HPLC法測定千柏鼻炎片中決明子的含量

【摘要】:目的:建立千柏鼻炎片中決明子的含量測定方法。方法:采用高效液相色譜法，用Phenomenex C18色譜柱(250mm×4.6mm，4μm)，以甲醇-0.1%磷酸溶液(用三乙胺調PH值至3.5)(17:3)為流動相，流速:1.0ml.min-1，檢測波長:254nm;柱溫為30℃。結果:該方法線性關系良好;該組分平均加樣回收率為97.90%;RSD為0.71%(n=6)。結論:本方法操作簡便、結果準確、分離效果好，可用于該制劑的質量控制。

【關鍵詞】:千柏鼻炎片;大黃酚;決明子;高效液相色譜法

【中圖分類號】R927.1【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)06-012-1

千柏鼻炎片由千里光、卷柏、決明子、羌活、麻黃、川芎、白芷七味中藥組成，具清熱解毒，活血祛風，宣肺通竅。用于風熱犯肺，內郁化火，凝滯氣血所致的鼻塞，流涕黃稠;急慢性鼻炎，急慢性鼻竇炎見上述證候者。[1]方中主藥決明子具有清熱明目、潤腸通便等作用。其主要活性成分蒽醌類衍生物具降壓、調血脂、抗菌、保肝等藥理作用。[2]為了有效控制藥品質量，本實驗建立了以大黃酚為目標成分，通過高效液相色譜法測定其含量而確定制劑中決明子含量的方法。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent1100系列高效液相色譜儀(包括四元梯度泵;紫外檢測器;LC1100化學工作站);BP211D電子分析天平(Sartorius)。

1.2試藥大黃酚(中國藥品生物制品檢定所，批號為110796-200514)甲醇為色譜純;其它試劑均為分析純;超純水;千柏鼻炎片(市售，產地分別為陜西、廣東、成都)。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱為Phenomenex C18柱(4.6mm×250mm;4um);流動相:甲醇—0.1%磷酸溶液(用三乙胺調PH值至3.5)(17:3);檢測波長254nm;柱溫為30℃;流速:1.0mL/min;進樣量10ul。理論板數按大黃酚計算，應不低于3000。

2.2對照品溶液制備精密稱取大黃酚對照品(五氧化二磷減壓干燥器中干燥12h)10.34mg;置50ml量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯(2:1)至刻度;搖勻，精密量取大黃酚對照品溶液5ml置50ml量瓶中加無水乙醇-乙酸乙酯(2:1)稀釋至刻度，即得。

2.3供試品溶液制備取千柏鼻炎片10片，除去包衣，研細，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，置水浴上加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25ml，蒸干，加10%鹽酸溶液30ml，置水浴中加熱水解1小時，立即冷卻，用三氯甲烷搖搖提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣用無水乙醇-乙酸乙酯(2:1)溶解，轉移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.4線性關系考察分別精密吸取稀釋前大黃酚對照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml置10 mL量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯(2:1)稀釋至刻度，搖勻，得對照品系列濃度溶液，系列濃度分別為5.17、10.34、20.68、41.36、62.04、82.72micro;g/ml。按“2.1”色譜條件進行測定，每次進樣10ul，記錄色譜峰峰面積，以質量濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，進行線性回歸，得標準曲線方程。A=32.67C+421.82、r=0.9991，結果表明大黃酚濃度在5.17～62.04micro;g/ml范圍內線性關系良好。

2.5空白干擾實驗按處方比例和制法(中國藥典2005年版一部)自制缺決明子的樣品，按供試品溶液的制法制成空白對照溶液，依法進樣測定，結果空白對照溶液在大黃酚對照品保留時間處無色譜峰出現;表明在該實驗條件下，其他藥材成分對測定無干擾。

2.6精密度實驗取實驗用對照品溶液，依法連續重復進樣5次，測定大黃酚的峰面積，計算得其RSD為0.37%。

2.7重復性實驗取同一批樣品，精密稱取5份，按上述測定方法進行提取、制成供試品溶液，分別進樣測定，記錄大黃酚色譜峰面積，計算含量。結果該組分的RSD為0.93%。

2.8穩定性實驗取同一供試品溶液每3h進樣1次，共測定5次，計算大黃酚含量。測得的結果RSD為0.73%，說明供試品溶液在12h內基本無變化。

2.9加樣回收率實驗精密稱取已知含量的樣品(產地:陜西，批號090417)1g，共6份，分別精密加入一定量的大黃酚對照品，按“2.3”提取制成供試品溶液，依法測定含量，計算平均回收率，結果見表l。

表1 加樣回收率實驗結果(平均片重:0.3126g)

樣品量 樣品含量 加入對照 測得量 回收率

(mg) 品量(mg) (mg)(%)

1.0042 0.69320.41361.1014 98.69

1.0008 0.69080.41361.0948 97.68

0.9981 0.68900.41361.0894 96.81

1.0075 0.69540.41361.1028 98.50

1.0058 0.69430.41361.1003 98.16

1.0083 0.69600.41361.0995 97.56

平均回收率(%) 97.90

RSD (%) 0.71

2.10樣品測定取3個廠家5批樣品，按上述方法提取，測定;采用外標法進行計算，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果(n=3)

廠家產地批號 樣品含量(mg/片)RSD(%)

陜西 081107 0.1837 0.83

090417 0.2158 0.69

廣東200905110.2231 1.47

200907250.2408 0.55

成都200812260.2733 0.45

3討論

3.1藥材決明子在千柏鼻炎片中作為主藥，原藥材的質量優劣直接影響了制劑的質量。通過含量測定結果可見廠家間及各批號的產品間的含量差異較大，為能反映產品質量，有必要增加千柏鼻炎片中決明子含量的考察。

3.2本文對HPLC分析時的流動相系統組成和比例作了比較，對多種溶劑系統進行選擇，采用0.02mol/L冰醋酸溶液-乙腈;0.02mol/L冰醋酸溶液(用三乙胺調pH值為3.0)-甲醇;甲醇-0.1%磷酸溶液(用三乙胺調PH值至3.5)(17:3)等系統。根據分離情況，選用了甲醇-0.1%磷酸溶液作為流動相來測定大黃酚。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會編.中國藥典[S].北京:化學工業出版社，2005:337.

[2] 樓之岑，秦波主編.常用中藥材品種整理和質量研究(第3冊)[M].北京:北京大學醫學出版社，1996:268.