油松成熟胚的不定芽誘導及植株再生試驗

賀 娜 鄭彩霞 周巧云

摘要以油松成熟種胚為材料，研究不同培養基、不同激素水平及光照條件對油松不定芽謗導的影響。結果表明：在光照培養條件下，誘導油松不定芽的最佳培養基為DCR+2.0mg／L 6-BA+0.1mg／LNAA，誘導率達到36％。幼苗在1／2DCR+0.1mg／LNAA+0.1mg／LIBA+0.1mg／L KT培養基上能生根并形成完整植株，誘導率達到25％。

關鍵詞油松；成熟胚；不定芽；誘導；植株再生

中圖分類號S791.254

文獻標識碼A

文章編號1007－5739(2009)16－0145－01

油松為我國特有樹種，是我國華北、西北及東北南部的主要造林樹種之一，同時也是世界上重要的木材及松脂生產資源。目前林業上主要依靠實生苗和優樹嫁接的繁殖方法，繁殖系數低，苗木高低不一，林相參差不齊，遠遠不能滿足生產的要求。而通過組織培養的方法不僅能為植樹造林提供大量苗木，還能為遺傳轉化改良樹種打下扎實的基礎。目前關于油松組培成苗的報道非常少，主要存在增殖技術不成熟、生根難等問題。為此，現以油松成熟種子為材料，進行不定芽誘導與生根誘導條件的探索和優化，試圖建立成熟的油松組織培養技術，為其苗木的無性繁殖提供依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

成熟油松種子，北京林業大學種子保存室提供。

1.2試驗方法

1.2.1種子預處理。將成熟種子置于4℃冰箱冷藏放置30d。

1.2.2消毒和接種。在超凈工作臺上，將預處理過的成熟油松種子，用70％酒精浸泡30s，無菌水沖洗，然后置于2％NaClO溶液中3min，無菌水沖洗3～5min。將完整的種胚從種子中剝出，接種到培養基中。

1.2.3激素濃度與組成的篩選。將完整的胚接種于7種不同激素濃度和配比的DCR培養基中(表1)，并添加肌醇0.1g／L、蔗糖30.0g／L、瓊脂6.0g／L，調pH值至5.8，4周后觀察不定芽誘導情況。

1.2.4基本培養基的篩選。按參考文獻H中的方法配制MS、SH、DCR 3種培養基，統計3種培養基中外植體的出芽率、生根誘導率及生長狀況。

1.2.5生根誘導。以培養12周生長健壯的單芽為材料，分別接種到不同激素配比的1／2 DCR培養基中，研究不同激素濃度和配比對單芽生根的影響，4周后觀察統計生根情況。

2結果與分析

2.1不同激素水平對油松不定芽誘導的影響

統計4周后各培養基中胚的愈傷率和出芽率(表2)。結果表明：2、3、5、6號培養基均有不定芽長出，但出芽率存在差異，其中2號培養基出芽率最高，達到36％。說明種胚的出芽率與培養基中6-BA和NAA濃度的比值有關。2號培養基中6-BA與NAA的濃度比為20:1，介于3號培養基(30:1)與6號培養基(15:1)之間。因此，適合叢生芽生長的培養基為：DCR+2.0mg／L 6-BA+0.1mg／L NAA。

從愈傷生成率來看，4號培養基誘導率最高，為26％。6號培養基誘導率最低，為12％。說明愈傷發生率也與6-BA和NAA的比值有關，比值越小，越利于愈傷的發生；比值越大，愈傷發生率越低。與細胞分裂素和生長素的比值越低，越有利于愈傷發生，比值越高，越有利于芽生長的結論是一致的。CK無愈傷發生，直接長出植株，分化芽能力差。

由此可見，油松不定芽的發生途徑有2種：一是直接器官發生途徑，直接從種胚上長出；二是從愈傷組織上再生不定芽的間接發生方式，對于油松不定芽的這種發生方式鮮見報道，相對于直接發生方式，其發生比率要低。且在培養過程中單芽切下后死亡的比例大。

2.2不同培養基對油松不定芽誘導的影響

將成熟種胚接種到與表1中2號培養基激素含量相同的MS與SH培養基中，4周后統計其不定芽的發生情況(表3)。結果表明：3種培養基中DCR培養基最有利于不定芽的發生，SH培養基不定芽發生率較低，而MS培養基效果最差。這一方面與種子自身營養物質的供應有關，另一方面可能與各個培養基中N元素的含量有關。MS的無機鹽和離子濃度較高，不適合不定芽的發生。這一結果和云南松在MS培養基中誘導率較低，而在DCR培養基中較高具有相同性。

2.3生根誘導

以不添加激素的培養基上培養12周的健壯單芽為材料，接種到不同的1／2 DCR+激素的生根培養基中，4周后統計生根情況(表4)。結果表明：5種培養基中，只添加NAA或只添加NAA與IBA芽均未生根：加入TDZ雖也未生根，但單芽變得粗壯，針葉變寬，且有芽原基長出；而添加一定濃度的KT后有根長出。4周后觀察，根長約1cm左右。粗壯，但根系不發達，所有植株均只有1條主根。繼續培養4周，豐根長至2cm左右，且周圍生出3～5條白色的毛細根，達到移栽要求，可以移栽。

3討論與小結

激素水平和基本培養基類型都對不定芽的誘導有很大的影響。在DCR、MS、SH 3種基本培養基上，DCR的出芽率最高，SH效果次之。綜上所述，油松種胚不定芽誘導的最佳培養基為：DCR+2 0mg／L 6-BA+0.1mR／L NAA。

激素水平對生根的誘導也有很大影響。生根培養效果較好的培養基配方是：1／2 DCR+0.1mg／L NAA+0.1mg／LIBA+0.1mg／LKT，生根率可以達到25％。由試驗結果可知，芽的生根率偏低，根粗短，不利于移栽，有必要通過前期處理來提高芽的生根率。從整個試驗過程來看，從芽誘導到生根需要20周，周期過長，需通過進一步的研究以縮短培養周期，滿足生產需求。