反相高效液相色譜法同時測定來曲唑含量及有關(guān)物質(zhì)

摘要 目的：采用反相高效液相色譜法同時測定來曲唑含量及有關(guān)物質(zhì)。方法：使用Agilent1100型高效液相色譜儀和ZORBAXXDB-C18色譜柱(150×4.6mm，5μm)，在流動相為水：乙腈=60：40、流速為1.0mL／min、紫外檢測波長為230n／n的條件下測定來曲唑含量及有關(guān)物質(zhì)。結(jié)果：來曲唑含量測定的線性范圍為2～100μg／mL，相關(guān)系數(shù)為0.99996。日內(nèi)和日間精密度均良好(RSD<1.0％)，且雜質(zhì)和中間體對來曲唑及含量測定沒有影響。結(jié)論：本方法測定來曲唑含量及有關(guān)物質(zhì)操作簡便，結(jié)果正確，靈敏度高。

關(guān)鍵詞 來曲唑 有關(guān)物質(zhì) RP-HPLC 含量測定

中圖分類號：TQ460.72；O657.72 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-1533(2010)03-0136-02

來曲唑(letrozole)是Novartis公司開發(fā)上市的一種非甾體類芳香酶抑制劑，主要用于治療晚期乳腺癌。在美國藥典(USP)27版中，來曲唑含量和有關(guān)物質(zhì)測定均采用高效液相色譜法(HPLC)梯度洗脫法。但在國內(nèi)，來曲唑含量測定采用容量滴定法，而有關(guān)物質(zhì)測定采用HPLC法。筆者在實(shí)際工作中經(jīng)對上述兩種方法進(jìn)行比較，建立了更為簡便的HPLC方法，可以同時進(jìn)行來曲唑含量及有關(guān)物質(zhì)的測定。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，證實(shí)此方法簡單、靈敏，專屬性強(qiáng)，定量結(jié)果準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

1.1儀器

Agilent1100型高效液相色譜儀，包括G1314AVWD檢測器、G1315BDAD檢測器、G1311A型四元泵、G1329A型自動進(jìn)樣器、G1316A型柱溫箱和G1322A型脫氣機(jī)。

1.2試藥

來曲唑?qū)φ掌?USPreferencestandard，CATNO：35697；LOT：FOB170；USPROCKVILLE，MD)，來曲唑雜質(zhì)對照品(USPreferencestandard，CATNO：1356982：LOT：GOD298；USPROCKVILLE，MD)，來曲唑(本公司研制樣品)及各中間體(本公司研制)，乙腈(色譜純)和水(超純水)。

2 方法與結(jié)果

2，1色譜條件

色譜柱：C18(ZORBAXEclipseXDB-C18150×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈：水--40：60；檢測波長：230nm；流速：1.0mL／min；進(jìn)樣量：20μL；稀釋劑：流動相。

2.2波長的選擇

根據(jù)來曲唑與各雜質(zhì)及中間體在DAD上的光譜掃描可以看出，來曲唑及其雜質(zhì)在230～240nm有較大吸收，而芐唑在240nm處的吸收較小且對氟苯腈在240nm處幾乎沒有吸收。考慮以上雜質(zhì)(即中間體)因素，選定波長為230nm。

2.3專屬性試驗(yàn)

分別取來曲唑?qū)φ掌贰砬螂s質(zhì)及各中間體適量，用溶劑溶解、稀釋制取每毫升含0.01mg的溶液，進(jìn)行定位。另取來曲唑?qū)φ掌贰砬螂s質(zhì)及各中間體配制成含來曲唑8μg／mL及含其它各組分4μg／mL的溶液作為專屬性試驗(yàn)用溶液。進(jìn)樣測定結(jié)果顯示，主成分峰不脫尾，理論塔板數(shù)大于5000，且能與4個中間體和雜質(zhì)完全分離，各峰之間的分離度均大于1.5，各組分出峰時間均在主成分峰保留時間2.5倍以內(nèi)，溶劑對測定無干擾，證明本色譜系統(tǒng)的專屬性良好。

此外，再分別取來曲唑精制品適量，分別用2％過氧化氫溶液、1mol／L鹽酸溶液和1mol／L氫氧化鈉溶液充分浸潤后放置24h，在60℃下烘干；另取來曲唑精制品適量，在紫外燈下照射36h，進(jìn)行破壞試驗(yàn)。測定結(jié)果顯示，本色譜條件可以將各破壞條件下的降解產(chǎn)物與主成分完全分離，由此進(jìn)一步證明本色譜系統(tǒng)的專屬性良好。

2.4最低檢測限

取來曲唑樣品適量，用流動相溶解并稀釋配置成一定濃度的溶液進(jìn)行測定，測得其最低檢測限為0.2ng。

2.5線性范圍

取來曲唑樣品20mg至100mL容量瓶中，用稀釋劑溶解，搖勻，精密量取1、3、5、7、10、15、25、35、50mL分別置于100mL棕色量瓶中，用稀釋劑定容，搖勻。取上述溶液在選定的色譜條件下，進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖，根據(jù)峰面積計算，測得數(shù)據(jù)經(jīng)線性回歸得回歸方程：y=113.91x+24.396，r=0.99996，說明來曲唑在2～100μg／mL濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.6精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取來曲唑樣品溶液(濃度為10μg／mL)20μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，發(fā)現(xiàn)來曲唑樣品峰的RSD值為0.04％。連續(xù)測定3d，日間精密度RSD為0.24％。

另外，在第0、第2、第4、第8、第16和第24h分別取10μg／mL的來曲唑樣品溶液20μL注入液相色譜儀。記錄色譜圖，結(jié)果見峰面積基本沒有變化，RSD為0.22(N=6)，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7有關(guān)物質(zhì)測定

取來曲唑樣品10mg至100mL容量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取適量，加稀釋劑制成每1mL中含1μg的溶液作為自身對照溶液。另外，取來曲唑?qū)φ掌泛蛠砬螂s質(zhì)A適量，用稀釋劑制成濃度為每1mL含10μg來曲唑和每1mL含2μg來曲唑雜質(zhì)A的溶液作為系統(tǒng)適用性溶液。分別精密量取供試品溶液與自身對照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍，且其中來曲唑和來曲唑雜質(zhì)的分離度應(yīng)大于1.5。供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，則除溶劑峰外，雜質(zhì)A的峰面積不得大于自身對照溶液主峰面積的0.3％，其它單個雜質(zhì)不得大于自身對照溶液主峰面積的0.1％，其它總雜質(zhì)不得大于自身對照溶液主峰面積的0.3％。3批樣品測定結(jié)果，總雜質(zhì)分別為0.10％、0.07％和0.03％。

2.8含量測定

取來曲唑樣品適量，精密稱定，加稀釋劑溶解并定量稀釋制成每1mL中約含10μg的溶液，精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取來曲唑?qū)φ掌罚y定，按外標(biāo)法以峰面積計算樣品含量。結(jié)果顯示，3批樣品中的來曲唑含量分別為99.06％、98.76％和98.45％。

3 討論

按USP27版方法使用梯度洗脫法測定來曲唑含量及有關(guān)物質(zhì)，基線有一定的漂移，影響雜質(zhì)的判斷，且色譜柱也需采用非常規(guī)的柱子，成本較高，操作較煩瑣。國內(nèi)采用滴定法測定含量，用色譜法測定有關(guān)物質(zhì)，檢測的條件不一致，也較繁瑣。筆者采用本文方法測定來曲唑含量和有關(guān)物質(zhì)，可以達(dá)到滿意的效果。經(jīng)方法學(xué)研究，此法簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高。

在各專屬性試驗(yàn)中，均采用二極管陣列檢測器檢測來曲唑峰的純度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)純度系數(shù)均良好，證明本色譜系統(tǒng)的專屬性良好。