八月瓜籽中脂肪酸的超聲提取及GC-MS分析

歐陽玉祝，李 勇，吳道宏，田向榮

(1.植物資源保護與利用湖南省高校重點實驗室，湖南 吉首 416000；2.吉首大學食品科學研究所，湖南 吉首 416000)

八月瓜籽中脂肪酸的超聲提取及GC-MS分析

歐陽玉祝1,2，李 勇2，吳道宏2，田向榮1

(1.植物資源保護與利用湖南省高校重點實驗室，湖南 吉首 416000；2.吉首大學食品科學研究所，湖南 吉首 416000)

以乙醇、乙酸乙酯、正丁醇和丙酮為溶劑，采用超聲輔助提取法提取八月瓜籽油。用GC-MS分析八月瓜籽油中脂肪酸的組成和含量，并對4種提取物的組成進行比較。結果表明：乙醇和乙酸乙酯提取的油脂質量較好，油脂提取率分別為19.23%和35.69%，從八月瓜籽油中分別檢出11種脂肪酸，其中不飽和脂肪酸主要為油酸和亞油酸，含量分別為71.97%和83.79%。

八月瓜；GC-MS；超聲提取；脂肪酸

八月瓜是一種原生態無污染綠色水果，又稱木通、羊開口、牛腰子果、八月扎、野人瓜等，是天然藥食兩用野生經濟木質藤本半常綠纏繞植物，富含VC、有機酸、可溶性糖和人體必需的氨基酸等，是養顏美容、健身壯體、延年益壽不可多得的保健果王[1]。研究表明，八月瓜具有良好的解毒利尿、除濕鎮痛、防癌抗癌，預防和治療高血壓、高血脂等效用[2-3]，目前主要作為藥物用于臨床。王曄[4]、高慧敏[5]等對三葉木通藤莖的化學成分進行了研究，其中含有大量的齊墩果酸。何仰清[6]、孫萍[7]等用LC-MS聯用對不同木通進行鑒定，而八月瓜籽油的提取和化學成分分析研究的報道較少。氣相色譜-質譜聯用技術具有快速、高效、準確等優點，在油脂化學成分分析上得到了廣泛的應用[8-12]。本實驗采用超聲提取法提取八月瓜籽油，用GC-MS對脂肪酸的化學成分進行分析比較，以期為八月瓜的開發利用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

八月瓜籽采自于吉首市，將新鮮八月瓜去皮，并將果肉和籽核分離，籽核經洗凈，晾干，于6 0℃、0.08MPa真空干燥，粉碎約30目得八月瓜籽粉末備用。

無水乙醇、正丁醇、丙酮和乙酸乙酯均為國產分析純。

GCMS-QP2010型氣相色譜-質譜聯用儀(帶NIST05. LIB標準庫) 日本島津公司；KQ-250E型超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司；RE-85Z旋轉蒸發儀 上海青滬儀器廠；SHB-T11循環水式多用真空泵 鄭州長城科工貿有限公司；FZ102型微型植物粉碎機 天津市泰斯特儀器有限公司；FA2104N電子分析天平 上海精密科學儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 八月瓜籽油的超聲提取

準確稱取20g干燥的八月瓜籽粉末于250mL圓底燒瓶中，加入200mL無水乙醇(乙酸乙酯、正丁醇、丙酮)，在70℃溫度下超聲提取120min，抽濾，濾液用旋轉蒸發器去除溶劑，得八月瓜籽油，按下式計算油的提取率。

1.2.2 八月瓜籽油的甲酯化

稱取八月瓜籽油0.5g于50mL圓底燒瓶中，加入濃硫酸-甲醇溶液(1:99，V/V)10mL[13-14]，于70℃水浴加熱回流60min后，加入正己烷10mL，并加入蒸餾水至瓶頸，取出上清液，再用5mL正己烷洗滌1次，合并上清液，加入無水硫酸鈉干燥，用GC-MS分析。

1.2.3 氣相色譜-質譜聯用分析條件

色譜條件：載氣為氦氣；汽化室溫度250℃；進樣量0.5μL；柱流量0.94mL/min；分流比20:1；色譜柱RTX-5MS(30m×0.25mm，0.25μm)；柱溫250℃，程序溫度：100℃保留2min，以10℃/min上升到250℃，保留5min。

質譜條件：電子轟擊源(EI)，電子能量70eV；離子源溫度200℃，接口溫度230℃；掃描范圍29～450u。

2 結果與分析

2.1 八月瓜籽油的提取

不同的提取溶劑對油脂的溶解能力和進入植物細胞的能力不同，油脂的提取率將不同。本實驗選擇無水乙醇、正丁醇、丙酮、乙酸乙酯為提取溶劑，以八月瓜籽油提取率為指標，取八月瓜籽粉末，在70℃條件下超聲提取120min，考察不同溶劑中八月瓜籽油的提取率，結果見表1。

表1 不同溶劑中八月瓜籽油的提取率Table1 Effect of solvents on extraction yield of Akebia trifoliata seed oil

由表1可見，丙酮和乙酸乙酯為溶劑的提取率較高，但提取物中有白色沉淀物，油質差，且溶劑價格較高；正丁醇作為提取溶劑時，提取物的顏色較深，油的質量也不高；乙醇提取的得油率較低，但油脂顏色好，沒有沉淀物，而且溶劑價格低，毒副作用小。

2.2 八月瓜籽油的脂肪酸組成及含量分析

2.2.1 乙醇提取油的脂肪酸含量分析

將乙醇提取的八月瓜籽油經甲酯化后，用GC-MS進行檢測，用色譜工作站給出脂肪酸甲酯的總離子流圖，結果見圖1。

圖1 八月瓜籽油中脂肪酸的總離子流圖Fig.1 Total ion current chromatogram of methyl esterified fatty acids in Akebia trifoliata seed oil

結合NIST05.LIB標準庫，將分析結果與標準圖譜核對，解析出油的成分，并用峰面積歸一法確定油中各種成分相對含量，結果如表2所示。

表2 乙醇提取八月瓜籽油的GC-MS成分分析Table2 GC-MS analytical results of fatty acid composition of ethanol extraction-derived Akebia trifoliata seed oil

由表2可以看出，乙醇提取的八月瓜籽油中主要成分有兩類，即烷烴化合物和油脂；烷烴總含量僅占2.49%，油脂的相對含量高達97.52%。油脂中檢出11種脂肪酸，其中不飽和脂肪酸4種，相對含量為72.43%；主要產物為油酸和亞油酸，相對含量分別為43.52%和28.45%，相對含量高達71.97%；飽和脂肪酸7種，相對含量為25.09%。研究發現，膽固醇必須與亞油酸結合才能在體內進行正常的運轉和代謝；當人體缺乏亞油酸時，膽固醇與飽和脂肪酸結合將發生代謝上的障礙，并沉積在血管壁上，形成動脈粥樣硬化，從而引發心腦血管疾病[15]。由于八月瓜籽油中富含油酸和亞油酸，因此，這種油產品有良好的降脂降壓和防止動脈硬化等作用，具有較高的應用價值。

表3 4種溶劑提取的八月瓜籽油組成及含量Table3 Comparison of fatty acid composition among Akebia trifoliata seed oil extracted with different solvents

2.2.2 不同溶劑提取的八月瓜籽油成分比較

將4種溶劑提取的八月瓜籽油經甲酯化后，用GCMS檢測，結合NIST05.LIB標準庫，與標準圖譜核對，解析出油脂的主要成分，通過峰面積歸一法，確定油脂組成及含量，結果見表3。

表3結果表明：乙醇和乙酸乙酯兩種溶劑提取的油脂中分別檢出11種脂肪酸，正丁醇和丙酮提取的油脂中只檢出8種和6種脂肪酸。油脂中主要產物為亞油酸和油酸類不飽和脂肪酸，其相對含量分別為：71.97%(乙醇提取)、83.79%(乙酸乙酯提取)、82.81%(正丁醇提取)和71.32%(丙酮提取)，丙酮提取物中不飽和脂肪酸只檢出油酸，未檢出亞油酸。從脂肪酸種類、出油率、油脂外觀(顏色和白色沉淀物)綜合考察4種溶劑提取的油脂，乙醇提取的油脂外觀清亮透明，顏色較鮮，脂肪酸種類多，質量最好；其次是乙酸乙酯提取的油脂，出油率高，脂肪酸種類多，但油中有沉淀物；其余兩種溶劑提取的油脂脂肪酸種類較少，有沉淀物或顏色較深，油質量較差。

3 結 論

以乙醇、正丁醇、丙酮和乙酸乙酯為溶劑，用超聲波輔助提取法提取八月瓜籽油，油脂提取率分別為19.23%、20.4%、41.33%和35.69%。GC-MS分析表明：乙醇和乙酸乙酯提取的油脂中組分最多，分別檢出11種不飽和脂肪酸，主要產物為油酸和亞油酸，相對含量分別為71.97%和83.79%。八月瓜籽油富含不飽和脂肪酸，有很高的營養保健價值和藥療功效，是制備營養性保健調和油的優質原料，具有良好的開發應用價值。

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Ultrasonic-aided Extraction and GC-MS Analysis of Fatty Acids from Akebia trifoliata Seed

OUYANG Yu-zhu1,2，LI Yong2，WU Dao-hong2，TIAN Xiang-rong1
(1. Key Laboratory of Plant Resource Conservation and Utilization(Jishou University), College of Hunan Province, Jishou 416000, China；2. Institute of Food Science, Jishou University, Jishou 416000, China)

The ultrasonic-aided extraction of Akebia trifoliata seed oil was achieved using alcohol, ethyl acetate, n-butanol or acetone as the extraction solvent. Along with this, the oils extracted with the four solvents were comparatively analyzed for their fatty acid composition by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Alcohol was found to be available for better sensory quality of oil, and ethyl acetate for higher oil yield, and the resultant oil yields were 19.23% and 35.69%, respectively. There were 11 fatty acids detected in Akebia trifoliata seed oil, and the major unsaturated fatty acids were oleic acid and linoleic acid, occupying 71.97% and 83.79%, respectively.

Akebia trifoliata；GC-MS；ultrasoni-aided extraction；fatty acids

TS225.1

A

1002-6630(2010)20-0322-03

2010-06-29

湖南省科技廳科技計劃項目(2008FJ3077)；植物資源保護與利用湖南省高校重點實驗室開放基金項目(JSK201001)

歐陽玉祝(1956—)，男，教授，碩士，主要從事天然產物開發和功能性食品研究。E-mail：ouyang1227@126.com