冠心病藥物研制分析

摘要：目的優選心舒滴丸中人參提取、精制工藝條件。方法以人參皂苷Rg1、Re含量為指標，采用正交試驗設計，優選人參提取工藝條件：以比吸附率、洗脫量為指標優選大孔吸附樹脂精制工藝條件。結果優選提取工藝條件：體積分數為70％的乙醇6倍量，提取3次，每次1h；精制純化工藝條件：采用AB 8型大孔吸附樹脂，以體積分數為70％的乙醇為洗脫溶劑，4倍樹脂體積。結論優選工藝可較好的提取純化人參皂苷有效成分。

關鍵詞：冠心病 心舒滴丸 制造

0 引言

心舒滴丸由人參、丹參、冰片等藥物組成，用于冠心病的治療，人參為方中主藥，人參皂苷為其主要活性成分之一，具有明顯的擴張冠狀動脈、增加心肌血流量、提高心肌耐缺氧能力、調節心律和血壓等作用。本文采用高效液相色譜法，以人參皂苷Rg1、Re的含量為指標，優選人參最佳提取工藝及大孔吸附樹脂精制工藝條件，為生產提供依據。

1 儀器與試藥

DIONEX 3000高效液相色譜儀(在線脫氣、自動進樣、光電二極管陣列檢測器、Chromeleon色譜工作站，美國戴安公司)；人參皂苷Rg1對照品(批號：110754-200320，供含量測定用)、人參皂苷Re對照品(批號：110703-200322，供含量測定用)均由中國藥品生物制品檢定所提供；AB 8型大孔吸附樹脂(天津南開大學化工廠)、HP20型大孔吸附樹脂(北京綠百葉科技發展有限公司)、D101型大孔吸附樹脂(天津農藥總廠)；甲醇、乙腈(色譜純，美國TEDlA公司)；其它試劑為分析純。人參為五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根，購自廣州康爾健藥業公司。符合《中國藥典》2005年版一部人參項下要求。

2 方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：DIONEX C18色譜柱(250mm×4.6mm，5um)；流動相：乙腈0.05％磷酸(體積比19.8:80.2)；檢測波長：203nm；流速：1.0mL·min-1；在此條件下，供試品中人參皂苷Rg1與人參皂苷Re及其它組分峰能達到基線分離。

2.2對照品溶液的制備精密稱取人參皂蒼Rg1對照品0.01070g，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度；精密稱取人參皂苷Re對照品0.010 15g，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度：精密量取人參皂苷Rgl對照品溶液2.5mL、人參皂苷Re對照品溶液2mL，置5mL量瓶中，加甲醇至刻度。制成每1mL含人參皂苷Rg1 0.535mg、人參皂苷Re 0.406mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3標準曲線的制備分別精密吸取不同濃度的對照品溶液注入高效液相色譜儀中，以峰面積積分值為縱坐標(Y)，以人參皂苷Rg1微克數為橫坐標(X)，計算回歸方程Y=262173X-692964，r=0.9997，表明人參皂苷Rg1在5.35～53.5ug范圍內與蜂面積積分值呈良好線性關系。以峰面積積分值為縱坐標(Y)，以人參皂苷Re微克數為橫坐標(X)，計算回歸方程Y=214558X-731 757，r=0.9998，表明人參皂苷Re在4.06～40.6ug范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.4優選提取工藝

2.4.1提取溶劑的選擇人參主要有效成分皂苷類溶于水及乙醇，因此，可用水或乙醇為溶劑提取。首先分別以體積分數為50％和70％的乙醇、水為提取溶劑進行提取，結果顯示以乙醇為溶劑時，人參皂苷Rg1、Re提取率較高。進而采用正交實驗優選人參醇提工藝條件。

2.4.2實驗設計以人參皂苷Ra1、Re為指標。采用L9(34)正交實驗設計對影響提取效率的因素進行考察。

2.4.3供試品溶液的制備依照處方分別稱取人參20g，置圓底燒瓶中，按L9(34)實驗列號各條件回流提取。濾過，合并提取液，定容至1000L，作為樣品溶液。精密吸取樣品溶液各100mL，水浴蒸干，殘渣加水25mL使溶解，移置分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取4次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次25mL，棄去氨試液，正丁醇液水浴蒸干，殘渣加甲醇使溶解，并定容至10mL量瓶中，作為供試品溶液。

2.4.4實驗結果精密吸取供試品溶液、對照品溶液，分別注入液相色譜儀中，測定峰面積，計算人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的含量。由實驗結果可知，因素A、D對人參提取效率有顯著性影響，在以人參皂苷Rg1、Re為指標考察的四個因素中，依次排列為D＞A＞B＞C。較優的工藝應為A283C2D3，即體積分數為70％乙醇6倍量提取3次，每次1h。

2.5精制工藝考察按處方稱取人參1000g，按照優選提取工藝條件操作，收集提取液，減壓回收乙醇至無醇味，作為樣品溶液，備用。

2.5.1吸附條件考察分別量取處理好的AB 8型、D101型、HP20型等大孔吸附樹脂各10mL。平行兩份，裝柱，各精密量取樣品溶液200mL通過樹脂柱，以水洗至流出液近無色，收集流出液，定容。再以體積分數為70％乙醇100mL洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液，定容，流出液分別取樣，按照“2.4.3”項下制備方法制備供試品溶液，注入液相色譜儀中，測定人參皂苷Rg1、Re的含量。計算大孔吸附樹脂比吸附量、洗脫率，結果顯示AB 8型大孔吸附樹脂對人參皂苷Rg1、Re的比吸附量和洗脫率均高于其他樹脂，分別為4mg／mL樹脂和98.3％，故選擇AB 8型大孔吸附樹脂。

2.5.2洗脫條件考察①洗脫溶劑濃度考察。精密量取樣品溶液90mL通過AB 8型大孔吸附樹脂柱(10mL樹脂裝柱，內徑1.5cm)，樹脂柱水洗至近無色，然后依次用體積分數為30％、50％、70％、90％乙醇各20mL洗脫，分別收集洗脫液，制備供試品溶液，注入液相色譜儀中，測定人參皂苷Rg1 、Re的含量。結果顯示，體積分數為70％乙醇的累計洗脫率已達92.59％，故確定洗脫溶劑濃度為70％。②洗脫溶劑用量考察。精密量取處理后樣品溶液通過樹脂柱，水洗至流出液近無色，量取體積分數為70％乙醇60mL洗脫，分段收集洗脫液，制備供試品溶液，測定人參皂苷Rg1、Re的含量，結果顯示4倍量樹脂體積的洗脫溶劑洗脫率即可達到95.72％，故確定洗脫溶劑用量為4倍樹脂體積。

3 討論

3.1大孔吸附樹脂具有物理化學穩定性高、吸附容量大、選擇性好、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、使用周期長、節省費用等諸多優點，在對總皂苷的粗分離和除去水溶性色素、多糖和無機鹽等雜質顯示出其獨特的效果。本文通過考察影響樹脂吸附的因素，發現藥液濃度對樹脂的吸附有顯著影響，如藥液濃度過低則精制時間增加，效率降低；藥液濃度過高則影響樹脂的吸附，造成吸附量降低。

3.2大孔吸附樹脂可顯著降低總固體得率，使活性成分高度富集，精制前提取液總固體得率為20％，人參皂苷Rg1、Re含量為5.10mg／g：大孔樹脂精制后，其總固體得率為1.5％，人參皂苷Rg1、Re含量為56.88mg／g。同時吸濕性降低，有利于制成現代劑型的中藥，便于質量控制。