EDTA-K2誘導的血小板聚集對血細胞計數的影響

066100 北京軍區北戴河療養院 陳松楠

EDTA-K2誘導的血小板聚集對血細胞計數的影響

066100 北京軍區北戴河療養院 陳松楠

目的 研究EDTA-K2誘導血小板聚集所引起的血液分析儀計數RBC、WBC及PLT的數值變化。方法 采用血液分析儀檢測EDTA-K2抗凝血，同時手工計數標本和涂片鏡檢，并作相應比較得出結論。結果 血液分析儀檢測的部分EDTA-K2抗凝血血小板計數低于手工法計數的結果，而白細胞計數結果卻高于后者，二者差別均有臨床意義。結論 對于EDTA-K2抗凝的靜脈血個別患者可能會發生血小板聚集，從而引起血小板假性減少PTCP(pseudothrombocytopenia)，WBC計數假性增高，所以應該引起重視，及時糾正，避免一些不必要的檢查和治療。

EDTA-K2；血小板聚集；血細胞計數

血液分析儀在全國各級醫院已普及，相對于傳統的手工法來說其優點是簡單、快捷、重復性好等，但很多外界因素都會影響其檢測的準確性。EDTA-K2抗凝血引起的個別人血小板發生聚集就是典型的例子，它可以導致EDTA依賴性的假性血小板減少(EDTA-dependent PTCP)[1]，同時還造成白細胞數計數的偏高，引起臨床誤診，本次實驗對7例血小板聚集患者進行了分析研究。

1 資料與方法

1.1 檢測對象 2007年8月～2008年8月EDTA-K2抗凝有血小板聚集的患者7例，其中男3例，女4例；年齡15～55歲，平均為34歲。

1.2 儀器與試劑 深圳邁瑞公司BC-3200血細胞分析儀及儀器配套試劑，質控品是PHC-3D血細胞質控物(南京普朗生物技術有限公司)，Olympus公司生產的雙目顯微鏡BH-2，EDTA-K2真空抗凝管 (滄州永康醫藥用品有限公司)，鹽酸稀釋液、草酸銨血小板稀釋液及瑞氏染液。

1.3 方法 首先用PHC-3D血細胞質控物監控其穩定性，然后嚴格按照儀器操作規程用血液分析儀檢測并記錄EDTA-K2抗凝血的WBC、RBC及PLT的數值，然后采集患者末梢血20 μL加0.38 mL鹽酸及草酸銨稀釋液由有經驗的主管技師進行手工WBC、RBC及PLT計數，并制備血涂片，觀察血小板數量、形態及血小板聚集情況。

2 結果

BC-3200血細胞分析儀檢測和手工計數WBC、RBC、PLT的結果及配對t檢驗(表1)。

表1 7例血液分析儀和手工計數WBC、RBC、PLT的配對t檢驗

3 討論

1)BC-3200血細胞分析儀的檢測原理是電阻抗法：電阻抗原理又稱庫爾特原理，其內有一個充滿導電性液體的小孔，它的脈沖是穩定的，當有細胞通過時，脈沖就會變化，它的振幅的大小反映細胞的大小，它的數量即細胞的數量[2]。其中2～35 fl為血小板，35～450 fl為白細胞，當有血小板聚集或存在大血小板且不被溶血素溶解時，儀器可誤將聚集成團的血小板當作白細胞計數，因此就會出現白細胞計數偏高的現象[3]，進而引起血小板的假性偏低。

2)EDTA-K2抗凝已在1993年被ICSH(International Council for Standardization in Haematology，國際血液學標準委員會)推薦用作血常規檢測的抗凝劑。它對血液中細胞形態和血小板聚集性幾乎均無影響，然而在臨床的廣泛使用中，它偶爾會引起血小板的聚集，且這種聚集不易被溶血素破壞，因為溶血素的主要成分是陽離子表面活性劑，其作用于細胞中的磷脂，使之溶解后與蛋白分離[4]，從而引起血小板假性減低(PTCP)，至今未發現該現象的發生有何病理、生理意義，也與特殊藥物的作用無關[5]。EDTA-K2誘導的血小板聚集可能與血小板表面存在某種隱匿性抗原有關[6]。它可導致血小板活化，血小板形態發生變化，由正常的圓盤狀變為圓球形，改變了血小板膜表面某種隱匿性抗原構象，與存在血漿中的自身抗體結合，激活細胞膜中的磷酸酯酶A2和磷脂酶C，使血小板膜磷脂水解并釋放花生四烯酸、ADP、5-TH、膠原、凝血酶原、內源性鈣離子等活性物質。這些物質能活化血小板纖維蛋白原受體，促使血小板與纖維蛋白原聚集成團[7]。

3)對EDTA-K2抗凝血分別進行手工計數和麥瑞BC-3200血細胞分析儀計數，結果儀器法血小板計數明顯低于手工法，儀器法白細胞計數明顯高于手工法，差異均有顯著性(P＜0.01)，而紅細胞變化不大，差異無顯著性(P＞0.05)。個別患者體外的EDTA-K2抗凝血在室溫條件下發生EDTA依賴性凝集，血液分析儀對凝集體的結構不能辨別，而誤以為是白細胞，所以造成血小板計數的偏低和白細胞計數的偏高。而EDTA-K2抗凝血涂片鏡檢可見大量聚集成堆的血小板，且多分布在片尾部。此時儀器所測的血小板計數和白細胞計數是錯誤的，應采取手工計數及鏡檢。

4)在我們平時的工作中經常會遇到血小板較低的情況，特別是低于50×109/L時，不僅要及時手工計數，還應該涂片觀察細胞形態變化，確保檢驗結果的準確性。另外，采血的過程及血液和抗凝劑的比例都很重要，采血速度慢、多次穿刺和血液比例過高都可能引起血小板凝集，堵塞儀器而無法測得真實的結果，以上問題應該引起我們的注意，加強責任心，避免給病人的診斷和治療帶來不必要的麻煩，引起醫療糾紛。

[1]邢輝，吳健民.EDTA-K3依賴性血小板假性減少癥分析[J].臨床檢驗雜志，2004，22(4)：277.

[2]熊立凡，李樹仁，主編.血液分析儀及臨床應用[M].第3版.北京：人民衛生出版社，2003.

[3]叢玉隆.血液分析儀中的幾個問題[J].中華醫學檢驗雜志，1994，17(6)：325.

[4]崔穎鳴.血細胞自動分析與溶血劑[J].國外醫學臨床生物化學與檢驗分冊，2000，21(1)：29.

[5]BizzaroN.EDTA-dependent pseudothrombocytopenia;a clinical and epidemiological study of 11 case,with 10-year follow up[J].Am JH ematol,1995,50(2):103-109.

[6]BragnaniG,BianconciniG,Brogna R,etal.pseudothrom bocytopenia;clinical connent on 37 case[J].M inerva M ED,2001,92(1):13.

[7]李明，王超，魯家才.EDTA依賴性血小板聚集導致血細胞計數誤差分析[J].華中醫學雜志，2004，28(4)：269.

2009-04-23)

1005-619X(2009)08-0749-02