【摘要】:目的:利用高效液相圖譜法,對我國利用中藥材葛根的傳統制作葛根工藝經行利用度研究。方法:用HPLC法測定,以甲醇shy;shy;-水流為動相,250um為檢測波長。結果:葛根粉中只含有微量的葛根素,而廢棄液中含有97.8%的葛根素,傳統加工葛根制作成葛粉的工藝,對葛根藥用價值利用率極低。
【關鍵詞】:葛根;葛根粉;HPLC;利用度
【中圖分類號】R281.5【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)06-031-2
葛根為豆科植物野葛或甘葛藤的干燥根,素有“亞洲人參”的美譽。在《本草綱目》和《神農本草經》中就有關于葛根記載具有發表解肌,開陽透疹,解熱生津等功效,用于外感發熱頭痛、項背強痛,口渴,消渴,麻疹不透,熱痢,泄瀉[1]。現代研究證實,葛根素等異黃酮類化合物是葛根中的主要有效成分,對高血壓,心血管系統和免疫系統的疾病有較好的治療效果[2]。目前我國對中藥葛根的利用一個重要方面就是用葛根提取淀粉,制成葛粉,作為保健食品銷售。現利用高效液相圖譜法對我國利用中藥材葛根的傳統工藝中的利用度進行研究,為中藥葛根的利用提供理論依據。
1葛根的傳統制作工藝流程
葛根主要分布于亞熱帶和溫帶地區,我國葛屬植物分布交廣,資源較為豐富[3]。傳統的加工葛根粉的方法:采集葛根資源,清水沖洗干凈,刮皮去根,錘砸成泥漿,放入缸中加水充分溶解,取出清液,將沉淀物充分沖洗,與上清液合并,靜置使其沉淀,去除上層廢漿液,分離出底部淀粉,自然涼干,成葛粉。
2HPLC指紋圖譜測定方法的建立
2.1儀器與試劑:
Aslinetl100高效液相色譜儀:安捷倫科技有限公司;甲醇:色譜純;乙醇:優級純;去離子水;葛根素標準品:中國藥品生物制品檢定所;葛根:河南信陽關門山。
2.2色譜條件:
色譜柱為ZorbxaXDB-C18(4.6mm×250mm,5×μm,Agilent公司);流動相為甲醇-水,梯度洗脫,0-60min甲醇濃度由25%上升到100%;流速為0.5mL/min;檢測波長為250um;進樣量為20μL;柱溫25℃;所有組分在60min內出完。
2.3參照物溶液的制備:
精密稱取葛根素對照品適量,用甲醇稀釋成20,40,80,100,200μg/mL的參照物溶液。
2.4供試品溶液的制備:
精密稱定葛根粉末0.1g,精密加入30%乙醇80mL,加熱回流30min,轉入I00mL容量瓶,用30%乙醇精密定容至,搖勻過濾,取濾液即得。
2.5HPLC指紋圖譜測定方法:
分別精密量取對照品、供試品溶液、制葛粉的上層廢漿液各20μL,注入液相色譜儀,記錄60min色譜圖即可。以葛根素的色譜峰(s)的保留時間和峰面積為1,計算其他各峰的相對保留時間和相對峰面積比值。
3結果與分析
3.1方法學考察:
3.1.1線性關系考察:
精密稱取葛根素標準品20mg,30%乙醇定容,配成濃度依次為20,40,80,100,200μg/mL標準系列。按上述色譜條件進樣,所得峰面積(Y)與相應濃度(X)進行線性回歸分析,得線性回歸方:Y=136.42X+148.08相關系數r=0.9999,即濃度在20—200μg/mL圍內,濃度與峰面積線性關系良好。
3.1.2精密度試驗:
取供試品溶液(1號樣品)連續進樣6次,測得葛根含量分別為:5.67%、6.09%、6.27%、5.58%、6.21%、5.91%,RSD%為4.79%。
3.1.3加樣回收率:
按要求精密稱取1號樣品5份,分別加入不同量葛根標準品。按樣品測定方法進行操作,測得其回收率分別為:100.96%、105.93%、93.05%、101.00%、98.71%。
3.1.4重現性試驗:
取供試品溶液5份,分別進樣,測得各共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD%<3%,表明其重現性試驗很好。
3.1.5穩定性試驗:
取供試品溶液,分別在0、2、4、10、24h進樣,測得葛根素峰峰面積分別為8868、8790、8952、8544、8915,RSD%為0.01%。表明樣品溶液在24h內穩定。
3.2樣品分析:
圖1 葛根HPLC指紋圖譜
圖2 葛根淀粉HPLC指紋圖譜
圖3 葛根廢漿液HPLC指紋圖譜
從測定結果看,在葛根HPLC指紋圖譜的10個共有峰中,廢漿液HPLC指紋圖譜存在8個共有峰,其中第5和第7個峰不存在(如圖3),葛根廢漿液中共有峰峰面積百分比高達97.83%;葛根素峰峰面積百分比高達71.08%。葛根淀粉的HPLC指紋圖譜中僅存在葛根素峰。(如圖2)l但其中的葛根素含量卻極微量,僅為0.05%。
4結論
傳統的加工中藥材葛根制作葛根粉的工藝,制作出的葛根粉只含有微量的葛根素,對葛根資源的利用極不合理,應該綜合利用葛根資源的藥用和食用價值。
參考文獻
[1] 中國藥典2005版一部.2005:233-234.
[2] 顧志平,陳碧珠,馮瑞之等.中藥葛根及其同屬植物資源的利用和評價[J].藥學學報,1996,31(5):3-5.
[3] 葉淑靜.中藥葛根研究進展[J].浙江中醫學院學報.2003,11(6):94-96.