子癇前期患者胎盤組織中Ang-1的表達及意義

侯曉芬 張延麗

子癇前期患者胎盤組織中Ang-1的表達及意義

侯曉芬 張延麗

目的 探討血管生成素-1(Ang–1)在子癇前期患者胎盤組織中的表達及意義。方法采用免疫組織化學方法檢測30例正常妊娠婦女及60例子癇前期(輕度30例，重度30例)患者胎盤組織中Ang–1的表達。結果正常妊娠組、輕度、重度子癇前期組胎盤組織中Ang-1表達逐漸增強，且各組間差異具有顯著性(P＜0.05)。結論子癇前期患者胎盤中Ang–1表達水平的變化可能與子癇前期的發病及病情發展有關。

子癇前期;Ang–1;免疫組織化學方法

子癇前期(preeclampsism)是妊娠期特有的疾病，嚴重威脅母兒安全，是危害孕產婦健康和造成胎兒死亡的重要疾病之一。為此許多學者對其發病機制進行了大量的研究，但具體發病機制至今仍未完全闡明。

Ang-1是一種重要的血管生成調節因子，它與其受體結合通過多種機制影響滋養層細胞浸潤能力、影響胎盤發育，這可能是導致子癇前期、胎兒生長受限等疾病的重要原因之一。本研究采用免疫組織化學方法檢測子癇前期患者及正常妊娠患者胎盤中Ang-1的表達，以探討其在子癇前期發病過程中可能的作用及其相互作用機制，為臨床尋找子癇前期病因提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 實驗對象 隨機收集我院2009年3月至2010年3月間在山西醫科大學第一臨床附屬醫院產科住院分娩的90例產婦的胎盤組織，其中子癇前期患者60例(輕度30例，重度30例)，正常孕婦30例 (正常妊娠組)。子癇前期的診斷標準參照樂杰主編的《婦產科學》第7版［1］。所有病例均為單胎初產婦，無原發性高血壓、糖尿病、心臟病和肝腎疾病史等其他妊娠合并癥及并發癥。兩組孕婦年齡、孕齡及孕次、分娩方式之間比較差異無顯著性(P＞0.05)(見表1)。

表1 兩組間一般臨床資料比較(±s)

表1 兩組間一般臨床資料比較(±s)

組別 例數 年齡(歲) 孕齡(天)正常妊娠組30 28.3±4.63 269.0±5.46輕度子癇前期組 30 28.6±3.41 264.4±5.69重度子癇前期組30 29.5±5.32 259.7±6.63

1.2 實驗方法

1.2.1 標本采集及處理 所有研究對象于胎盤娩出后，立即取胎盤母體面組織大小約1 cm×1 cm×1 cm，注意避開出血、梗死及鈣化區，生理鹽水漂洗3次后，置于10%中性福爾馬林溶液中固定24～48 h，并用石蠟包埋，制成5 μm左右切片，備用。

1.2.2 測定方法 采用免疫組織化學SABC法。特異性兔抗人Ang-1抗體工作濃度為1∶100(由武漢博士德生物工程有限公司提供)。實驗步驟按試劑盒說明書嚴格進行。

1.2.3 結果判定 以細胞膜或細胞漿出現明顯的棕黃色顆粒為陽性細胞，無著色或與背景顏色一致的為陰性細胞。由至少兩位經驗豐富的專業人員獨立閱片，將制好的切片置顯微鏡下觀察，每張切片在400倍高倍視野下隨機取5個視野，用病理圖像分析軟件進行半定量分析，計算平均灰度值。

1.3 統計學方法 采用SPSS 13.0統計軟件處理，所有數據以均值±標準差(±s)表示，各組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD法，P＜0.05表明差異有統計學意義。

2 結果

胎盤組織中Ang-1表達強度的比較 免疫組化檢測發現Ang-1在孕婦胎盤絨毛間質、滋養葉細胞和血管內皮細胞中均有表達，主要集中在細胞膜及細胞漿中。用病理圖像分析軟件對Ang-1免疫組織化學染色切片進行灰度測定(見表2)。實驗結果發現:正常妊娠組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組胎盤組織中Ang-1表達逐漸增強，且各組間差異具有顯著性(P＜0.05)。

表2 各組孕婦胎盤組織Ang-1表達強度(平均灰度值)比較

3 討論

3.1 Ang-1的生物學功能 Ang-1是一類重要的血管生成調節因子，是血管生成素(Angiopoietin，Ang)家族中的成員。Ang家族現包括四個成員:Ang-1，Ang-2，Ang-3，Ang-4，均能識別內皮細胞特異性酪氨酸激酶受體(Tie-2)，但效應不同。Ang-1是Tie-2的激動劑，與Tie-2結合啟動受體磷酸化，在細胞粘附因子存在時可抑制內皮細胞的凋亡［2，3］、抑制血管滲漏［4］、減少血管炎癥［5］從而維持血管的穩定性［6］。

3.2 Ang-1與子癇前期 在正常妊娠中，隨著妊娠的進展，滋養層細胞侵入螺旋動脈，子宮胎盤血液循環阻力下降，血流灌注充分;而滋養細胞不能正常侵入子宮內膜，浸潤過淺、浸潤性滋養細胞數量不足以及螺旋動脈重鑄失敗等經?？稍谧影B前期患者的胎盤中觀察到［7］。所以滋養細胞的分化、遷移、浸潤過程對妊娠發生和維持極其重要。因此凡是影響滋養細胞正常浸潤過程的因素都可能導致子癇前期的發生。

Nadar等［8］研究發現，子癇前期的妊娠婦女血清的Ang-1mRNA表達水平明顯增加。本實驗結果表明，輕度、重度子癇前期患者胎盤組織中Ang-1表達均明顯高于正常妊娠組，且重度子癇前期患者Ang-1表達水平顯著高于輕度患者，可推測:Ang-1在滋養層細胞、血管內皮細胞和絨毛間質的表達明顯增加，可能增加胎盤、滋養細胞血管的穩定性，使形成分支血管發生障礙，致子宮螺旋動脈重建失敗，造成胎盤灌注不足，引起胎盤功能不良，從而導致子癇前期的一系列病理改變。對于子癇前期，Ang-1的表達目前國內外尚無統一定論，仍需要進一步的研究。

Ang-1不參與血管的起始，只參與血管的成熟。Ang-1維持血管穩定的作用，可抑制胎盤螺旋小動脈的正常產生，引起胎盤血液供應障礙，使滋養細胞浸潤過程減弱，從而導致子癇前期的發生?？傊?，Ang-1通過多種機制影響子宮-胎盤血管床的發育和重塑，導致胎盤缺血缺氧，胎盤發育不良，引起滋養細胞侵入不足，最終導致子癇前期的發生。

［1］ 樂杰．婦產科學．人民衛生出版社，2008:92．

［2］ Kim I，Kim HG，et al．Angiopoietin-1 regulates endothelial cell survival through the phosphatidylinositol 3’-Kinase/Akt signal transduction pathway．Circ Res，2000，86(1):24-29.

［3］ Papapetropoulos A，Fulton D，Angiopoietin-1 inhibits endothelial cell apoptosis via the Akt/survivin pathway.J Biol Chem，2000，275 (13):9102-9105.

［4］ Gamble JR，Drew J，et al.Angiopoietin-1 is an antipermeability and anti-inflammatory agent in vitro and targets cell junctions.Circ Res，2000，87(7):603-607.

［5］ Kim I，Moon SO，et al.Angiopoietin-1 reduces VEGF-stimulated leukocyte adhesion to endothelial cells by reducing ICAM-1，VCAM-1，and E-selectin expression.Circ Res，2001，89(6): 477-479．

［6］ Shigetomo Fukuhara，Keisuke Sako，et al.Tie2 is tied at the cellcell contacts and to extracellular matrix by Angiopoietin-1．Exp Mol Med，2009，41(3):133-139.

［7］ Kadyrov M，Kindom JC，Huppertz B.Divergent trophoblast invasion and apoptosis in placental bed spiral arteries from pregnancies complicated by maternal anemia and early-onset preeclampsia/intrauterine growth restriction.Am J Obstet Gynecol，2006，194(2): 557-563.

［8］ Nadar SK，Karalis I，et al．Plasma markers of angiogenesis in pregnancy induced hypertension.Thromb Haemost，2005，94(5): 1071-1076.

Expression and significance of Ang-1 in placenta from patients with preeclampsia patients

HOU Xiaofen，ZHANG Yan-li．Gynecology and Obstetrics of first Clinical Medical College，Taiyuan 030001，China

Objective To study the expression and clinical significance of Ang-1 in placenta from patients with preeclampsia．Methods The expression of Ang-1 were detected in placental from 30 normal3pregnants women and 60 patients with preeclampsia(30 mild preeclampsia，30 severe preeclampsia)by immunohistochemistry.ResultsThe expressions of Ang-1 of placenta in normal pregnant，mind preeclampsia and severe preeclampsia groups were gradually increased，there were significant differences among them(P＜0.05).ConclusionThe changes of expressional levels of Ang-1 are related to the occurrence and development of preeclampsia.

Preeclampsia;Ang-1;Immunohistochemistry

030001太原，山西醫科大學在讀碩士(侯曉芬);山西醫科大學第一臨床醫學院婦產科(張延麗)