人型支原體對人絨毛蛻膜組織TNF-α、IL-10及PGE2的影響

張群鋒,黃余良,劉 玨,李梅清,周建斌

南華大學附屬第二醫院婦產科衡陽 421001

△男,1974年10月生,碩士,主治醫師,研究方向:婦科疾病,E-mail:xiaofeng29@163.com

人型支原體(Mycoplasma hominis,Mh)是常見的性傳播疾病病原體。通常情況下,Mh感染沒有明顯的臨床癥狀,但在羊水中具有較高的檢出率[1],目前認為其與早產關系密切[2-3]。絨毛蛻膜中的母體細胞具有獨特的免疫學特性,它能通過多種機制抑制母體免疫系統對胎兒的排斥反應[4-5],同時,絨毛蛻膜對抗原刺激的敏感性較低,能抑制病原體所誘導的宮內炎癥。作者對絨毛蛻膜組織中前炎性細胞因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-10(IL-10)及分娩的主要啟動因子前列腺素2(PGE2)進行了檢測,探討Mh是否對絨毛蛻膜組織具有致炎作用。

1 材料與方法

1.1 M h的培養與滅活 Mh于含有體積分數10%小牛血清、酵母浸液的PPLO培養基中,37℃體積分數5%CO2條件下培養 24～48 h,生長至對數晚期后,14 000 r/m in離心10 min收集沉渣,用無菌PBS重懸浮。濃縮懸浮液的顏色改變單位(CCU)采用雙份 10倍稀釋肉湯加以計算。剩余菌懸液置于 56℃20 min以滅活Mh。滅活的Mh再次接種于肉湯培養基和瓊脂固體培養基加以驗證,經驗證后將滅活的Mh于-70℃儲存備用。

1.2 實驗分組 絨毛蛻膜組織來自5名選擇性剖宮產的健康孕婦,均知情同意。胎盤分娩后,獲取150 cm2的胎膜,用生理鹽水漂洗以去除殘留血液,手工去除羊膜后,用活檢穿孔器將蛻膜組織剪成直徑為6mm的碎片。隨后將所有組織放入 6孔板中,每孔 6塊,加入 4 mL含體積分數 10%胎牛血清、Hepes、β-巰基乙醇、L-谷氨酰胺及慶大霉素的IMDM培養基,于37℃體積分數5%CO2條件下培養 24 h。次日去除培養基,分 5組培養,分別加入PPLO培養基(陰性對照組)、終濃度為 102、104、106CCU/m L的Mh濃縮懸浮液(Mh低、中及高濃度組)及5 g/L脂多糖(陽性對照組),0、6、24、36和 48 h后,每孔棄去500μL培養液,加入等體積(終濃度為20mg/L)酮洛芬后,將6孔板連同其內培養細胞置于-70℃保存,用于TNF-α、IL-10及PGE2測定。

1.3 ELISA法檢測TNF-α、IL-10及PGE2刺激結束后,將 6孔板于 -70℃反復凍融 2次以充分裂解細胞,5 000 r/min離心5m in后取上清液(包含細胞內和先前分泌至胞外的總細胞因子)儲存于-70℃保存。TNF-α、IL-10和PGE2檢測按照晶美公司的ELISA試劑盒說明書進行。實驗重復3次。1.4 統計學處理 使用SPSS 13.0進行統計學處理,對 5組同一時間點以及同一組不同時間點人絨毛蛻膜組織TNF-α、IL-10和PGE2檢測結果進行單因素方差分析,兩兩比較用LSD-t檢驗,檢驗水準α=0.05。

2 結果

不同濃度Mh作用于絨毛蛻膜組織后,蛻膜組織中TNF-α、IL-10及PGE2水平見表1～3。

表1 TNF-α檢測結果(n=3) ng/L

表2 IL-10檢測結果(n=3) ng/L

表3 PGE 2檢測結果(n=3) ng/L

3 討論

作者從 5例正常婦女胎膜中獲取絨毛蛻膜組織,它主要由母源免疫系統的蛻膜形成細胞、胎兒的結締組織及滋養層細胞組成。蛻膜組織由非單一細胞系組成,因此能更好地模擬體內由多種反應性細胞組成的功能器官,減少混雜因素對實驗的影響。

IL-6是前炎性細胞因子,常常用作反映宮內炎癥的重要指標[6],羊水以及胎兒血液中 IL-6增高能在一定程度上預測早產的發生。但 IL-6產生時間較遲,同時也不具有特異性[7],故此次實驗未將 IL-6作為檢測指標。TNF-α主要由巨噬細胞產生并介導前炎性反應,并且半衰期比較短。抑炎因子 IL-10是TNF-α誘導巨噬細胞產生的細胞因子,也可由炎癥抗原直接誘導,它在維持炎癥平衡過程中起十分重要的作用[8]。

作者發現Mh和脂多糖刺激蛻膜組織后,TNF-α的產生最快,其后為IL-10和PGE2。這與理論上的炎性刺激后細胞因子的產生順序相同[9]。誘導蛻膜產生炎癥反應需要較高濃度的Mh抗原(閾值),但實驗中無法繪制完整的Mh-TNF-α劑量依賴曲線,因為培養基內Mh抗原濃度無法達到相應的要求。

Mh能在羊水中長時間寄生,并無明顯臨床癥狀,可能與其毒力較低有關。作者的研究結果顯示,對于抗炎作用強的蛻膜組織而言,低劑量的 Mh可能并不能誘發相應的炎癥反應,大劑量的 Mh才能誘導明顯的TNF-α產生。另外可能的原因是Mh誘導的炎癥反應機制可能與其他細菌有所不同[10]。某些細菌或抗原從下生殖道到達子宮后,如果蛻膜組織產生過強的炎癥反應對妊娠不利,這可能是蛻膜組織存在刺激閾值且抗炎效應是非特異性的原因。

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