量測定可作為連錢草真偽鑒別的參考依據，對保證其藥材質量、指導其栽培生產，以及相關制劑產品的質量控制具有重要意義和應用價值。

參考文獻：

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典（一部）［M］.北京:化學工業出版社，2005：117.

［2］ 曾細生.用連錢草斷指(肢)再植30例［J］.中國中醫藥科技，2004,11（2）:125.

［3］ 曹萍,褚小蘭,范崔生.金錢草類中藥的研究概論［J］.江西醫學院學報，2005，45（1）：110-113.

［4］ 宋?唐慎微.證類本草［M］.北京：華夏出版社,1993：265.

［5］ 祝德秋,羅啟劍,崔嵐.分光光度法測定連錢草中熊果酸的含量［J］.藥學服務與研究,2003,3(4):268-269.

［6］ 王慶，段金慶，錢大瑋.不同產地連錢草中三菇酸類及黃酮類成分的分析與評價［J］.南京中醫藥大學學報，2006，2（1）：44-46.

［7］ 祝德秋,羅啟劍,崔嵐.連錢草中總黃酮的含量測定［J］.藥學服務與研究，2003,3(1):62-63.（責任編輯：姜付平）