兩種檢驗水質(zhì)總大腸菌群方法的比較研究

劉書花

摘 要:總大腸菌群是評價水環(huán)境質(zhì)量的重要衛(wèi)生指示菌之一,水質(zhì)總大腸菌群的監(jiān)測檢驗對保障人體健康和維護良好的生態(tài)環(huán)境有著重要的意義。選擇山東省內(nèi)有代表性的210份不同水質(zhì)分別用多管發(fā)酵法和紙片法進行檢驗比較,經(jīng)過分析,發(fā)現(xiàn)紙片法比多管發(fā)酵法更適合于日常水質(zhì)環(huán)境的監(jiān)測檢驗。

關(guān)鍵詞:總大腸菌群;多管發(fā)酵法;紙片法;比較研究

中圖分類號:X83

文獻標識碼: A

文章編號:1005-569X(2009)06-0027-02

1引言

總大腸菌群是評價水環(huán)境質(zhì)量的重要衛(wèi)生指示菌之一,水質(zhì)總大腸菌群的監(jiān)測檢驗對保障人體健康和維護良好的生態(tài)環(huán)境有著重要的意義。按照國家標準,對于水質(zhì)總大腸菌群的檢驗,常采用傳統(tǒng)的多管發(fā)酵法[ 1,2 ]。但傳統(tǒng)方法實驗前要配制大量的初發(fā)酵、復(fù)發(fā)酵以及選擇性培養(yǎng)基,操作繁瑣, 費時費力,而且,當需要檢驗的樣品量特別大時,來不及做到快速及時的檢測,不利于水質(zhì)環(huán)境的日常監(jiān)測和監(jiān)督管理。

用紙片法進行檢測,可以避免繁瑣的前期準備工作,提高工作效率。但是紙片法目前還未納入國家標準方法,對于其檢驗的精確性等問題,有待進行試驗考證和分析評價。為此,我們選擇山東省內(nèi)有代表性的210份不同水質(zhì),分別用多管發(fā)酵法和紙片法進行比較檢驗,發(fā)現(xiàn)兩法的檢測結(jié)果是一致的。而且紙片法更容易觀察結(jié)果,具有簡便、快速、省時省力等優(yōu)點。因此,我們認為應(yīng)該用紙片法來代替發(fā)酵法應(yīng)用于水質(zhì)日常監(jiān)測檢驗工作中。

2 材料與方法

2.1樣品來源

本項實驗用無菌廣口瓶盛裝采集水樣,共采集山東省內(nèi)7個不同地市的210份地下水、地表水和污水水樣進行檢測,分別代表不同水質(zhì)。

2.2 材料與試劑

乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基(批號081215)、營養(yǎng)瓊脂(批號080102)、EMB瓊脂(批號070713)、乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基(批號071012)均為北京陸橋公司產(chǎn)品,按使用說明配制備用。

總大腸菌群檢測紙片由山東省疾病控制中心提供。

2.3 實驗原理、方法

2.3.1 多管發(fā)酵法

多管發(fā)酵法是根據(jù)總大腸菌群應(yīng)具有的生物特性,如革蘭氏陰性無芽胞,在37 ℃,24 h 內(nèi)能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣,能在選擇性培養(yǎng)基上產(chǎn)生典型菌落。實驗前要配制大量的初發(fā)酵、復(fù)發(fā)酵及選擇性培養(yǎng)基。多管發(fā)酵法按照國家標準GB/T5750.12-2006以及《水和廢水監(jiān)測分析方法》(第四版)進行操作檢驗,即乳糖膽鹽發(fā)酵試驗(初發(fā)酵) 、平板分離培養(yǎng)、乳糖發(fā)酵證實試驗(復(fù)發(fā)酵)。

2.3.2 紙片法

紙片法快速檢測大腸菌群的原理[ 3 ]是利用紙片上的營養(yǎng),使大腸菌群迅速生長繁殖,進一步分解乳糖產(chǎn)生酸,酸又能使溴甲酚紫指示劑由淡天藍色轉(zhuǎn)變成黃色,在黃色區(qū)域生長的大腸菌群所產(chǎn)生的脫氫酶使紙片上的基質(zhì)分解脫氫,脫下氫轉(zhuǎn)給受體氯化三苯四氮唑( TTC),此時TTC接受氫之后,由無色變成還原后不溶于水的紅色物質(zhì)———三苯甲胺。紙片法檢驗步驟與多管發(fā)酵法基本類似,采取與多管發(fā)酵法相同的接種量。

3 結(jié)果

3.1實驗結(jié)果觀察比較

對所采集的水樣進行檢驗,多管發(fā)酵初發(fā)酵試驗若試管同時產(chǎn)酸產(chǎn)氣,則為陽性管,需繼續(xù)進行下一步的平板分離培養(yǎng)和乳糖復(fù)發(fā)酵證實試驗。但是,對于比較臟的環(huán)境水樣,總大腸菌群污染嚴重時,雙料初發(fā)酵試驗試管會全部變黃,并且顏色非常渾濁,很難觀察到試管中小倒管內(nèi)的產(chǎn)氣情況,給試驗結(jié)果的判斷帶來困難。而使用紙片法檢驗則避免了這一問題。根據(jù)紙片檢驗法的結(jié)果判定標準[ 4,5 ],只要紙片上出現(xiàn)紅色斑點且周圍變黃色,即為陽性結(jié)果,反之,即為陰性。

3.2不同水質(zhì)陽性檢出(管)張數(shù)比較

210份檢樣以24 h的結(jié)果判定,比較紙片法和多管酵法對于3種水質(zhì)檢測的陽性管(張)數(shù)。在表1中可以看出,對于3種不同水質(zhì),紙片法比多管發(fā)酵法的陽性檢出率要高,這是因為紙片法更容易觀察結(jié)果,避免了漏檢的情況。

3.32種檢測方法的符合率比較

210份檢樣以24 h的結(jié)果判定,表2中列出了2 種方法對210份樣品檢測結(jié)果,紙片法檢出162 份,檢出率為77.14%,發(fā)酵法檢出156份,檢出率為74.28 %,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2 =0.125,P > 0.05),說明紙片法檢測與國家標準方法的符合率很好。

4 結(jié)論

大腸菌群作為衡量水環(huán)境質(zhì)量的兩個主要衛(wèi)生指標之一,按照國家標準檢驗方法,常采用傳統(tǒng)的多管發(fā)酵法檢驗。但傳統(tǒng)發(fā)酵法操作繁瑣,檢驗前需要配置大量的培養(yǎng)基,不利于水環(huán)境質(zhì)量的日常檢測和監(jiān)督管理。而紙片法避免了繁瑣的前期準備工作,同時更容易觀察結(jié)果,具有簡便、快速、省時省力等優(yōu)點。因此,我們認為應(yīng)該用紙片法代替發(fā)酵法應(yīng)用于水質(zhì)日常監(jiān)測檢驗工作中。

參考文獻:

[1] GB/T5750.12-2006.生活飲用水標準檢驗方法微生物指標[S].2006.

[2] 國家環(huán)?？偩? 水和廢水監(jiān)測分析方法(第4 版)[M ].北京:中國環(huán)境科學(xué)出版社, 2002.

[3] 陳家濤. 紙片法快速檢測礦泉水大腸菌群與發(fā)酵法的對比[J].長春大學(xué)學(xué)報,2008,(10): 82~84.

[4] 闞方琦,馬樂好,王方木,等.液體飲品大腸菌群紙片法檢測效果評價[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇,2008, 14(1):24~34.

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