不鼻息肉中金葡菌及其毒素B測定臨床意義

梁星 劉濤

(1山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科; 2.山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院耳頸外科 山西太原 030001)

乳膠凝集法金黃色葡萄球菌試劑盒(法國生物梅里埃公司);人金黃

鼻息肉是鼻腔和鼻竇粘膜的常見慢性疾病。成人發(fā)病率1%～2%,術(shù)后易復(fù)發(fā),復(fù)發(fā)率高達(dá)15%[1]。目前比較公認(rèn)的是:鼻息肉的發(fā)病是一個(gè)涉及感染,變態(tài)反應(yīng),植物神經(jīng)功能失調(diào),代謝紊亂,氣流動(dòng)力改變等多因素,多步驟的過程[2]。近來研究發(fā)現(xiàn),金黃色葡萄球菌及其產(chǎn)物與鼻息肉的發(fā)病或演變有關(guān),金黃色葡萄球菌是最為常見的致病菌之一,由它產(chǎn)生的超抗原中金黃色葡萄球菌腸毒素B(Staphylococcal enterotoxin B,SEB)最常見,耐熱且產(chǎn)毒量大,是近來研究熱點(diǎn),已經(jīng)有許多臨床研究發(fā)現(xiàn),慢性鼻竇炎患者鼻腔或上鼻竇分泌物中有較高含量的SEB,在鼻息肉合并有鼻竇炎的病例中含量更高。并且在血清中可測到抗SEB抗體。

1 臨床資料

1.1 標(biāo)本來源

標(biāo)本取自患有鼻息肉和患有肥厚性鼻炎及其他的住院患者各50例。年齡16～65歲,男女不限,入院前1個(gè)月明確無抗生素使用史,入院后未作任何治療前及時(shí)取材。

1.2 主要試劑儀器

色葡萄球菌腸毒素B抗體酶聯(lián)免疫分析(ELISA)(RD公司生產(chǎn));全自動(dòng)微生物藥敏分析儀VITEK2compact(法國生物梅里埃公司);湖南湘儀TDZ4-WS臺式低速離心機(jī)(湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)),恒溫震蕩培養(yǎng)箱(上海博迅SPX-250B-D型)。

2 方法

2.1 細(xì)菌培養(yǎng)

用鼻拭子于待測對象的鼻后孔深處取鼻腔分泌物,放入無菌試管中30min內(nèi)送細(xì)菌培養(yǎng)室。在需氧環(huán)境下用接種環(huán)將分泌物分別接種于血平皿,巧克力平皿,麥康凱平皿中,33～35℃孵育24h。培養(yǎng)出的細(xì)菌菌落由全自動(dòng)微生物分析儀VITEK2compact及乳膠凝集法金黃色葡萄球菌鑒定試劑盒進(jìn)行鑒定。

2.2 ELISA測血清

設(shè)置空白對照孔和待測樣品孔,之后將SEB標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至所需要濃度,加樣于酶標(biāo)板孔底部混勻,封板膜封板后37℃溫育30m in。取出用稀釋后的洗滌液洗五次,拍干。加入SEB酶標(biāo)試劑(空白孔不加),置封板膜封板后37℃溫育30min,再洗5次拍干。加入顯色劑避光37℃顯色15m in。以空白孔調(diào)零,450納米波長處檢測和采集數(shù)據(jù)。

3 結(jié)果及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3.1 細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果及分析

50例鼻息肉標(biāo)本經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)后,21例培養(yǎng)出金葡菌菌落。對照組經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)后,8例培養(yǎng)出金葡菌菌落。χ2檢驗(yàn)得：χ2=8.207>χ20.05,1=3.84,P＜0.05。2組檢出率不同,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.2 SEB的ELISA檢測結(jié)果及分析

SEB抗體滴度測定采用t檢驗(yàn)。經(jīng)SPSS V 13.0軟件分析,sig>5,得兩樣本服從正態(tài)分布,(t=4.377),查界值表得(P<0.05)(α=0.05)。兩樣本的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 討論

鼻息肉的發(fā)病機(jī)制尚不明確,多年來認(rèn)為與變態(tài)反應(yīng)和感染關(guān)系密切,目前傾向于多因素的病因?qū)W,存在金黃色葡萄球菌超抗原假說和真菌變態(tài)反應(yīng)假說[2]。文獻(xiàn)報(bào)道,無論是否合并過敏性鼻炎的鼻息肉,感染因素都參與了致病。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)金葡菌是呼吸道的常見致病菌之一,金葡菌的致病性一方面與其凝固酶密切相關(guān),許多疾病是由于金葡菌直接侵襲所致,另一方面金葡菌還包括許多細(xì)胞抗原并可產(chǎn)生多種具有超抗原特性的毒素[3～4]。金葡菌腸毒素(staphylococcus aureus enterotoxins,SAEs)包括(SEA～SEP)可同時(shí)影響到免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞和促炎細(xì)胞的活性,其中SEB最常見,耐熱且產(chǎn)毒量大毒力強(qiáng),屬于超抗原,有強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)功能,可直接激活5%～10%得T細(xì)胞增殖并釋放細(xì)胞因子和炎性因子,加重局部炎癥反應(yīng),因此SEB在慢性炎癥性疾病的發(fā)病機(jī)制中起到極其重要的作用。

許多臨床研究發(fā)現(xiàn)慢性鼻竇炎的鼻竇分泌物中有較高含量的SEB,在并發(fā)鼻息肉的病例更高,并在血清中可檢測到抗SEB抗體[5]。國外學(xué)者對慢性鼻-鼻竇炎合并鼻息肉(CRS/NP)患者鼻息肉表面分泌物進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)超半數(shù)患者鼻分泌物中有產(chǎn)生超抗原的金葡菌,并分離出SEB,從而認(rèn)為鼻粘膜中最常見的細(xì)菌是金葡菌,通過產(chǎn)生毒素導(dǎo)致鼻腔側(cè)壁粘膜的損傷[6]。對慢性鼻-鼻竇炎和鼻息肉的中鼻道拭子研究發(fā)現(xiàn),與對照組(無鼻竇疾病的各體)相比,鼻息肉患者中鼻道寄居的凝固酶陽性的金葡菌菌株更常見。與對照組粘膜相比,鼻息肉組的免疫組化染色也顯示上皮和上皮下纖維結(jié)合素表達(dá)增加。因此,鼻息肉中特異性炎癥過程可以促進(jìn)金葡菌定居上皮。

本實(shí)驗(yàn)通過收集鼻息肉和肥厚性鼻炎患者的分泌物進(jìn)行培養(yǎng),結(jié)果鼻息肉患者超半數(shù)培養(yǎng)出金葡菌,而同時(shí)進(jìn)行的肥厚性鼻炎患者的檢出率則相對小許多;以血清檢測SEB抗體結(jié)果也發(fā)現(xiàn),鼻息肉患者檢出SEB抗體滴度的平均值要明顯高于同時(shí)同法檢測的肥厚性鼻炎患者。

基于以上理論和實(shí)驗(yàn)推測,鼻息肉盡管是多因素導(dǎo)致的常見病,高復(fù)發(fā)病。然而有相當(dāng)一部分鼻息肉病人是以‘金葡菌’感染為‘扳機(jī)點(diǎn)’導(dǎo)致的‘多米諾骨牌’效應(yīng)的最終結(jié)局。而目前對于鼻息肉的治療臨床上多用的是鼻內(nèi)鏡加抗生素的治療,這相當(dāng)程度上是對已經(jīng)形成息肉病的事后補(bǔ)救。研究報(bào)道,由金葡菌產(chǎn)生超抗原SEB毒素也參與導(dǎo)致了許多免疫性疾病,如：潰瘍性結(jié)腸炎等。由此提示,針對清除超抗原毒素的治療,以截?cái)嗪妥柚钩乖鸬倪^度免疫和組織損傷,以期能夠?qū)ο⑷獠〉念A(yù)防以及術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)防提供一條新的治療手段。這還有待今后無數(shù)次實(shí)驗(yàn)和不斷的努力來證明。

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