胰膽管合流異常對(duì)胰腺損傷的實(shí)驗(yàn)研究

陳風(fēng) 汪健 黃順根 王興東

胰膽管合流異常對(duì)胰腺損傷的實(shí)驗(yàn)研究

陳風(fēng) 汪健 黃順根 王興東

目的探討胰膽管合流異常(APBDU)對(duì)胰腺的損傷。方法選擇健康雜種貓10只，在膽管、胰管近十二指腸處縱行切開(kāi)4～6 cm，然后間斷吻合，以建立胰膽管合流異常的模型。手術(shù)造模時(shí)及術(shù)后6個(gè)月分別取胰腺組織行病理檢查、電鏡觀察及胰腺組織丙二醛(MDA)水平檢測(cè)。結(jié)果7只貓生存6個(gè)月。術(shù)后6個(gè)月胰腺呈暗紅色，充血、水腫，其中3只貓胰腺表面可見(jiàn)擴(kuò)張的胰管。光鏡下見(jiàn)3只貓胰腺有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，4只貓胰腺有間質(zhì)血管增生、白細(xì)胞附壁。電鏡下見(jiàn)胰腺腺泡細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，有的呈池狀；線(xiàn)粒體數(shù)量增多、體積增大、崩解；高爾基復(fù)合體發(fā)達(dá)。手術(shù)前胰腺組織MDA水平為(1.23±0.7)nmol/mg prot，術(shù)后6個(gè)月升高達(dá)(2.90±1.9)nmol/mg prot，相差顯著(F=4.80，P=0.0215)。結(jié)論胰膽管合流異常可導(dǎo)致胰腺損傷，抗氧化可能有助于減輕該損傷。

胰腺； 丙二醛； 胰膽管合流異常； 貓

胰膽管合流異常(anomalous pancreaticobiliary ductal union,APBDU)是胰管和膽管在十二指腸壁外匯合，造成共同通道過(guò)長(zhǎng)的先天異常。十二指腸乳頭括約肌不能控制整個(gè)合流部位，使膽汁、胰液互流而引起膽道、胰腺疾病[1]。自1916年Kozumi等[2]提出APBDU這一概念后，人們進(jìn)行了大量研究，但其發(fā)生的病因?qū)W機(jī)制尚未完全闡明，與急性胰腺炎、膽管癌、膽管擴(kuò)張等疾病的因果關(guān)系，仍是進(jìn)一步深入研究的課題。迄今為止的研究大多限于臨床資料回顧，已有的動(dòng)物模型與人類(lèi)的解剖差異較大，不符合人類(lèi)的解剖和病理生理特點(diǎn)。為此，本文應(yīng)用貓建立更加符合人類(lèi)胰膽管合流異常生理解剖形態(tài)的動(dòng)物模型，觀察APBDU對(duì)胰腺的損傷，為臨床提供資料。

材料和方法

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建立

選用健康雜種貓10只(購(gòu)自蘇州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心)，3個(gè)月～1歲，體重3.5～5.0 kg，雌雄不限。上腹正中切口進(jìn)腹腔，游離胰管和膽總管，于靠近十二指腸處分別縱向切開(kāi)胰管、膽管長(zhǎng)約4～6 mm的切口；間斷吻合切口形成過(guò)長(zhǎng)的共同通道，并于膽囊底部置入硅膠管造瘺，建立胰膽管合流異常的動(dòng)物模型[3]。

二、觀察指標(biāo)

1．X線(xiàn)檢查：術(shù)后第20天經(jīng)膽囊造瘺管注入30%泛影葡胺8～10 ml，攝片，觀察吻合口是否通暢。

2．病理學(xué)檢查：于手術(shù)時(shí)及術(shù)后6個(gè)月觀察胰腺的大體變化，同時(shí)在相同部位切取大小約5.0 mm×5.0 mm×5.0 mm的胰腺組織塊，福爾馬林固定、脫水、石蠟包埋、切片、HE染色。光學(xué)顯微鏡下觀察病理變化。

3．電鏡觀察：隨機(jī)抽取2只貓，取大小約1.0 mm×1.0 mm×1.0 mm的胰腺組織塊，固定于3.5%的戊二醛中，常規(guī)脫水、包埋、超薄切片，透射電鏡觀察。

4．胰腺組織過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)測(cè)定：手術(shù)時(shí)及術(shù)后6個(gè)月取少許胰腺組織，按重量體積比加生理鹽水制備成10%的組織勻漿，3 000 g離心10 min。取勻漿上清再用生理鹽水稀釋10倍，采用考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒檢測(cè)勻漿蛋白含量。另取10%的組織勻漿0.1 ml，加入MDA測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)的試劑，95℃水浴40 min。冷水冷卻后，1 000～3 000 g離心10 min。取上清液，測(cè)上清液的A532值。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算MDA含量，單位以nmol/mg prot表示。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、一般情況

3只貓手術(shù)后5 d內(nèi)死亡。死亡原因?yàn)槁樽硭幬镞^(guò)量、胰膽管吻合口漏等。存活的7只貓手術(shù)后第3天開(kāi)始進(jìn)食，精神、食欲良好，無(wú)萎靡、煩燥等表現(xiàn)，與術(shù)前基本情況相似。術(shù)后20 d膽囊造影顯示胰膽管吻合口通暢，合流共同通道延長(zhǎng)(圖1)。

二、胰腺病理改變

手術(shù)時(shí)見(jiàn)胰腺呈粉紅色，表面看不到胰管。術(shù)后6個(gè)月存活的7只貓的胰腺呈暗紅色、充血水腫，其中3只貓的胰腺表面可見(jiàn)擴(kuò)張的胰管(圖2)；鏡下見(jiàn)胰腺實(shí)質(zhì)壞死，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)血管增生，血管內(nèi)白細(xì)胞增多、附壁(圖3)。

圖1 胰膽管吻合口通暢，共同通道延長(zhǎng)

圖2 APBDU 造模術(shù)后6個(gè)月胰腺充血，胰管擴(kuò)張

圖3 造模貓的胰腺間質(zhì)血管增生，白細(xì)胞附壁(HE ×400)

三、超微結(jié)構(gòu)改變

術(shù)后6個(gè)月胰腺腺泡細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，有的呈池狀；線(xiàn)粒體腫脹，體積增大；高爾基復(fù)合體發(fā)達(dá)，數(shù)量增多；胰酶顆粒增多(圖4)。

四、胰腺組織MDA含量變化

手術(shù)前胰腺組織MDA含量為(1.23±0.7) nmol/mg prot，術(shù)后6個(gè)月為(2.90±1.9) nmol/mg prot，相差顯著(F=4.80，P=0.0215)。

圖4造模前(A)和造模術(shù)后6個(gè)月(B)胰腺腺泡細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化( ×4 000)

討 論

文獻(xiàn)報(bào)道，胰管膽管共同通道的出現(xiàn)率為55%～91%，共同管的長(zhǎng)度為1 cm左右[3-4]。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，成人共同通道長(zhǎng)度≥15 mm，小兒≥5 mm即可診斷為APBDU[5]。隨著內(nèi)鏡下逆行胰膽管造影術(shù)(ERCP)和磁共振胰膽管造影術(shù)(MRCP)等檢查的廣泛應(yīng)用，APBDU的檢出率越來(lái)越高。APBDU與胰腺、膽管等疾病的關(guān)系引起人們的關(guān)注[6-7]。APBDU常常合并急性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺癌[8-9]。Sugiyama等[10]報(bào)道，31%的APBDU患者合并急性胰腺炎，3%～4%的患者合并慢性胰腺炎，3%的患者合并胰腺癌。李索林等[11]報(bào)道，有APBDU的患兒胰腺腫大、變硬，胰管迂曲擴(kuò)張，有的合并蛋白拴。這是因?yàn)橐饶懝芎狭髟斐赡懼鸵纫和ㄟ^(guò)共同管交互反流，反流入胰管的膽汁破壞胰管上皮的黏膜屏障，使HCO3-經(jīng)胰管上皮逆行擴(kuò)散，造成細(xì)胞損害，膽汁的卵磷脂被胰液的磷脂酶A2分解為溶血卵磷脂，破壞胰腺細(xì)胞膜的完整性，從而導(dǎo)致胰腺炎。膽汁不斷刺激胰管上皮增生，可誘發(fā)胰腺癌。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，術(shù)后6個(gè)月胰腺的大體、組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)有不同程度的變化，類(lèi)似于胰腺炎的表現(xiàn)，表明APBDU可以損傷胰腺，提示APBDU是引起胰腺炎的原因之一。

呂維富等[12]用狗制作APBDU模型，瀕死的動(dòng)物腹腔內(nèi)大量棕褐色腹水，背胰和腹胰高度水腫、出血和片狀壞死。術(shù)后90～120 d狗的背胰和腹胰變硬，與周?chē)K器粘連，肝外膽管擴(kuò)張。本實(shí)驗(yàn)觀察到貓的胰腺僅輕度損傷。這可能與動(dòng)物種類(lèi)不同有關(guān)，因?yàn)樨埖囊认俳Y(jié)構(gòu)更接近于人類(lèi)的生理解剖，結(jié)果更符合人的狀態(tài)。

MDA是衡量氧自由基產(chǎn)生的一個(gè)指標(biāo)，可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接反映細(xì)胞損傷的程度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，術(shù)后6個(gè)月胰腺組織MDA含量較術(shù)前顯著增加，提示抗氧化有助于減輕APBDU患者的胰腺損害。

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2008-07-15)

(本文編輯：屠振興)

Effectofanomalouspancreaticobiliaryductalunionontheinjuriesofpancreas

CHENFeng,WANGJian,HUANGShun-gen,WANGXing-dong.

DepartmentofSurgery,NanhuiHospital,Shanghai201300,China

WANGJian,Email:wj196312@vip.163.com

ObjectiveTo investigate the effect of anomalous pancreaticobiliary ductal union on the injuries of pancreas.Methods10 health cats were treated by a 4～6 cm incision in biliary and pancreatic duct adjacent to duodenum, and interrupted suture was made to induce the model of anomalous pancreaticobiliary ductal union. The pancreatic tissues were harvested during model induction and 6 months after model induction, and histopathological changes were evaluated by electron microscopic examination and the level of maleic dialdehyde (MDA) were determined.ResultsSeven out of 10 cats survived surgery and remained alive for 6 months. 6 months later, the pancreas appeared to be in the color of dark red and hyperemia, edema was present. Dilated pancreatic duct could be found in three of them. Light microscopic examination suggested there was inflammatory cell infiltration in the pancreas in 3 cats; mesenchymal vascular proliferation and white cell adhesion was present in the pancreas in 4 cats. Electron microscopic examination suggested rough endoplasmic reticulum expanding in the shape of pool, swelling mitochondria disaggregated and increased in number, Golgi complex became well developed. The preoperative level of MDA in pancreatic tissue was (1.23±0.7)nmol/mg prot, which increased to (2.90±1.9)nmol/mg prot 6 months later with statistically significant difference (F=4.80,P=0.0215).ConclusionsThis animal model demonstrated that anomalous pancreaticobiliary ductal union may cause injury to the pancreas, and antioxidant treatment may alleviate this injury.

Pancreas; Malondialdehyde; Anomalous pancreaticobiliary ductal union; Cats

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2009.02.003

江蘇省135工程重點(diǎn)人才項(xiàng)目(2003098)

201300 上海，上海南匯醫(yī)院普外科(陳風(fēng))；蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院普外科(汪健、黃順根、王興東)

汪健，Email:wj196312@vip.163.com