上皮性卵巢癌組織中泛素與細胞周期蛋白 B1的表達*

史惠蓉,衛 玲,張瑞濤

1)鄭州大學第一附屬醫院婦產科鄭州 450052 2)甘肅省腫瘤醫院婦瘤科蘭州 730050

△女,1956年4月生,博士,教授,研究方向:婦科腫瘤,E-mail:huirongshi@yahoo.com.cn

卵巢癌是女性生殖系統常見惡性腫瘤,目前卵巢癌發生發展的分子生物學機制仍不清楚。近年來圍繞卵巢腫瘤標志物的研究[1]表明,由泛素(ubiquitin,Ub)參與組成的泛素-蛋白酶體復合通路(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)不僅對異常蛋白質有著降解作用,而且能調控細胞周期進程,與惡性腫瘤的發生發展密切相關。細胞周期調控因子細胞周期蛋白B1(Cyclin B1)的異常擴增與過表達與許多惡性腫瘤的發生發展及其預后關系密切[2-3]。作者應用免疫組織化學 SP法檢測卵巢腫瘤組織中Ub和Cyclin B1的表達情況,初步探討其與上皮性卵巢癌的關系。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集鄭州大學第一附屬醫院2004年至 2007年婦產科手術切除標本 90例,患者年齡30～72歲,中位年齡 51歲。所有標本均經病理學檢查確診,術前均未行放化療及其他治療。其中上皮性卵巢癌 50例(漿液性囊腺癌36例,黏液性囊腺癌9例,子宮內膜樣癌5例);FIGO分期:I期9例,Ⅱ期10例,Ⅲ期28例,Ⅳ期3例;分化程度:G1級15例,G2級 14例,G3級 21例;有淋巴結轉移 23例,無淋巴結轉移 27例。卵巢良性腫瘤組織 20例(漿液性囊腺瘤 16例,黏液性囊腺瘤 4例)。正常卵巢組織 20例,為同期因子宮肌瘤行子宮切除術同時切除的卵巢組織標本,術后病理學檢查示卵巢組織無病變。

1.2 主要試劑 Ub兔抗人單克隆抗體購自福建邁新生物技術有限公司,Cyclin B1鼠抗人單克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司,均為即用型工作液。通用型SP免疫組織化學試劑盒及DAB顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 3種組織中Ub與Cyclin B1蛋白檢測方法蠟塊連續切片,厚 3～5μm,采用 SP免疫組織化學法檢測,嚴格按試劑說明書進行操作。以PBS代替一抗為陰性對照,以乳癌組織石蠟切片為陽性對照。Ub陽性表達定位于細胞質和細胞核,呈棕黃色或淡棕黃色;Cyclin B1主要定位于細胞質,呈棕黃色或淡黃色。結果判定參考文獻[4]。①按染色強度計分:無著色為 0分,淡棕黃色為 1分,棕黃色為 2分。②按陽性細胞所占百分比評分(用 400倍顯微鏡觀察,取 10個視野,每個視野計數 100個細胞中的陽性細胞,計算其平均值):陽性細胞 ＜5%為 0分, 5%～為 1分,25%～為 2分,50%～為 3分,75%～為4分。以上2項評分相加,0分為(-),1～6分為(+)。

1.4 統計學處理 采用SPSS 13.0進行統計學分析。不同卵巢組織中Ub及Cyclin B1陽性表達率的比較采用Fisher確切概率法及χ2檢驗,上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B1表達與臨床病理參數的關系采用 χ2檢驗及校正 χ2檢驗,上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B1表達的關聯性分析采用Pearson列聯系數。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 不同卵巢組織中Ub及Cyclin B1蛋白的表達

結果見圖1、表1。

圖1 不同卵巢組織中Ub(A)及Cyclin B1(B)蛋白的表達(SP,×400)

表1 不同卵巢組織中Ub和Cyclin B 1蛋白陽性表達率比較 例(%)

2.2 上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B1蛋白的表達與臨床病理參數的關系 結果見表 2?？芍掀ば月殉舶┙M織中Ub、Cyclin B1的表達與FIGO分期、分化程度和淋巴結轉移有關。

表2 上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B1蛋白表達與臨床病理參數的關系 例(%)

2.3 上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B1蛋白表達的關聯性分析 結果見表3。

表3 上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B 1蛋白表達的關聯性 例

3 討論

Ub參與調節細胞周期進程、細胞增生與分化、蛋白質降解、DNA修復以及信號傳導等多種細胞生理過程[5-6]。Cyclin B1是細胞周期G2/M期限制點的主要調控元件,與p34cdc2形成復合物,稱為有絲分裂促進因子。Bazzaro等[7]研究表明,與正常卵巢組織相比,卵巢癌組織中存在Ub蛋白的蓄積,在低分化的卵巢癌組織中Ub蛋白水平升高更加明顯。Takeno等[8]認為,Cyclin B1的過表達與腫瘤的發生和預后有關,同時與腫瘤的分期、大小和浸潤轉移有關。

該研究結果顯示,上皮性卵巢癌組織中存在 Ub和Cyclin B1的過表達,提示Ub和Cyclin B1與卵巢癌關系密切。FIGO分期較晚、組織分化較差和伴有淋巴結轉移的上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B1表達較高,提示Ub和Cyclin B1與卵巢癌的惡性進展和轉移有關,可作為評估上皮性卵巢癌的惡性程度及預后的指標。此外,該研究結果還顯示上皮性卵巢癌組織中Ub與Cyclin B1蛋白的表達有關聯,提示 2者可能協同參與細胞周期調節異常,共同促進卵巢癌的惡性進展和轉移。

綜上所述,Ub和Cyclin B1與卵巢癌的關系密切,可能協同參與卵巢癌的惡性進展和轉移,在此基礎上深入研究 2者與卵巢癌發生發展的關系,有助于進一步了解卵巢癌發病的分子機制,指導臨床的診斷、治療和預后判斷。

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