細胞表面分化抗原CD15在264例成人白血病細胞上的表達

張任群　饒愛華　歐陽桂芳

近年來的研究表明，流式細胞術(FCM)檢測結果對于確定白血病的診斷與分型至關重要。以往采用橫向分析的方法對白血病進行免疫分型的報道較多，而對于某一個特定標志在白血病免疫學診斷中的作用報道較少。筆者采用CD45／SSC雙參數設門的多色FCM，對CD15在264例白血病患者白血病細胞中的表達作了分析，以進一步探討CD15對白血病患者的診斷意義。

1對象與方法

1，1對象

2001年3月--2007年8月來本院就診以及外院送本院作細胞表面標記檢查的白血病初診患者264例為觀察對象，其中男141例，女123例；年齡18-73歲，中位年齡48歲。急性白血病249例，按FAB標準診斷為急性淋巴細胞白血病(ALL)63例，急性髓細胞白血病(AML)186例；慢性粒細胞白血病(CML)15例，其中慢性期8例，急變期7例。

1，2方法

化療前采骨髓或靜脈血，肝素鈉抗凝。常規分離單個核細胞(MNC)，用0.1 mol／L磷酸鹽緩沖液(PBS，pH值為7.4)制成細胞濃度為106／mL的單細胞懸液備用。

1，2，1試劑

所用標準單克隆抗體(單抗)包括FITC、PE、PerCP或APC標記的CD10、CD19、CD20、CD22、CD2、CD3，CD5、CD7、CD56、CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33、CD41a、CD61、CD34、CD117、CD38、CD45、HLA—DR、髓過氧化物酶(MPO)等單抗均購自美國Becton—Dickinson公司。

1，2，2染色

白血病細胞膜染色按多色直接免疫熒光標記法進行染色。胞漿內MPO、CD22和CD3的檢測首先用1.0％的多聚甲醛固定，后加透膜劑，再進行三色直接免疫熒光標記法染色。PBS充分洗滌后行FCM檢測。各樣本均以4種熒光素標記的無關同型Ig亞類(均購自美國Becton—Dickinson公司)作為陰性對照。

1，2，3 FCM檢測用FACSCalibur流式細胞儀(Becton－Dickinson)和CeUQuest軟件獲取并分析10 000個細胞。通過CD45／SSC設門識別幼稚細胞群，再分析計算該幼稚細胞群各白血病相關抗原的陽性率。以白血病細胞表面抗原陽性率≥20.0％為抗原陽性病例。

1，3統計學方法

用SAS 6.0軟件包進行統計學處理，作相關分析和x²檢驗。

2 結果

2，1 CD15在各類白血病中的表達

186例AML患者中表達CD15有110例，陽性率為59.1％，63例ALL患者中只有11例表達CD15，陽性率為17.4％。CD15在AML中的陽性率高于在ALL中的陽性率(x²=41.2，P<0.01)。8例CML慢性期患者CD15均陽性，其CD11b亦均陽性，但CD34陰性；另7例CML急變期患者CD15陰性，其CD11b亦陰性，但CD34陽性。

2，2 CD15在AML各亞型中的表達

CD15在M0／M1、M2、M3、M4、M5、M6、M7中陽性率見表1。CD15在M5b中的表達率較高，為100.0％，高于其在粒細胞系亞型白血病(M0／M1、M2、M3)中的表達(x²=10.54，P<0.01)。8例M5a患者中CDl5陽性的4例。2.3 AML患者的CDl5表達與CD34、CD117、CD14和CD11b表達的相關性

在186例AML中，CD15與CD34、CD117的表達呈負相關(r=-0.22，P<0.05；r=-0.29，P<0.05)，與CD14、CD11b的表達呈正相關(r=0.53，P<0.01；r=0.40，P<0.01)

3討論

白血病患者FCM分析在白血病臨床診斷中的作用越來越受到重視，隨著該技術的不斷普及及臨床實際工作的需要，非常有必要對每個單一標志在白血病中的診斷作用及其局限性予以闡明。CDl5(又叫粒細胞相關抗原，或Lewisx)是細胞黏附分子(CAMs)的成員，由半乳糖、巖藻糖和N－乙酰葡萄糖胺組成的碳水化合物抗原，屬選擇素家族成員中的P選擇素(CMP－140)和E－選擇素(ELAM－1)的配基。正常情況下，它主要在成熟單核細胞、粒細胞上表達。白血病免疫表型研究發現，CDl5屬于髓系相關分化抗原，但它在各亞型AML以及淋巴系白血病中的交叉情況不甚明確，且由于所采用的研究方法、試劑質量等的不同，各研究報道不盡相同。目前，采用CD45／SSC雙參數設門策略的多參數FCM分析白血病的免疫學特征標準方法，能清楚地區分骨髓或外周血中的淋巴細胞、單核細胞、粒細胞、有核紅細胞和原始細胞群。筆者嚴格采用這一方法和應用一系列高質量標準單抗對較大樣本白血病細胞CDl5的表達作了較為詳細的分析，結果可靠。在264例白血病患者中，59.1％的AML患者中CDl5表達陽性，而ALL患者陽性率僅為17.4％。因此，結合髓系以及淋系的一些特異性抗原表達情況，CD15有助于髓系和淋系白血病的區分。CD25在急性單核細胞白血病(M5b)患者表達高，陽性率為100.0％，而在粒細胞系白血病(M0／M1、M2、M3)病例中的陽性率分別為31.4％、50.0％和50.0％，因此，CD15有助于M5b與M0／M1、M2、M3的區分。在M5病例中，CD25在分化較好的急性單核細胞白血病(M5b)中100.0％表達，而在分化較差的單核細胞白血病(M5a)中的陽性率僅為50.0％，這可能有助于M5的分型，由于病例數較少，有待進一步積累觀察。另外。在AML病例中，我們發現CD15與CD34、CD117的表達呈負相關性，與CD14、CD11b表達呈正相關。一般認為，CD34和CD117是不成熟的分化抗原，而CD14和CD11b是較為成熟的髓細胞系標志，說明CD15也是一個髓系細胞分化較為成熟的標志。文獻報道CD15和CD117結合分析可監測AML殘留病。在4例CML病例中，CD15在CML慢性期病例中表達，而在急變期細胞上則不表達，提示CD15的檢測可能有助于CML慢性期與急性期的鑒別，同時結合CD15以及CD117、CD34表達的觀察可能有助于CML細胞分化程度的判斷，但由于病例數過少，有待于進一步積累病例數加以分析。綜上所述，本文資料表明：①CD15結合髓系以及淋系的一些特異性抗原表達情況，有助于髓系和淋系白血病的區分；②CD15有助于M5b與M0、M1、M2、M3的區分；③結合CD11b以及CD34的表達情況，有助于CML的診斷。