針刺足三里對小鼠皮膚光老化的影響

[摘要]目的:研究針刺足三里對紫外線照射引起的無毛小鼠皮膚光老化模型皮膚組織丙二醛(MDA)含量、超氧化

物歧化酶(SOD)活力的影響。方法:實驗選取2月齡健康昆明種無毛小鼠32只，雌雄各半，體重18～22g。隨機分成4組:正常對照組、模型組、針刺組、電針組，每組8只。用紫外線燈管模擬紫外線照射，造成無毛小鼠皮膚光老化，造模同時針刺小鼠足三里，采用生化分析方法測定SOD活性及MDA含量。結果:與對照組比較，模型組無毛小鼠皮膚組織SOD活性明顯降低(P<0.01)，MDA 含量明顯增加(P<0.05);與模型組比較，針刺組和電針組對SOD 活性有提高作用(P<0.05)，并可降低MDA 含量(P<0.01)。結論:針刺足三里對紫外線照射引起的無毛小鼠皮膚光老化具有保護作用。其機制可能是:一方面足三里本身具有清除自由基的作用;另一方面可以通過提高SOD活力來達到抗氧化的目的，從而達到抗皮膚光老化的目的。

[關鍵詞]足三里;針刺;皮膚;光老化;超氧化物歧化酶;丙二醛

[中圖分類號]R245.31[文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455(2010)01-0104-03

Influence to the skin-photoagedemouse caused by acupunctrueing Zusanli

JIN Xiao-zhe1 ，WU Jing-dong2 ，YAN Hai-hui2

(1.Hanfang Cosmetic and Artistic School，Yuanguang Digital Univresity of Korea;2.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine)

Abstract:Objective To investigate acusing Zusanli acupoint influence on the content ofMalondialdehyde(MDA) in the skin of hireless photoageing mice as well as the activity of Superoxide Dismutase (SOD) in their skin. Methods Healthy KM hireless mice were divided into four groups randomly and gavaged respectively， that is negative Control Group (A)，Model Group (B)，needling group(C)， electroacupuncture group(D)，The mice in B，C，D group were irradiated to simulate skin photoageing by long-term ultraviolet irradiation， at the same time ，the C，D group were acupunctured in Zusanli acupoint. While the changes of the contents of Malondialdehyde，as well as the activity of Superoxide Dismutase were measured by biochemical test method in each group of the experiment. Results Compared with the group A ， In model group ，the activity of SOD was decreased(P<0.01) ，while the content of the MDA was increased seriously(P<0.05). Compared with the group B， The contents of MDA in dermal in group C and D had difference with that in group B ，the activity of SOD in dermal in group C and D was increased(P<0.05)，while the content of MDA was reduced(P<0.01). Conclusions Acusing Zusanli acupoint has theprotective effect on the skin of the photoageing hairless mice. The mechanism may be that on one hand， Zusanli acupoint could eliminate free radicals itself， on the other hand ， by increasing the activity of SOD， it could inhibit the oxidative damages of ultraviolet and skin photoage.

Key words: Zusanli acupoint;acupuncture;skin; photoageing;superoxide dismutase (SOD);malondialdehyde(MDA)

隨著人們生活水平的提高，人們對美的要求也逐漸升溫，養顏駐顏已成為眾多學者研究的內容。針灸美容越來越受到學者們的認識，針灸美容作為一種常用的美容方法也逐漸得到認可。為了探討針灸美容的機制，我們以紫外線照射引起的無毛小鼠皮膚光老化模型作為研究對象，進行了本項研究，現將結果報道如下。

1材料和方法

1.1材料:由遼寧中醫藥大學實驗動物中心提供健康昆明種小鼠，2個月齡，雌雄各半，體重18～22g。-70℃冰箱、勻漿器、離心機、恒溫水浴箱、分光光度計、各種手術用的醫療器械(均由遼寧中醫藥大學基礎醫學院分子生物學實驗室提供)，針刺用針(0.5寸毫針)、韓氏WQl002F型多用電針儀由遼寧中醫藥大學實驗針灸教研室提供。10%水合氯醛，SOD、MDA測定試劑盒(均購于南京建成生物工程研究所)。

1.2方法

1.2.1實驗動物及分組:將32只無毛小鼠隨機分成4組:正常對照組、模型組、針刺組、電針組，每組8只。每組無毛小鼠按性別及組別分籠飼養，其中雄性鼠全部分籠飼養。在自然、相同環境下，常規飼食飲水，無不良因素影響，飼養1周適應實驗室環境后開始進行實驗。

1.2.2造模前準備:將實驗用及針刺用小鼠稱重，然后腹腔注射10%水合氯醛麻醉(0.35ml/100g)，待麻醉后用繩將其仰面捆綁在鼠架上，用碘伏消毒足三里部位。

1.2.3針刺方法:針刺組:以32號0.5寸毫針針刺小鼠膝關節外側腓骨小頭下3.5mm“足三里”穴，直刺3.5mm，平補平瀉針法，留針10min，隔日一次，共持續30天。電針組:電壓l～3V，疏密波，頻率2～20Hz，刺激時間10min，以小鼠肢體或針柄微微顫動為度。隔日一次，共持續30天。

1.2.4造模方法:40W UVB 燈管4根(光譜集中在297nm )，UVA燈管2根(光譜集中在365nm)(燈管購于北京電光源研究所)并列穿插安裝到自制模擬日光箱中。將無毛小鼠分別放入自制照射盒中，將鼠盒分別放于照射箱的左前、左后、右前、右后位置，距離燈源20cm處，每次照射前輪換鼠盒位置，燈管預熱10min。開始第一天照射1h，2天后改為2h ，1周后改為3h，并保持該劑量直至結束。照射以5天為一個周期，間隔2天，再開始下一個周期。累計照射UVA 304.5J/cm2，UVB 6.3J/cm2，達到文獻記載紫外線輻照強度，照射時間總計為一個月。

1.2.5取材:造模一個月后，斷頸處死全部小鼠，立即取下背部照射處全層皮膚(不含皮下脂肪)，面積為2cm×3cm。冷凍于-70℃冰箱內保存待測。

1.3 指標測定:每個小鼠皮膚組織標本取0.5g，在冰生理鹽水中漂洗，除去血液，用濾紙拭干，皮膚組織SOD活性的測定采用黃嘌呤氧化酶法，皮膚丙二醛含量分別采用硫代巴比妥酸法。各項指標的具體測定原理、指標測定前各試劑的配制方法以及每項指標蛋白含量的測定方法等均按照試劑盒說明書進行測定。用BECKMAN DU-600核酸蛋白分析儀測定每項指標的吸光值，并根據試劑盒說明書提供的公式計算所需數據。

1.4 統計學處理:所有數據均通過SPSS11.0軟件進行處理，各組實驗參數以x±s 表示。組間差異按方差分析進行顯著性檢驗，并用最小顯著差法(LSD法)作兩兩比較。

2結果

2.1 皮膚組織SOD活性測定:與正常對照組相比，模型組的SOD活性明顯低于正常對照組，且有顯著性差異，說明紫外線照射可使無毛小鼠皮膚組織SOD活性明顯受到抑制;針刺組和電針組與正常對照組相比均有顯著性差異。針刺組和電針組與模型組比較，SOD活性明顯提高，且有顯著性差異。說明針刺能夠使小鼠皮膚組織中SOD活性升高(見表1)。

2.2 皮膚組織MDA含量測定:與正常對照組相比，模型組的MDA含量明顯高于正常對照組，且有顯著性差異，說明紫外線照射可使無毛小鼠皮膚組織MDA含量明顯增加。針刺組和電針組與模型組比較，無毛小鼠皮膚組織MDA含量降低，且有顯著性差異。說明針刺能夠使小鼠皮膚組織中MDA含量降低(見表2)。

3討論

衰老(senescence)是一種多環節的生物學過程，使機體在退化時期功能下降和紊亂的綜合表現。簡而言之，衰老就是體內各臟器細胞功能減低的現象[1]。皮膚衰老的形成與多種因素有關，隨著當今醫學模式的轉變及人們保健意識的加強，運用中醫學的理論采取一系列行之有效的方法對延緩皮膚衰老有一定積極作用。針灸從古至今一直是保健抗衰老的常用方法，而其中胃經的足三里為常用穴位。

脾胃為氣血生化之源，后天之本，陽明胃經多氣多血，善調氣血，且胃經對于脾胃具有良好的雙相調節作用，從而調節整體的氣血陰陽使其達到平衡的狀態。而人體是一個有機整體，所謂“皮之不存，毛將焉附”，“有諸內必形諸外”，機體的衰老必然導致皮膚的老化，皮膚衰老不僅是機體衰老的一部分，也是對臟腑氣血虛衰的一個外在反映。通過調整經絡氣血陰陽達到抗衰老的目的，而“色隨氣華”。經絡通暢，氣血充而不滯，陰平陽秘，必然可達“外濡腠理”之功。使面色悅澤濡潤，以達美容顏，悅肌膚，抗皮膚衰老之效。足三里穴為臨床上常用的要穴，古云“三里功多數不清”。此穴除用于臨床治療外，對于防病和抗衰老亦存重要的影響[2-3]。金元時代的李東垣就提倡“以胃合三里穴推而揚之以伸元氣”，認為刺激足三里穴有補益脾胃、振奮元氣之功。因此針刺按摩足三里不僅具有抗整體衰老的作用，對于皮膚的衰老也是很有效的。

機體在正常代謝中，不可避免地產生許多自由基，這是一種強氧化劑，對機體起破壞作用，引發機體衰老。但因體內同時存在著自由基防御系統，如超氧化物歧化酶，保護機體免受損傷[4]。年老時自由基防御系統下降，谷胱甘肽過氧化物酶等活性減弱，引起大量不飽和脂肪酸氧化，造成生物膜破壞，DNA突變，蛋白質變性等細胞廣泛性損傷，從而促進機體衰老。而針刺能顯著提高谷胱甘肽過氧化物酶活性，抑制脂質過氧化。因此證明針刺具有抗氧化作用，增強酶的活性，消除自由基，抑制脂質過氧化這一途徑而實現的。本實驗結果使自由基損傷學說得到驗證，皮膚呈現光老化外觀，與紫外線照射引起自由基產生過多，抗氧化酶活性降低密切相關[5]。減少自由基的產生和清除老化代謝產物，提高抗氧化酶活性確實是目前延緩皮膚光老化的有效方法。因此，用中醫的方法清除自由基對抗光老化，正以其高效無副作用優勢成為中醫學一個十分活躍的研究領域。從本次實驗的結果來看，針刺足三里能夠通過提高SOD活性達到清除自由基的目的，從而抗皮膚的光老化。其機制可能因為足三里穴位本身即是具有強身，保健抗衰老作用穴位，通過針的刺激，可達到清除體內過多的自由基，延緩衰老的作用。

此外，本實驗分組中加入了電針與手針的對照比較，是為了檢驗這兩種常用針刺方法作用效果的異同。實驗中電針組小鼠連接的韓氏電針儀，我們選用的波形為隨機變化的疏密脈沖波(頻率為2～100Hz交替)，電壓l～3V，以動物肢體微顫為度，是由于這種波形電脈沖的頻率隨時發生不規律的變化， 機體不易產生電刺激適應現象[6]。結果發現，電針組與手針組小鼠各項指標均無顯著性差異，說明手針和電針這兩種干預手段的作用效果接近。

本研究以自由基學說和針灸理論為基礎，通過實驗表明針灸足三里穴能夠使光老化小鼠皮膚組織中的丙二醛(MDA)含量減少，超氧化物歧化酶(SOD)活力增強，從而說明針刺足三里穴能夠改善皮膚組織新陳代謝，對皮膚衰老具有一定的拮抗作用。

綜上，我們認為針刺足三里可通過激發機體的內在調節能力，從而起到延緩衰老，具有防護紫外線引起的皮膚光老化作用，且從抗自由基角度分析，其抗光老化的作用機制可能是通過提高SOD活性減少自由基代謝產物的堆積以及其本身具有清除自由基的協同作用而發揮的。

[參考文獻]

[1]王詩晗，吳景東.皮膚衰老中醫機理探討[J].遼寧中醫雜志，2003，30(10):800.

[2]陳 波，劉明軍.針灸抗自由基氧化延緩衰老現代研究概況袁萬清[J].吉林中醫藥，2004，24:112.

[3]崔九孟.足三里穴防病、抗衰老作用的研究[J].中國針灸，2002，1(104):5.

[4]劉慶中，劉一凡，鄭灝泳.針刺對SAM-P/10小鼠腦組織CAT/G SH-PX活性的影響[J].針灸臨床雜志，2001，17(4):51-53.

[5]周鴻波.皮膚老化及其免疫學、自由基損傷學說的研究進展[J].遼寧中醫雜志，2004，3(3):123.

[6]顧訓杰.電針刺激穴位增強小白鼠體力作用的觀察 [J].針灸臨床雜志，1998，14(12):9-10.

[收稿日期]2009-10-15 [修回日期]2009-12-20

編輯/李陽利