山東省局部地區番茄黃化曲葉病毒的分子鑒定

摘 要:近年來山東省部分地區發現番茄黃化曲葉癥狀。為了確定這種疑似病毒，利用雙生病毒外殼蛋白(CP)基因及DNA-A基因組的引物對棗莊、菏澤和淄博的染病番茄葉片進行了檢測，測序分析表明這種病毒是番茄黃化曲葉病毒(TYLCV)。系統發育分析結果表明，該病毒可能是由我國東南沿海地區和日本傳入的。

關鍵詞:番茄黃化曲葉病毒;山東省;PCR

中圖分類號:S436.412⁺1(252)∶Q789 文獻標識號:A 文章編號:1001-4942(2010)02-0013-04

番茄黃化曲葉病毒(TYLCV)(Geminiviridae:Begomovirus)屬于煙粉虱傳染病毒，該病毒引起的番茄黃化曲葉病(TYLC)的主要癥狀是植株上部葉片黃化，葉邊緣上卷，葉片變小，植株明顯矮化。番茄黃化曲葉病導致番茄產量大幅降低甚至絕產。目前我國已在云南、廣西[1，2]多省份報告發現番茄黃化曲葉中國病毒(TYLCCNV)，但是番茄黃化曲葉病毒首先被發現是在2006年的上海和浙江[3，4]。這些資料表明，番茄黃化曲葉病毒主要分布在我國的東南沿海地區。

在過去的3年中(2007～2009年)，山東省許多地區發現番茄黃化曲葉癥狀。為了確定這種疑似病毒，本研究利用雙生病毒外殼蛋白(CP)基因[5]及DNA-A基因組的引物[3]對棗莊、菏澤和淄博的染病番茄葉片進行了檢測，同時根據系統發育分析探討了該病毒的傳入途徑及來源。

1 材料與方法

1.1 材料采集與植物總DNA的提取

感病的病毒植株分別采自棗莊、菏澤和淄博地區，-20℃保存備用。植物葉片總DNA的提取利用北京全式金生物技術有限公司植物基因組DNA提取試劑盒。提取的總DNA用1%的瓊脂糖電泳檢測后，貯備在-20℃的冰箱中備用。

1.2 外殼蛋白基因的PCR擴增與測序

1.4 序列同源性分析

將測序結果提交GenBank。對棗莊、菏澤和淄博外殼蛋白基因片段進行了BLAST初步分析。對于棗莊、淄博植株病毒DNA-A基因組序列，以中國臺灣番茄曲葉病毒(ToLCTWV)、菲律賓番茄曲葉病毒(ToLCPV)序列為外群，用Clustal W多序列對位排列程序與GenBank已知番茄黃化曲葉病毒(表1)進行對位排列，并輔以人工校對。用MEGA4.1軟件，采用Kimura 2-paramter距離矩陣、最小進化法(ME)以及鄰位法(NJ)構建系統樹，系統樹各分支置信度(bootstrap)均進行

2 結果與分析

2.1 基于外殼蛋白(CP)基因對植物病毒初步鑒定

從棗莊、菏澤和淄博染病葉片總DNA中獲得的外殼蛋白(CP)基因在GenBank中的登錄號分別為FJ939638、FJ939639、GQ352539，BLAST分析證實它們與番茄黃化曲葉病毒相關性大于95%。

2.2 基于DNA-A基因組進行系統發育分析

棗莊、淄博植株病毒DNA-A的完整基因組在GenBank的登錄號分別為GQ352538、GQ352537。系統發育樹(圖1)表明，所有番茄黃化曲葉病毒均為一支。我國番茄黃化曲葉病毒主要分布于2個分支中。一個分支是由本研究中發現的病毒(GQ352538、GQ352537)、浙江(AM698117、AM698118)、上海(AM282874)、山東(FN256257)、日本(AB192965、AB192966)[6]番茄黃化曲葉病毒組成;另一支由上海(EU031444)、浙江(AM698119)、江蘇(FN256259)、日本(AB363566)、美國(EF539831)和墨西哥(EF210555)番茄黃化曲葉病毒組成。

3 結論與討論

本研究結果表明，在山東省各地發現的番茄疑似病毒病是由番茄黃化曲葉病毒導致。這表明，該病毒在過去幾年內在我國不斷擴散。系統發育分析表明，山東省的番茄黃化曲葉病毒與鄰省江蘇的番茄黃化曲葉病毒并沒有聚為一支，而與東南沿海或日本的番茄黃化曲葉病毒聚為一支，這表明山東省的番茄黃化曲葉病毒可能是從我國東南沿?；驈娜毡緮U散進入，而不是由鄰近的江蘇省傳入。

近年來，我國煙粉虱的生物型正在發生著變化。例如，近年來山東省煙粉虱的優勢生物型由B型逐漸變為了Q型[12]。且煙粉虱在山東省發生范圍廣[7]，某些地區種群數量大[8]，對當地作物、蔬菜等造成嚴重損失[9～11]。這種生物型的變化是否與番茄黃化曲葉病毒的傳入相關有待于進一步的研究。

參 考 文 獻:

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