簡化血樣中微量銅測定方法的探討

倪蕾，李然

(1.北華大學化學與生物學院，吉林 吉林 132001；2. 吉林市中心醫(yī)院 特診神經(jīng)科，吉林 吉林132011)

人體血樣中微量銅，與很多疾病的發(fā)生、發(fā)展關系密切，目前檢測采用原子吸收分光光度儀，儀器昂貴、檢測成本高、難以普及應用，現(xiàn)在國內(nèi)除幾家特大的三級甲等醫(yī)院和專科醫(yī)院外都尚未在臨床裝備使用。本研究目的在于建立一種新的價格低廉、方法簡便、精確度高、適合各綜合醫(yī)院臨床使用的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器。722型分光光度計、pHS-2型酸度計、電熱恒溫水浴箱。

1.1.2 試劑。氫醌0.02mol/L、H2O20.3mol/L、NH3-NH4F緩沖液pH=7.30、Cu2+標準儲備液0.1mg/mL。

1.2 實驗方法

利用在弱減性的NH3-NH4F介質(zhì)中， Cu2+對H2O2與氫醌反應起催化作用的原理，采用固定時間法。取Cu2+樣品于25mL的具塞比色管內(nèi)，定容至10.00mL，加入 1.00 mLpH=7.30的 NH3-NH4F緩沖液及2.00mL0.02mol/L氫醌，搖勻放入30℃恒溫水浴箱內(nèi)保溫10min，加入1.00mL0.3mol/L的H2O2，搖勻同時記時，在30℃恒溫水浴下反應 20 min，取出以試劑空白為參比，于21.5min時在波長為490nm處 ，用2cm比色皿進行測定，讀取溶液的吸光度值。

1.3 樣品處理與分析

取血樣2.00mL，加入硝酸+高氯酸+硫酸（24+24+1）20mL，加蓋，放置24h，然后于加熱板上消化，直至樣液變成無色并全干，加水溶解，于25mL容量瓶中定容、測定。

2 結果與討論

2.1 測定波長的選擇

本研究對420~560nm波長的入射光進行多次試驗，結果表明：在490nm波長處，測定溶液的吸光度值最大、靈敏度最高，為最大吸收波長，故選用490nm波長光作為測定波長。

2.2 溶液酸度的選擇

在選定的測定波長光照射下，本研究對NH3-NH4F緩沖液的不同pH值進行選擇，測定溶液的吸光度值，結果表明：當NH3-NH4F緩沖液的pH=7.30時，溶液的吸光度值最大而且穩(wěn)定，故溶液的最佳酸度為NH3-NH4F緩沖液的pH值為7.30。

2.3 試劑用量的選擇

本研究采用 L9（34）正交表，對 NH3-NH4F 緩沖液、氫醌、H2O2的用量進行選擇，結果表明：選用pH=7.30的NH3-NH4F 緩沖液 1.00mL；0.02mol/L 氫醌 2.00mL；0.3mol/L H2O21.00mL的試劑用量，測定溶液的吸光度值最大。

2.4 反應溫度及反應時間的選擇

反應溫度的升高及反應時間的延長，都能使反應速度增大，即吸光度值增大。考慮到實際的應用，選擇了反應溫度30℃、反應時間20min為最佳。

2.5 共存離子的影響

在所選定的分析條件下，對樣品中共存的一些離子進行了干擾研究，結果表明：對于含量為0.1μg/14mL，當要求相對誤差在±5%范圍內(nèi)時，10，000倍的 Na+、K+、Ba2+、Al3+、Cl-、NO3-、NO2-，1，000 倍的 Mg2+、Mn2+、Fe2+、Cd2+、500倍 的 Ca2+、MnO4-，250倍 的 Fe3+，125倍 的 Zn2+、Ag+、，100倍的Pb2+，50 倍的Co2+皆不干擾測定。

2.6 標準曲線及方法的檢出限

在選定的條件下，測定標回歸方程為A=0.0024+1.828C，相關系數(shù)為0.9958，線性范圍0.01~1.0μg/14mL。按A=0.02時所能檢測到的Cu2+的量為檢出限，本方法檢出限為6×10-10g/mL。

2.7 方法的精密度

在選定的條件下，選擇Cu2+含量分別為0.04、0.50、0.80μg/14mL的三種不同濃度標準溶液，各重復測定六次，合并變異系數(shù)為3.01%。

2.8 方法的準確度

用樣品中加標回收率來檢驗方法的準確度，加標回收率在98 %~102 %之間。

2.9 對照實驗

本法與原子吸收光譜法進行對照實驗，其相對誤差皆小于10%，經(jīng)檢驗兩種方法無顯著性差異。

銅是人體內(nèi)重要的微量元素之一，銅代謝異常與很多疾病如肝豆狀核變性等疾病的發(fā)生、發(fā)展有著直接的關系[1-3]，還與多種地方病和疑難病的發(fā)生、發(fā)展有關，其臨床檢測受到越來越多的關注[4]，但這些疾病的發(fā)病人數(shù)并不多，同時該元素含量極低，需要高靈敏的檢測手段才能檢測出。目前大多采用的原子吸收分光光度法[5]，該方法雖然靈敏度較高，但儀器昂貴，檢測成本過高，大多醫(yī)院因檢測人數(shù)不多，難以回收成本而未配備使用。本研究為尋求一種使用簡單、成本低廉且快速準確的檢測方法，我們通過反復實驗研究，利用在弱堿性的NH3-NH4F介質(zhì)中，Cu2+對H2O2與氫醌反應起催化作用的原理，明確了該催化體系的優(yōu)化條件，建立了催化分光光度法測定血銅含量的方法，取得了滿意的結果。該方法是一種儀器簡單、方法簡便、分析時間短、靈敏度高、抗干擾能力強，可靠的分析方法。該方法較原子吸收分光光度儀檢測方法的不足點是不適合大群體樣本檢測；優(yōu)點是檢測成本低，特別適合那些發(fā)病人數(shù)不多，但與銅代謝異常有密切關系的疾病患者的血銅檢測。

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