仿生法制備酸棗仁提取物工藝條件的優化

摘要:以酸棗仁總皂苷含量和浸膏得率的綜合評分為考察指標，通過L9(34)正交設計試驗，研究影響仿生法制備酸棗仁提取物的各因素。結果表明，影響仿生法制備酸棗仁提取物的各因素大小依次為:固液比(酸棗仁生藥與提取液的比例D)>攪拌時間(B)>攪拌次數(C)>轉速(A)。仿生法制備酸棗仁提取物的最佳工藝條件為:固液比1∶10，攪拌提取兩次，每次攪拌時間10 min，攪拌轉數125 r/min。

關鍵詞:仿生法;酸棗仁提取物;正交設計

中圖分類號:R183文獻標識碼:A DOI編碼:10.3969/j.issn.1006-6500.2010.04.037

Optimization of the Conditions of Semen Ziziphi Spinosae Extracts by Bionic Extraction Process

WANGChao， ZHANG Ming-chun

(Key Laboratory of Food and Biotechnology in Tianjin，Department of Pharmaceutical Engineering，School of Biotechnology and Food Science，Tianjin University of Commerce，Tianjin 300134，China)

Abstract:To optimize the optimum conditions of semen ziziphi spinosae extracts by bionic extraction process， the composite indicator of total saponins and dry extract rate was considered， the effects of various factors on bionic extraction of semen ziziphi spinosae extracts were studied through orthogonal design L9(34). The results showed that the order of various affecting factors were ratio of solid to liquid (the proportion of semen ziziphi spinosae to extract D)>mixing time(B)>mixing number(C)>rotating speed(A). The optimum conditions of semen ziziphi spinosae extracts by bionic extraction process was ratio of solid to liquid 1∶10， mixing number twice， mixing time for 10 minutes， rotating speed 125 rpm/min.

Key words: bionic extraction;semen ziziphi spinosae extracts;orthogonal design

酸棗仁(Ziziphus jujuba Mill. var. spinosa (Bunge) Hu ex H. F. Chou)為鼠李科植物酸棗的干燥成熟種子，別名棗仁，始載于《神農本草經》，列為上品。其味甘、酸，性平，歸心、肝、膽經，主治虛煩不眠，驚悸多夢，體虛多汗，津傷口渴等癥 [1]。現代藥理學研究證明，酸棗仁有改善睡眠的作用[2]。

酸棗仁提取物的傳統提取工藝有水提法[3]、醇提法[4]等，新工藝有微波法[5]、超聲波法[6]、酶法[7]等。

本試驗按照《中國藥典》2005版人工胃液配方配置提取液，模擬人消化道系統環境制備酸棗仁提取物，即仿生法制備酸棗仁提取物。仿生法[8]所得到的提取物更接近藥物在體內達到平衡后的有效成分群，此方法集中體現了中醫藥基本理論的整體觀、系統觀，是將整體藥物研究與分子藥物研究相結合的中藥研究新方法，是將生物技術應用到中藥研究的新嘗試。應用仿生法制備酸棗仁提取物尚未見報道。

1材料和方法

1.1材料

酸棗仁:天津薊縣;酸棗仁皂苷A標準品:中國藥品生物制品檢定所(批號110734-200408);胃蛋白酶:北京鼎國生物技術有限責任公司3000U(批號99M10340);甲醇、冰醋酸、乙醇、香草醛、高氯酸:天津化學試劑廠分析純。

UV-7504紫外-可見分光光度儀:上海欣茂有限公司;電熱恒溫水浴鍋:天津市中環實驗電爐有限公司;恒溫干燥箱:上海市實驗儀器總廠;RE-52AA旋轉蒸發儀:上海亞容生化廠;SHB-B95A循環水式多用真空泵:鄭州長城科工貿有限公司;FA1004電子分析天平:上海精科天平;FZ102微型植物試樣粉碎機:北京中興偉業儀器有限公司;電子數顯恒速攪拌器:鄭州長城科工貿有限公司。

1.2方法

1.2.1酸棗仁皂苷標準曲線的繪制[9] (1)最大吸收波長的選擇。取1 mg/mL酸棗仁皂苷標準品儲備液0.5 mL，置于10 mL具塞試管中，干燥器中揮干溶劑，加入0.2 mL的5%的香草醛-冰醋酸溶液，再加入0.8 mL的高氯酸溶液，密塞，于70 ℃水浴中恒溫加熱20 min，取出立即冰水浴冷卻5 min，加冰醋酸5.00 mL，搖勻，在紫外可見分光光度計上進行全波長掃描，最大吸收波長602.5 nm。

(2)標準曲線的制備。精密吸取酸棗仁皂苷標準品溶液0.10，0.15，0.20，0.25，0.30 mL分別置于10 mL的具塞試管中，干燥器中揮干有機溶劑，然后分別加入0.2 mL的5%的香草醛-冰醋酸溶液，再加入0.8 mL的高氯酸溶液，密塞，于70 ℃水浴中恒溫加熱20 min，取出立即冰水浴冷卻5 min，加冰醋酸5.00 mL，搖勻，于分光光度計602.5 nm處測定。計算回歸方程:y=2.47x-0.015，r=0.999 4，線性范圍:0.1～0.3 mg/mL。

1.2.2酸棗仁提取物制備方法(1)對照水提法。取酸棗仁，粉碎，過0.3 mm篩，精密稱取粉末10 g，用石油醚(60～90 ℃)脫脂2次，每次2 h。棄去石油醚，置干燥箱中60 ℃干燥4 h，移至干燥器中放至室溫，然后加12倍量的水，提取60 min，提取次數為3次，得提取液，用紫外-可見分光光度計(λmax=602.5 nm )測定其吸收度A值。由回歸方程計算出酸棗仁提取物中酸棗仁皂苷含量。再減壓濃縮，蒸干，得浸膏，計算浸膏得率。

(2)仿生法。人工胃液的配制按照《中國藥典》2005版人工胃液配方，取稀鹽酸16.4 mL，加水約800 mL與胃蛋白酶5 g，充分溶解后，調節pH值至1.2，定容至1 000 mL，得人工模擬胃液提取液。

正交設計試驗見表1。取過0.3 mm篩酸棗仁生藥10 g，共9份，在提取過程中，人工胃液通過水浴加熱保持在37 ℃，模仿人體溫度。以酸棗仁皂苷含量和浸膏得率為綜合評價指標，評分以各指標的最大值為參照，將數據進行歸一化，進行綜合評價時，對酸棗仁皂苷含量和浸膏得率給出不同的權重:酸棗仁皂苷含量的權重為70%，浸膏得率權重為30%。

2結果與分析

對照水提法結果為每10 g酸棗仁生藥中提取出皂苷103.6 mg，即提取出1.04%的皂苷。酸棗仁中含有2.8%的酸棗仁皂苷，所以水提法酸棗仁皂苷提取率為37%，浸膏得率為11.34%。

應用仿生法提取酸棗仁提取物直觀分析表明，在所選因素水平范圍內，影響酸棗仁提取物提取效果的各因素依次為: D>B>C>A，即固液比與攪拌提取時間對酸棗仁提取物提取效果影響最大，攪拌次數影響較小，轉速影響最小，最佳工藝條件為:固液比1∶10，攪拌提取時間10 min，攪拌次數2次，轉速125 rpm(表2)。

驗證試驗結果表明，應用仿生法制備酸棗仁提取物，10 g 酸棗仁生藥材提取出155.91 mg總皂苷，即提取出1.6%總皂苷，酸棗仁中含有2.8%的酸棗仁皂苷，仿生法制備的酸棗仁提取物中皂苷提取率為57%，提取物的浸膏得率為45.7%，比傳統水提工藝的浸膏得率提高34.36個百分點。該結果對酸棗仁中鎮靜安眠藥用有效成分的研究非常有意義，且該工藝重復性較好，結果穩定(表3)。

3討論

仿生法是在模擬胃的酸性條件下制備酸棗仁提取物，提取物中一部分酸棗仁皂苷可能分解成苷元和低聚糖，甚至酸棗仁三萜類皂苷環斷裂產生其他小分子化合物，所以提取物中酸棗仁皂苷含量不比水提法高;而酸棗仁浸膏得率增加，是由于經模擬胃環境提取，有胃蛋白酶參與作用，使產物量增多，增加的產物可能有小肽和氨基酸等小分子。這些通過模擬胃腸環境后產生的產物苷元、低聚糖，小肽、氨基酸和其他小分子化合物，是否會與尚未分解的酸棗仁皂苷產生協同作用，共同發揮作用，產生藥效，下一步我們將對仿生法制備的酸棗仁提取物進行成分分析和藥效學試驗，再做報道。

參考文獻:

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[3] 于雁靈，汪學昭，王運革.酸棗根、酸棗仁水提液中八種元素的分布[J].中藥材，1999(10):513-514.

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