超高效液相色譜-申聯質譜測定蒜苔中多菌靈和噻菌靈的殘留置

摘要：建立了用超高效液相色譜一串聯質譜測定蒜苔中多菌靈和噻菌靈殘留量的方法。用甲醇一鹽酸溶液提取試樣中的多菌靈和噻菌靈，經固相萃取凈化，以ACQUITY UPLCBEH C18柱分離、串聯質譜測定。多菌靈和噻菌靈的最低檢出限均為1.0 μg/kg；多菌靈回收率為92.8％～103.2％，相對標準偏差為3.57％～5.01％；噻菌靈回收率為90.9％～102.5％，相對標準偏差為3.44％～4.97％。

關鍵詞：超高效液相色譜一串聯質譜；蒜苔；多菌靈；噻菌靈；殘留

中圖分類號：X836.02 文獻標識號：A 文章編號：1001－4942(2010)04－0089－03

蒜苔是我國人民喜食的一種蔬菜，隨著蔬菜保鮮技術的應用，蒜苔可儲存半年以上而保持品質基本不變。多菌靈和噻菌靈是蒜苔儲存中經常使用的保鮮劑，經噴霧或浸蘸后的蒜苔，不但可以延長儲存時間，還可保鮮、保綠。我國對多菌靈和噻菌靈在蔬菜中的殘留有明確的限量要求，報道的多菌靈和噻菌靈的殘留檢測方法主要有：分光光度法、液相色譜法、離子交換色譜等。采用液相色譜－質譜技術同時測定多菌靈和噻菌靈殘留的方法未見報道。本文介紹了超高效液相色譜－串聯質譜測定蒜苔中多菌靈和噻菌靈殘留量的方法，操作步驟簡單，定性、定量準確可靠，靈敏度高，可以滿足儲藏蒜苔中多菌靈和噻菌靈殘留量的檢測要求。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

甲醇：色譜純；乙酸銨：分析純；冰乙酸：優級純；超純水：18.2 MΩ；鹽酸：優級純；2.0％甲酸(分析純)溶液；甲醇一氨水：含5.0％氨水；多菌靈、噻菌靈標樣：99.0％，購自國家農藥質檢中心(沈陽)；多菌靈、噻菌靈標樣溶液：分別稱取10.0mg多菌靈和噻菌靈標樣，加入0.1 mol/L鹽酸0.5 ml溶解，用甲醇定容于同一只100 ml容量瓶中，此溶液中多菌靈、噻菌靈濃度均為100 wg/ml，作為貯備標準液，于4℃避光存儲。

1.2 儀器

超高效液相色譜一串聯質譜聯用儀：WatersQuattro Premier XE，配有ESCI復合電離源；色譜柱：ACQUITY UPLCBEH C18.50 mm×2.1mm(i，d)，1.7μm；Oasisa MCX固相萃取柱：Waters公司，60 mg/3ml；0.22μm有機樣品過濾器；食品粉碎機；均質機；離心機；氮吹儀。

1.3 試驗條件

1.3.1 色譜操作條件流動相：A相為甲醇；B相為0.1％甲酸水溶液。梯度洗脫：0～0.5 min，10％A；0.5～4.0 min，10％A線性變化至60％A；4.0～5.0 min，60％A線性變化至90％A；5.0～5.1 min，90％A線性變化至10％A；5.1～7.0min，10％A。流速：0.30 mL/min；柱溫：40℃；進樣量：10 μl。

1.3.2 質譜檢測條件ESI正離子檢測模式：毛細管電壓為3.2 kV；錐孔電壓見表1；離子源溫度為110℃；脫溶劑氣溫度為400℃。

脫溶劑氣(N2)流量t600 L/h；錐孔氣(N2)流量：50 L/h；碰撞室壓力：0.36 Pa。

質譜分辨率：單位質量分辨；掃描模式：MRM(多反應監測)。

多菌靈、噻菌靈定性、定量離子見表1。

1.4 測定步驟

1.4.1 標準曲線將多菌靈、噻菌靈混合標準貯備液依次稀釋成濃度為1.0、5.0、10.0、50.0、100.0ng/ml的系列標準溶液，分別進樣測定，以定量離子色譜圖中的峰面積定量，繪制標準曲線。

1.4.2 樣品處理

準確稱取5.00 g(精確至0.01 g)充分粉碎并混勻的蒜苔試樣勻漿，置于50ml聚丙烯離心管中，移入甲醇10 ml、0.1 mol/L鹽酸溶液5 ml，20 000 r/min均質2 min，超聲波提取15 min，4 000 r/min離心5 min。全部提取液和固形物通過墊有雙層濾紙和5g助濾劑Celite 545的布氏漏斗過濾，濾餅用20ml甲醇分3次洗滌，濾液全部轉移至50 ml容量瓶中，用1+1(體積比)的甲醇水溶液定容至刻度，搖勻備用。準確移取此溶液20 ml于100 ml分液漏斗中，分別用20、10ml正已烷萃取2次，棄去正己烷相，甲醇－水相備用。

取一支MCX固相萃取柱，用5ml甲醇、5 ml水活化，將正己烷萃取后的溶液10 ml通過小柱，依次用2.0％甲酸溶液5 ml、甲醇5 ml淋洗固相萃取柱，棄去流出液后抽干小柱。用5 ml甲醇－氨水洗脫，收集全部流出液于10 rnl刻度試管中，在氮吹儀上緩慢吹至近干，加入1.00 ml甲醇－0.1％甲酸溶液(體積比1：9)，漩渦混合1 min，搖勻。過0.22μm有機樣品過濾器后進樣測定，標準曲線定量。

2 結果與分析

2.1 色譜條件的選擇

試樣中多菌靈和噻菌靈常采用反相色譜分離，由于要采用正離子模式檢測，必須使用酸性流動相，以保證兩組分充分電離。試驗了甲醇+0.1％甲酸溶液以及甲醇+乙酸銨溶液等流動相。經比較，使用含有甲酸溶液的流動相，兩組分均以陽離子形式存在，保留時間較短，難以分離；使用甲醇+20 mmoL/L乙酸銨溶液為流動相，采用梯度洗脫方式分離試樣中的多菌靈和噻菌靈，兩組分保留時間適中，峰形良好。

2.2 質譜條件的選擇

用流動注射法(HA)對1 mg/L多菌靈、噻菌靈標準溶液直接進行質譜分析，通過母離子掃描和子離子掃描，確定了多菌靈、噻菌靈的監測離子，并優化了毛細管電壓、離子源溫度、脫溶劑氣溫度和脫溶劑氣流量、錐孔氣流量、錐孔電壓、碰撞能量等參數。

2.3 提取凈化方法

試樣采用甲醇一鹽酸溶液提取，目的是將多菌靈和噻菌靈轉化為鹽酸鹽，以保證較好的提取效果。由于甲醇的存在，蒜苔中的脂溶性色素也被部分提取出來，用正己烷萃取2次，可有效去除絕大部分脂溶性色素，多菌靈和噻菌靈由于成為陽離子而保留在甲醇一水相中。采用兼有陽離子交換和反相機理的MCX固相萃取柱再次凈化，可以選擇性地保留多菌靈和噻菌靈陽離子，而有效去除其它的雜質。經加標回收試驗證實，基本無基質效應，凈化效果顯著。

2.4 線性范圍和檢出限

配制系列濃度的多菌靈、噻菌靈混合標準溶液，分別進樣測定，以多菌靈(噻菌靈)的峰面積(Y)對其濃度(x，ng/m1)繪制標準曲線，線性方程為Y=1529.4X+416.18(多菌靈)，Y=1386.5X+354.21(噻菌靈)；R2分別為0.9982(多菌靈)、0.9991(噻菌靈)。結果表明，在1.0～100.0 ng/ml范圍內，具有良好的線性關系，符合定量要求。

在本試驗選定的最佳檢測條件下，當空白試樣中多菌靈/噻菌靈的添加量為1.0 μg/kg時，定量離子色譜峰的信噪比s/n≥10，由此確定方法的最低檢出限為1.0μg/kg。

2. 5方法精密度與回收率

向不含多菌靈、噻菌靈的蒜苔試樣中添加1.0、5，0、10.0μg/kg 3個濃度水平的多菌靈和噻菌靈標樣溶液，分別進行6次平行測定。結果多菌靈回收率為92.8％～103.2％，相對標準偏差為3.57％～5.01％；噻菌靈回收率為90.9％～102.5％，相對標準偏差為3.44％～4.97％。

3 結論

建立了固相萃取凈化、超高效液相色譜一串聯質譜聯用測定蒜苔中多菌靈和噻菌靈殘留量的方法，應用該方法測定了30批市售蒜苔樣品，結果有9批樣品檢出噻菌靈殘留，1批檢出多菌靈殘留，檢出量在12.4～148 μg/kg之間。應用結果表明，該方法測定蒜苔中的多菌靈、噻菌靈殘留，操作簡單，凈化效果明顯，定性、定量準確，靈敏度高，尤其在低殘留量樣品的定性、定量檢測中，優勢明顯。