免疫組化技術在小鼠組織中的應用

【摘要】:本文通過分析免疫組化技術的原理及科研價值，把它在小鼠組織中的具體應用，存在的具體問題和注意事項逐步剖析開來。旨在根據小鼠組織的特有情況進一步優化免疫組化的條件，針對性的解決小鼠在應用該技術時存在的局限性，使我們能得到更好的小鼠組織切片和實驗數據。

【關鍵詞】:小鼠組織;免疫組化技術

【中圖分類號】R392.33【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)06-034-1

醫學研究和科研領域經常會應用動物模型來進行研究，以此來探索人類疾病的模擬反應。在過去一個世紀的研究中，小鼠已經成為建立人類疾病的動物模型的最佳實驗材料。當科研人員應用小鼠做為研究對象時，往往采用免疫組織化學的方法對小鼠組織進行鑒定和分析。但是由于免疫組化操作的影響因素諸多，免疫組化效果不穩定等因素常常困擾著免疫組化操作者。本文就以上相關問題進行了簡單的總結和分析。

1小鼠組織的應用

小鼠經常被用作動物模型進行科學研究，因為現在小鼠的基因改造技術越來越成熟，并且它的生理生化及發育過程類似于人類，基因組也和人類有90%同源，所以小鼠模型可以基本上真實模擬人類的功能活動和反應;小鼠作為遺傳學研究材料的另一優勢還在于其基因組計劃已基本完成[1]。基因組序列的大量信息為研究基因功能及其表達調控、胚胎發育和人類疾病的分子機制提供了條件基礎和技術手段。

2免疫組化的原理及優點

免疫組化技術是在組織化學的方法上結合免疫學的理論和技術發展起來的一門新技術，能將形態、代謝和功能密切結合起來。簡單地說，用已知的抗原或者抗體去檢測待檢組織中的抗原或抗體，其結合后經一系列方法的處理，出現呈色反應，這樣在光鏡下就可以確定組織的來源屬性和部位。免疫組化技術還有著以下的優點。(1)特異性強，抗原抗體的結合具有高度特異性;(2)敏感性高。由于ABC發或SP法的出現時抗原抗體的結合更敏感;(3)定位準確，免疫組化技術可在組織和細胞內準確定位。

3實驗中存在的問題及注意事項

3.1組織的預處理

因為小鼠模型都十分珍貴，所以我們在試驗中應盡量減少失敗的幾率。首先，小鼠組織的剝離要迅速，固定要及時，否則很多組織比如腦組織很容易被破壞。其次，固定時間要適當。固定時間以常溫下6-12小時為宜。過度固定可能導致組織抗原的損失，影響實驗效果[2，3]。最后，組織的脫水時間要適當。拿裸鼠為例，因為其組織比較柔嫩，所以脫水時應該從低濃度乙醇開始，比如50%乙醇梯度開始，并且適當縮短脫水，透明的時間，防止小鼠組織變形，變脆變硬，影響后面的切片和形態觀察。

3.2免疫組化實驗步驟

免疫組織化學技術是多步驟、多因素決定的實驗方法，任何一個環節稍有不慎，都直接影響免疫組化的結果。下面從以下幾個方面進行闡述:(1)抗原修復。由于小鼠組織在福爾馬林或其他固定液中會引起蛋白內或蛋白間亞甲基橋的橋連，導致許多抗原簇被封閉。所以，需要先進行抗原修復或暴露。試驗中應該根據具體組織和抗體選擇最佳的修復方法。(2)減少或消除非特異染色。一般小鼠組織中免疫組化的非特異染色較深，常常干擾實驗結果的觀察。我們應該從以下方面盡量避免:①抗體濃度要適合。試驗中通過設計梯度稀釋抗體來確定最佳抗體稀釋濃度。抗體濃度過高也會產生非特異染色。②PBS洗滌要充分。試驗中盡量使用新鮮的PBS，每次的洗滌時間也要嚴格按照說明書進行。③實驗用的封阻血清要確保與一抗同源，封阻時間也要足夠。④實驗的整個過程中都要確保組織不能干掉。(3)DAB顯色:對二甲胺基偶氮苯(DAB)顯色的時間也不同程度影響免疫組化的最終效果。最好顯微鏡下控制顯色，所以操作者應具備一定的常用抗體定位的知識，不要顯色時間太長，如果無陽性物質，顯色時間過長無益，只能使假陽性的機率倍增。

3.3結果的判斷和分析

免疫組化染色結果的判斷應該是陽性染色強而非特異染色很淡或無，兩者形成鮮明的對比，陽性標記物的位置準確(核、質、膜、血管壁或間質等)，細胞邊界清楚。判斷根據:根據陽性細胞的染色強度:(無著色細胞)(一)，(+)，(+ +)，(卅)。免疫組化染色結果還要結合組織形態學判斷是真正的陽性染色而非其他著色。另外實驗的進行還必須設有對照，比如陽性對照，陰性對照，自身對照等，這對結果的分析很重要。

4總結

總之免疫組化是一項很精確的實驗技術。它在小鼠組織研究上的應用有著很重要的科研價值和潛力。近年來，由于檢測技術敏感性的不斷增強;單克隆抗體的制備;基因庫的建立;以及修復抗原性的各種措施、特別是熱預處理法的出現與發展，使得免疫組化技術的使用邁出了嶄新的一步。雖然該技術也同時存在很多困難，但是只要我們認真操作每一個步驟，一定能做出高質量的小鼠的免疫組化切片并且得到有用的實驗結果。

參考文獻

[1] 范爾鐘，李穎，劉仲燕.免疫組化技術在實驗動物組織中的應用體會[J].臨床與實驗病理學雜志，2005，21(1).

[2] 馮靜潔，吳玉玉，齊曉薇，張緒森.免疫組化技術應用中的影響因素分析[J].淮海醫藥，2006，24，(4).

[3] 王麗，張秋金，林齊心，等.初論免疫組化標準化(一)[J].診斷病理學雜志，2003，10(5):310-311.