抑制脊髓損傷后星形膠質細胞增殖和膠質瘢痕形成的研究進展

武亮,李建軍,陳亮,遠麗,逯曉蕾

脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)后小膠質細胞激活、星形膠質細胞(astrocytes,AS)增殖和膠質瘢痕的形成等[1]是阻礙損傷脊髓軸突有效再生和生長的主要因素。國內外學者先后利用藥物治療、體外誘導及基因技術等實驗手段,調控AS中膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表達,抑制AS的過度增殖以及阻止瘢痕組織形成,取得了階段性成果。

1 AS的性質和功能

1.1 對神經元的結構支持及營養作用 在中樞神經系統內,神經元及其突起之間的空隙幾乎全部由AS填充,AS對神經元起結構支持作用;成群的軸突終末終止在一個神經元的某一局部如樹突干時,可被AS的突起包裹,形成突觸小球,與其他神經細胞及其突起分隔[2]。AS又可被看作是一種乳酸貯存細胞,AS與附近神經元一起分享貯存在AS內的糖元,在血中谷氨酸缺如時,乳酸可作為神經元的能源基礎[3-4]。

1.2 合成和分泌神經活性物質 正常情況下,AS可低水平合成和分泌多種神經營養因子[5],如神經生長因子、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、睫狀神經營養因子(CNTF)、層黏連蛋白、纖黏連蛋白、胰島素樣生長因子及其他細胞外基質成分,有營養和維持神經元生存并促進神經突起生長的作用。AS還可分泌多種細胞因子,如前列腺素、白細胞介素(interleukin,IL)、轉化生長因子(TGF)家族、趨化因子等,可能與神經系統的細胞分裂、分化、血細胞生成調節以及免疫調節和炎癥反應有關[6]。此外,AS還可以合成神經活性物質如血管緊張素[7]和產生促紅細胞生成素(erythropoietin,EPO)[8]。

2 AS在脊髓損傷后的病理變化

正常情況下,AS分為靜止態、活化態和增殖態,三者相互轉換構成了廣義上的細胞周期。在正常的中樞神經系統中,靜止態和活化態的膠質細胞并存;當受到損傷時,在細胞因子作用下,靜止態的細胞逐漸向活化態轉化。活化性星形膠質細胞(activated astrocyte,AA)特點是所含的某些脫氫酶的同工酶活性明顯增加,GFAP表達上調,在形態上表現為體積增大。在缺血、損傷等刺激下,大量AS快速進入活化分裂期,進行有絲分裂,最終使其數目增加、胞體肥大最終交織成網狀,增殖細胞核抗原(PCNA)表達增強,5-溴脫氧尿苷(5-BrdU)陽性細胞比率增加[9]。

AS增生活化的因素:①接觸抑制的功能減退[10]:細胞間的相互接觸使P21蛋白(一種細胞周期素依賴性酶抑制劑)水平增高,并抑制pRb蛋白(由抑癌基因 Rb表達可抑制細胞在 G1/S期的變化)的磷酸化;解除接觸抑制后,細胞周期調節抑制因素作用減弱,損傷周圍的AS重新進入細胞周期;②損傷部位的AS通過自分泌、旁分泌細胞因子促進自身的分裂增殖[11]。CNTF、IL-21B刺激AS由靜止態轉化為活化態;TGF-α、表皮生長因子(EGF)及成纖維細胞生長因子-2(FGF-2)刺激活化AS進入細胞周期;TGF-β、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及干擾素-γ(INF-γ)促進反應性膠質化和膠質瘢痕的形成[12];③高分子量的葡萄糖胺聚糖透明質酸(HA)可以維持AS的“休眠”狀態,是AS增殖的抑制因素[13];脊髓損傷后,HA降解,對AS增殖的抑制減弱,其增殖活動明顯增強;④黏蛋白C對AS的刺激作用是雙向的:在體外培養的AS中加入黏蛋白C后,AS很少表現為活躍型,表明黏蛋白C能明顯減少體外培養的AS的增值率;但是長時間混合黏蛋白 C培養又可以部分刺激其成為活化型[14]。

3 AS在脊髓損傷后的作用

3.1 有利于脊髓損傷修復方面 AS激活后,其分化的不同時期對脊髓損傷修復起著不同的作用。AS在神經系統發育期主要是誘導神經細胞的遷移,發育成熟以后的AS主要是維持神經組織形態,同時其在提供神經生長因子、參與細胞間的通訊等方面也發揮重要作用[15]。AS在成熟前(發育早期),可以分泌二十幾種細胞因子,以及前列腺素和其他幾種白介素等,對維持和促進神經元的生長、發育、再生和分化均有重要作用。AS成熟以后可以填充脊髓損傷的缺損區,保持脊髓完整的形態,起到神經組織支架的作用。活化增殖的膠質細胞以及形成的膠質瘢痕,與AS在激活和增殖過程中產生的細胞因子一起,可將脊髓損傷區與外界隔離,避免損傷區受到感染[16]。

3.2 不利于脊髓損傷修復方面 AS成熟以后,早期具有的多種有益功能逐漸消失,反而分泌有害因子,形成化學性膠質屏障,影響神經再生,阻礙軸突延長[17]。位于脊髓損傷界面內成熟的AS顯示有抑制軸突生長的蛋白聚糖表達[18-20],并且在瘢痕組織的形成中起主要的作用[21]。膠質細胞過度增生和膠質瘢痕形成,導致機械性障礙,影響軸突的再生、延長和融合[22]。并且膠質瘢痕可以形成微血管套,壓迫微血管,影響局部的血液供應[23]。由于瘢痕組織缺乏成熟白質的線性結構,因此需要修復,從而能夠引導軸突長距離的生長[24-27]。此外,反應性AS還能產生大量的一氧化氮,通過對大分子特別是DNA的修飾產生毒性作用,可導致神經元發生遲發性壞死[28]。

4 抑制AS增殖和瘢痕形成的實驗研究

4.1 藥物

4.1.1 鈣蛋白酶抑制劑 鈣蛋白酶(Calpain)是一種水溶性的鈣依賴性半胱氨酸蛋白質。脊髓損傷后,多種結構性蛋白降解增加表明在脊髓損傷病灶中Ca2+依賴性鈣蛋白酶可能被激活[29],使其對髓磷脂蛋白(MBP、PLP)和細胞骨架蛋白(NFP、MAP2)產生降解作用。鈣蛋白酶抑制劑MDL2817為疏水性小分子化合物,可通過被動擴散作用通過細胞膜,能夠阻止鈣蛋白酶Ⅰ激活、AS活化和神經元細胞死亡。在小鼠脊髓橫斷模型的髓鞘內注入MDL2817可以改善脊髓損傷的病理過程,抑制鈣蛋白酶的激活,同時AS的活化被抑制,膠質瘢痕明顯減少[30]。Ray等應用鈣蛋白酶特異性抑制劑E-64-d(1 mg/kg)在損傷病灶處進行微泵注射,持續24 h,發現鈣蛋白酶的活性得到顯著的抑制,反應性膠質增生的程度減輕[31]。

4.1.2 Olomoucine 細胞周期素依賴性蛋白激酶(cyclin-dependent protein kinases,CDK)抑制劑Olomoucine是一種嘌呤衍化物。Olomoucine對正常靜止態G0期的AS無影響,但能作用于處于不同增殖周期的增殖細胞。增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是增殖細胞(進入細胞周期的細胞)的標志[32],cyclinA、cyclinB1、cyclinE則是細胞周期中G1/S和G2/M轉折點重要的細胞周期素,可以促進細胞的增殖和分裂。Olomoucine干預可以明顯下調脊髓損傷組織中cyclinA、cyclinB1、cyclinE和 PCNA的高表達,從而有效抑制AS細胞的增殖[33]。Olomoucine作用機制為競爭ATP結合位點來抑制蛋白激酶活性,導致了CDK1、CDK2及 CDK5等酶活性的降低[34],從而抑制 cyclinE-CDK2、cyclinB-CDK1、cyclinACDK2、brain CDK5-p35復合物和 ERK1/MAP激酶的活性[35]。這些被抑制的復合物、激酶能與其底物發生作用,推動細胞周期繼續前進、啟動DNA復制和有絲分裂。但是,Olomoucine只能選擇性地抑制CDK1、CDK2、CDK5和 ERK1,而對 CDK6的抑制作用較弱,對CDK4則無抑制作用[36]。抑制CDK可以使細胞周期停滯于G1/S和G2/M轉折點,使細胞DNA合成和細胞分裂受到阻滯,從而抑制了細胞的分裂增殖。

Olomoucie對細胞凋亡的影響是復雜的,與細胞的類型、抑制的CDK類型等有關。研究表明,成年小鼠中樞神經系統損傷后,通過中樞給藥法予以Olomoucine干預后,可明顯減少細胞周期蛋白的增量調節,抑制AS、小膠質細胞的增殖,減輕胞體肥大[37]。

生長相關蛋白-43(GAP-43)是神經元軸突生長發育和可塑性的分子標記物,正常的成熟中樞神經系統(CNS)中GAP-43較微弱[38]。研究顯示,脊髓損傷后GAP-43的表達上調,表明其可能參與了損傷后神經生長修復的過程。在給予Olomoucine治療后,GAP-43表達增高,較損傷對照組更為明顯,且4周后仍維持在較高水平[33]。

4.1.3 Decorin Decorin是一種細胞外富含亮氨酸的小分子蛋白多糖[39],于1978年首次被分離純化。其相對分子質量為90×103～140×103,由核心蛋白和一條糖胺聚糖(GAG)鏈構成,核心蛋白的80%由富含亮氨酸的24個氨基酸的重復單位組成,其核心蛋白相對分子量約為40×103,以 10～12個富含亮氨酸重復序列的結構域為特征,屬于小分子間質性蛋白多糖家族成員。Decorin的結構有其共同的特征,即N末端存在氨基聚糖附著點,并緊鄰富含半胱氨酸區域,數個富亮氨酸重復序列,C末端存在保守的二硫環。Decorin廣泛分布在所有哺乳動物組織的細胞外基質(extracellular matrix,ECM)中,GAG鏈的組成隨組織來源不同而不同,在皮膚組織中為硫酸皮膚素,而在骨和軟骨中為硫酸軟骨素。Decorin基因在人類基因組為雙拷貝,位于 12q21～q22。Decorin能與Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ型膠原相互作用,但與Ⅰ型膠原關系最為密切[40]。Decorin能結合或修飾Ⅰ型膠原原纖維,調節膠原原纖維的重組和生長。Decorin缺乏時,Ⅰ型膠原纖維異常(韌性差、易脆),且生成減少。Decorin抑制病理性瘢痕的最主要機制之一是其抑制了TGF-β的作用,同時下調細胞Ⅰ、Ⅲ前膠原的mRNA表達,有效地抑制增生性瘢痕成纖維細胞的增殖。目前多認為,Decorin可通過旁分泌和自分泌的方式在 ECM 部位結合TGF-β1而起到中和 TGF-β1的作用,是自然條件下產生的TGF-β所致纖維化反應的抑制劑。Decorin有兩個所有 TGF-β同工型的結合位點,能與 TGF-β1、β2、β3結合,使其活性降低,它是 TGF-β 最重要的負調節劑,能抑制培養細胞TGF-β的生物活性。利用特殊抗體(6-B-6,LF-96)免疫標記浸漬法,也發現Decorin的核心蛋白能夠抑制膠原纖維的生長,中和TGF-β,從而抑制纖維化[41]。

Decorin不僅在大鼠結締組織細胞而且在神經系統中都有所表達。Decorin基因主要表達在施萬細胞(SCs)和前角運動神經元,周圍神經系統中Decorin mRNA的表達與在CNS和其他非神經組織中的表達相比,穩定性和表達水平更高。神經系統內的Decorin能夠調節細胞外膠原基質,促進軸突纖維結合蛋白黏附、SCs增殖和/或不同神經細胞的存活[42]。實驗表明,把人類重組核心蛋白多糖(human recombinant Decorin,hr-Decorin)快速注入被戳傷的大鼠脊髓背側柱傳導通路內,可以有效抑制炎癥反應、AS纖維化增生、多種軸突生長抑制因子(chondroitin sulfate proteoglycan,CSPG),從而可以促進軸突生長穿過損傷界面。Decorin可以高效(90%)抑制CSPG,說明它不僅可以抑制CSPG的合成,還可以促進CSPG的降解。因為絲氨酸蛋白酶能夠降解CSPG及其酶原,所以在研究Decorin治療大鼠急性脊髓損傷的實驗中發現,Decorin能夠增加纖維蛋白溶酶原(plasminogen)/纖維蛋白溶酶(plasmin)的合成。在脊髓損傷后注射hr-Decorin第8天,可以分別使損傷界面內纖維蛋白溶酶原和纖維蛋白溶酶的蛋白水平升高10和17倍;在體外,hr-Decorin可以使小神經膠質細胞的纖維蛋白溶酶原mRNA升高3倍。纖維蛋白溶酶除了能夠降解膠質瘢痕內多種軸突生長抑制的成分之外,還能夠激活神經營養因子和促進CNS的重建[43]。

4.2 移植衍生型限制性AS前體細胞 衍生型限制性膠質細胞前體細胞(GRP-derived astrocytes,GDAs)是限制性膠質細胞前體細胞(glial-restricted precursor,GRP)通過MBP4產生的新型神經膠質細胞種類。GDAs移植治療脊髓損傷較GRP移植具有更理想的功能,不僅具有類似于AS促進神經軸突再生和保護神經的生理功能,而且能夠有效誘導新生的AS成線性排列,為神經軸突再生和生長提供理想的通道,調控AS的過度增殖和膠質瘢痕的形成。在利用GRP移植治療脊髓背側橫斷大鼠的實驗中,移植GRP治療后確實改變了軸突生長錐的形態,而且在GRP細胞移植物中找到了再生軸突的神經纖維,但是并沒有觀察到軸突長距離再生,表明未分化的GRP細胞不能促進脊髓背側軸突的再生[44]和行為能力[45]的恢復。分別利用GRP和GDAs移植治療脊髓背側橫斷大鼠的實驗結果顯示,在損傷界面內未能觀察到GRP細胞自身轉化為另一種能夠促進軸突生長的細胞信號,單獨移植GRP細胞不能抑制瘢痕形成和提供軸突再生橋梁;紅核脊髓束(RST)損傷模型中的GRP細胞移植不能促進運動功能的恢復;而移植GDAs可以促進出現超過60%的上行脊髓背側柱軸突生長進入損傷中心,其中66%的軸突超過了兩端的損傷界面。GDAs可以填充損傷的界面、抑制膠質瘢痕形成、重新排列受體組織和延遲軸突生長抑制因子蛋白聚糖的表達。從而說明GDAs能夠非常有效地改善軸突再生的微環境,促進急性脊髓損傷后軸突的生長;還可以抑制軸突切斷后CNS神經元的萎縮和促進行為能力顯著地恢復[46]。以前的實驗表明,核心蛋白多糖介導的核心蛋白和CSPGs葡萄糖胺聚糖支鏈的抑制水平為脊髓損傷后軸突的生長提供更多的可能[47]。GDA移植后,受抑制的CSPGs延遲表達在促進軸突的再生方面具有重要的作用;在培養新的AS過程中,神經蛋白聚糖和2型神經膠質細胞(NG2)免疫反應的缺失表明GDAs移植可以抑制信號分子,減少神經蛋白的表達。GDAs的特點和功能,使其成為一種有吸引力新的修復CNS損傷的細胞類型[46]。

4.3 體外基因干預 GFAP是AS內特異性蛋白,基因位于17q21,與一些腫瘤相關基因nm23、erbB-2相鄰,與 1型神經纖維瘤蛋白(NF1)、整合蛋白(integrin)β4、p53、生長激素-1 和金屬蛋白酶組織抑制物(TIMP)-2基因同在17號染色體上。GFAP基因轉錄產物為3.8 kb mRNA,蛋白產物為中間絲結構蛋白(相對分子質量5×105)。GFAP型中間絲在細胞核和細胞膜之間形成連接,參與細胞內細胞骨架重組、細胞黏附、維持腦內髓鞘形成和神經元的結構以及作為細胞信號轉導通路等[48]。GFAP基因最早由Lewis等在1984年克隆并測序。該序列包含8個內含子,9個外顯子,由9971個堿基組成。GFAP基因與其他中間絲序列,尤其是結蛋白和波形蛋白的堿基序列具有較高的同源性,其中與結蛋白的同源性達65%,與波形蛋白的同源性達67%,它們在進化上都屬于保守性較高的序列。所不同的是,GFAP基因內含子中含有大量與Alu序列密切相關的重復序列,該序列很可能是一個插入元件。另一個有意義的結合特征就是其羧基端的絲氨酸和蘇氨酸殘基的高度保守性。這些氨基酸可能是中間絲的磷酸化和翻譯后修飾的潛在部位,提示這些部位可能是GFAP的重要功能部位。

通過在體外針對GFAP的目的基因,采取基因封閉、基因敲除和體外修飾等技術,調控GFAP的表達,從而抑制或延緩膠質瘢痕形成,為神經再生和功能重建創造良好的微環境。實驗顯示,利用基因封閉技術,在體外培養的AS被反義GFAP逆轉錄病毒感染后,AS的生長延緩、胞體縮小、變圓,突起回縮,核漿比例增大[9]。利用基因敲除技術將小鼠AS中GFAP和中間絲彈性蛋白基因敲除掉,結果抑制了GFAP和中間絲彈性蛋白在小鼠脊髓損傷處表達,膠質瘢痕明顯減少[49]。通過體外修飾培養的成年大鼠皮質AS的GFAP基因,再以HIV-Ⅰ衍生型病毒載體將其移植到大鼠脊髓的損傷處,成功地觀察到植入的AS存活并整合到宿主中,保持分泌GFAP的能力在6周以上[50]。

5 問題與展望

目前,國內外學者針對脊髓損傷治療的實驗研究花費不少心血,但是還未找到有效的、切實可行的治療方法。擺在我們面前有3個難點:①盡管我們發現很多神經生長因子,但單獨使用一種神經生長因子時,起效時間都很慢;②神經細胞的再生非常緩慢,而損傷遠端等不到修復結束就已經失去功能;③在神經的修復過程中,有很多因素起阻礙作用,如瘢痕、各種因子,有些機制還不明確,需要研究。其中AS增殖和膠質瘢痕形成是影響軸突再生的一個重要方面。

為了有效抑制AS增殖和膠質瘢痕形成,我們以往的實驗一般都是采用某一種方法,很難有效控制AS增殖。脊髓損傷后AS被激活,從靜止態向活化態轉化,直至增殖態,而且AS的這3種狀態往往并存,形成原因復雜,我們單獨運用一種方法難以達到預想的效果。所以我們在治療脊髓損傷時,要整體考慮AS的這3種狀態,在脊髓損傷的早期,采用聯合抑制的方法,有效控制AS從靜止態向活化態轉化,避免AS達到增殖態。聯合抑制可以整體考慮AS激活的刺激因素,重點干擾AS周期的G1/S和G2/M轉折點,兼顧消除已形成膠質瘢痕,采用兩種或以上的方法進行治療。我們可以用藥物控制損傷局部的炎性反應,抑制或消除一些刺激AS活化的細胞因子;利用基因修飾技術控制GFAP基因的合成和復制;用可以降解膠質瘢痕的藥物或其他方法清除已形成的膠質瘢痕。其中,前兩者是實驗的關鍵。我們可以采用的治療策略有:①采用Olomoucine和反義DNA基因封閉技術,控制GFAP基因復制、改善損傷微環境和抑制AS活化,適用于脊髓損傷的早期;②利用Decorin和GDAs移植控制微環境,改善或清除已形成的膠質瘢痕,使之形成線性結構,利于軸突生長,適用于脊髓損傷的中、后期;③利用多種方式,針對各個不同的AS狀態,采取聯合的方法抑制AS的增殖,并降解已形成的膠質瘢痕,適用于脊髓損傷的中期。此外,還可以運用其他的組合方式,針對AS所表現的具體情況靈活選擇。

總之,我們在針對脊髓損傷后AS的增殖和膠質瘢痕形成的實驗研究中,除了積極探索某一種有效的抑制手段之外,利用現有的實驗方法,采用聯合抑制的策略可能是我們今后研究的重點。

[1]樊沛,賀西京.嗅鞘細胞移植治療脊髓損傷應用進展[J].美中國際創傷雜志,2007,6(2):54-57.

[2]李玉飛,彭毓斌,朱艷平,等.星型膠質細胞對神經元調控的研究進展[J].解剖學雜志,2006,29(2):228-230.

[3]M adden KS,Kim WT,Cornell-Bell A.G lutamate,arachidonic acid,and calcium regulation in cultured hippocampal astrocytes:involvement in ischemia?[J].Adv Neurol,1996,71:53-59.

[4]Brune T,Deitmer JW.Intracellular acidification and Ca2+transients in cultured rat cerebellar astrocy tes evoked by glutamate ag onists and noradrenaline[J].Glia,1995,14(2):153-161.

[5]Wu H,Friedman WJ,Dreyfus CF.Differential regulation of neurotrophin expression in basal forebrain astrocytes by neuronal signals[J].J Neurosci Res,2004,76(1):76-85.

[6]F rossard N,Naline E,Olgart H?glund C,et al.Nerve growth factor is released by IL-1 beta and induces hyperresponsiveness of the human isolated bronchus[J].Eur Respir J,2005,26(1):15-20.

[7]M asuda S,Chikuma M,Sasaki R.Insulin-like growth factors and insulin stimulate erythropoietin production in primary cultured astrocy tes[J].Brain Res,1997,746(1-2):63-70.

[8]Brown RC,Mark KS,Egleton RD,et al.Protection against hypoxia-induced increase in blood-brain barrier permeability:role of tight junction protein and NFκ B[J].J Cell Sci,2003,116(Pt 4):693-700.

[9]朱舟,王偉,謝敏杰,等.CDK抑制劑Olomoucine對星形膠質細胞增殖活化的影響[J].華中科技大學學報(醫學版),2005,34(2):159.

[10]Bernaudin M,Tang Y,Reilly M,et al.Brain genomic response following hypoxia and re-oxygenation in the neonatal rat identification of genes that might contribute to hypoxia-induced ischemic tolerance[J].J Biol Chem,2002,277(42):39728-39738.

[11]Morita M,Kozuka N,Itofusa R,et al.Autocrime activation of EGF receptor promotes osciuation of glutamate-induced calcium increase in astrocytes cultured in rat cerebral cortex[J].J Neurochem,2005,95(3):871-879.

[12]Albrecht PJ,Dahi JP,Stoltfus OK,et al.Ciliary neurophic factor activates spinal cord astrocy tes stimulating their production and release of fibroblast g rowth factor-2,to increase motor neutron survival[J].J Exp Neurol,2002,173(1):46-62.

[13]Struve J,Maher PC,Li YQ,et al.Disruption of the hyaluronanbased extracellular matrix in spinal cord promotes astrocy te proliferation[J].Glia,2005,52(1):16-24.

[14]Holley JE,Gveric D,Whatmore JL,et al.Tenascin C induces a quiescent phenotype in cultured adult human astrocytes[J].Glia,2005,52(1):58.

[15]Gimé nez Y,Ribotta M,Menet V,et al.The role of astrocytes in axonal regeneration in the mammalian CNS[J].Prog Brain Res,2001,132:587-610.

[16]李建明,初同偉.脊髓損傷后星形膠質細胞的病理變化及相關治療措施進展[J].中國脊柱脊髓雜志,2007,17(8):632-634.

[17]Hobohm C,Günther A,Grosche J,et al.Decompsition and longlasting down regulation of ex tracellular matrix in perineuronal nets induced by focal cerebral ischemia in rats[J].J Neurosci Res,2005,80(4):539-548.

[18]Tang X,Davies JE,Davies SJ.Changes in distribution,cell associations,and protein expression levels of NG2,neurocan,phosphacan,brevican,versican V2,and tenascin-C during acute to chronic maturation of spinal cord scar tissue[J].J Neurosci Res,2003,71:427-444.

[19]M cKeon RJ,Schreiber RC,Rudge JS,et al.Reduction of neurite outgrowth in a model of glial scarring following CNS injury is correlated with the ex pression of inhibitory molecules on reactive astrocy tes[J].J Neurosci,1991,11:3398-3411.

[20]M cKeon RJ,Jurynec MJ,Buck CR.T he chondroitin sulfate proteoglycans neurocan and phosphacan are expressed by reactive astrocy tes in the chronic CNS glial scar[J].J Neurosci,1999,19:10778-10788.

[21]Berry M,Max well WL,Logan A,et al.Deposition of scar tissue in the central nervous system[J].Acta Neurochir Suppl(Wien),1983,32:31-53.

[22]Alonso G.NG2 proteoglycan-expressing cells of the adult rat brain:possible involvement in the formation of glial scar astrocy tes following stab wound[J].Glia,2005,49(3):318-338.

[23]West H,Richardson WD,Fruttiger M.Stabilization of the retinal vascular network by reciprocal feedback between blood vessels and astrocytes[J].Development,2005,132(8):1855-1862.

[24]Davies SJ,Goucher DR,Doller C,et al.Robust regeneration of adult sensory ax ons in degenerating white matter of the adult rat spinal cord[J].J Neurosci,1999,19:5810-5822.

[25]Davies SJ,Fitch M T,Memberg SP,et al.Regeneration of adult axons in white matter tracts of the central nervous sy stem[J].Nature,1997,390:680-683.

[26]Davies SJ,Field PM,Raisman G.Long interfascicular axon growth from embry onic neurons transplanted into adult myelinated tracts[J].J Neurosci,1994,14:1596-1612.

[27]Pettigrew DB,Crutcher KA.White matter of the CNS supports or inhibits neurite outgrowth in vitro depending on geometry[J].J Neurosci,1999,19:8358-8366.

[28]Kozuka N,Itofusa R,Kudo Y,et al.Lipopoly saccharide and proinflammato ry cy tokines require different astrocytes states to induce nitric oxide production[J].J Neurosci Res,2005,82(5):717-728.

[29]Wingrave JM,Sribnick EA,Wilford GG,et al.Higher calpastatin levels correlate with resistance to Calpain-mediated proteoly sis and neuronal apoptosis in juvenile rats after spinal cord injury[J].J Neurotrauma,2004,21:1240-1254.

[30]Hung KS,Hwang SL,Liang CL,et al.Calpain inhibito r hibits p35-p25-Cdk5 activation dcreases tau hyperphosphorylation,and improves neurological function after spinal cord hemisection in rats[J].J Neuropathol Exp Neurol,2005,64(1):15-26.

[31]Ray SK,Matzelle DD,Wilford GG,et al.Inhibition of calpain-mediated apoptosis by E-64 d-reduced immediate early gene(IEG)expression and reactive astrogliosis in the lesion and penumbra following spinal cord injury in rats[J].Brain Res,2001,916(1-2):115-126.

[32]Krüger S,Müller H.Correlation of morphometry,nuclear organizer regions,proliferation cell nuclear antigen and Ki-67 antigen expression with grading and staging in urinary bladder carcinomas[J].Br J Urol,1995,75:480.

[33]田代實,王偉,徐運蘭,等.細胞周期素依賴性激酶抑制劑Olomoucine對大鼠脊髓損傷后軸突再生微環境的影響及其意義[J].中華醫學雜志,2006,86(13):901-905.

[34]King KL,Cidlowski JA.Cell cycle regulation and apoptosis[J].Annu Rev Phy siol,1998,60:60.

[35]Abraham RT,Acquarone M,Andersen A,et al.Cellular effects of Olomoucine,an inhibitor of cyclin-dependent kinases[J].Biol Cell,1995,83:105.

[36]Krystof V,McNae IW,Walkinshaw M D,et al.Antiproliferactivity of OlomoucineⅡ,a noval 2,6,9-trisubstituted purine cyclin-dependent kinase inhibitor[J].Cell M ol Life Sci,2005,62(15):1763-1771.

[37]Cernak I,Stoica B,By rnes KR,et al.Role of the cellcycle in the pathobiology of central nervous sy stem trauma[J].Cell Cycle,2005,4(9):1286-1293.

[38]Cafferty WB,Gardiner NJ,Das P,et al.Conditioning injury-induced spinal axon regeneration fails in interleukin-6 knock-out mice[J].J Neurosci,2004,24:4432-4443.

[39]Scott PG,McEwan PA,Dodd CM,et al.Crystal structure of the dimeric protein core of Decorin,thearchety palsmall leucine-rich repeat proteog lycan[J].Proc Natl Acad Sci,2004,101(44):15633-15638.

[40]Batbayar T,Nomura Y,Ishii Y,et al.Affinity of placental Deco rin for collagen[J].Biosci Biotechnol Biochem,2000,64(11):2478-2481.

[41]Fukui N,Fukuda A,Kojima K,et al.Suppression of fibrous adhesion by proteoglycan Decorin[J].J Orthop Res,2001,19(3):456-462.

[42]Hanemann CO,Kuhn G,Lie A,et al.Expression of Decorin mRNA in the nervous system of rat[J].J Histochem Cy tochem,1993,41(9):1383-1391.

[43]Davies JE,Tang XF,Bournat JC,et al.Decorin promotes plasminogen/plasmin expression within acute spinal cord injuries and by adult microglia in vitro[J].J Neurotrauma,2006,23(3-4):397-408.

[44]Hill CE,Proschel C,Noble M,et al.Acute transplantation of glial-restricted precursor cells into spinal cord contusion injuries:survival,defferentiation,and effects on lesion environment and axonal regeneration[J].Exp Neural,2004,190(2):289-310.

[45]Cao Q,Xu XM,Devries WH,et al.Functional recovery in traumatic spinal cord injury after transplantation of multineurotrophin-expressing g lial-restricted precurso r cells[J].J Neurosci,2005,25:6947-6957.

[46]Davies JE,Huang C,Proschel C,et al.A strocytes derived from glial-restricted precursors promote spinal co rd repair[J].J Biol,2006,5(3):7.

[47]Davies JE,Tang X,Denning JW,et al.Decorin suppresses neurocan,brevican,phosphacan and NG2 expression and promotes ax on growth across adult rat spinal cord injuries[J].Eur J Neurosci,2004,19:1226-1242.

[48]卞修武.膠質纖維酸性蛋白基因調控及其在膠質瘤誘導分化中的作用[J].中華病理學雜志,1999,28(3):222-223.

[49]Menet V,Prieto M,Privat A,et al.Axonal plasticity and functional recovery after spinal cord injury in mice deficient in both glial fibrillary acidic protein and vimentin genes[J].Proc Natl Acad Sci USA,2003,100(15):8999-9004.

[50]Pencalet P,Serguera C,Corti O,et al.Integration of genetically modified adult astrocytes into the lesioned rat spinal cord[J].J Neurosci Res,2006,83(1):61-67.