檢驗結(jié)核分枝桿菌及結(jié)果分析

徐懿

(益陽醫(yī)學高等?？茖W校附屬醫(yī)院 湖南 益陽 413000）

檢出痰液中結(jié)核分枝桿菌一直是臨床診斷肺結(jié)核或鑒別肺結(jié)核與其他肺病的主要依據(jù)，涂片法簡單易行，但陽性率較低，羅氏培養(yǎng)法雖為金標準，但因周期較長，均難以滿足臨床需要。近年來，作為直接檢測分枝桿菌種系的鑒定及藥敏的許多分子生物學方法得到長足發(fā)展，這些方法能將診斷的時間從幾周縮短到幾天，其中實時熒光定量PCR(FQ-PCR)因其技術(shù)成熟，具有較高的敏感性和特異性，已逐步應用于臨床，我們用以上3種方法同時檢測100例臨床痰液標本結(jié)核桿菌，對結(jié)果進行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

取自本院呼吸內(nèi)科的肺結(jié)核病人100例，均選自門診和住院病人，經(jīng)X線檢查或病理學檢查確診為結(jié)核病(均系初治病人)。非結(jié)核肺部病例40例，其中肺炎23例，支氣管擴張12例，肺癌5例。

1.2 試劑

FQ-PCR試驗盒由中山醫(yī)科大學達安基因公司生產(chǎn)，羅氏培養(yǎng)基由浙江省結(jié)核病防治所提供，萋-納氏抗酸染色法，均按《全國結(jié)核病診斷細菌學檢驗規(guī)程》[1]試劑配制、操作及結(jié)果報告。

1.3 方法

痰液直接涂片抗酸染色鏡檢；結(jié)核桿菌培養(yǎng)采用羅氏培養(yǎng)法，痰液堿前處理后，于30min內(nèi)接種完畢；熒光定量PCR痰液標本處理：痰液根據(jù)不同性狀，加入4倍體積40g/LNaOH液化30min，取1mL液化好的痰液離心，再用生理鹽水洗滌沉淀2次，離心取沉淀加入50mLDNA提取液置水浴100℃10min裂解，取2mL做PCR模板，93℃2min預變性，93℃30s，55℃min，40個循環(huán)，結(jié)果判定，>1.0×l03拷貝／mL為陽性。

2 結(jié)果

(1)100例標本結(jié)核桿菌檢測結(jié)果，見表1。(2)40例非肺結(jié)核病患者痰液標本檢測結(jié)果，TB-DNA均為陰性。(3)抗酸染色、羅氏培養(yǎng)和FQ-PCR標本結(jié)果的相關(guān)性，見表2。

表1 100例標本檢測結(jié)果

表2 3種方法檢測結(jié)果相關(guān)性

3 討論

目前，結(jié)核病的細菌學實驗診斷，主要依靠痰液涂片鏡檢抗酸桿菌。由于該方法陽性率不高，發(fā)展中國家此法的敏感性僅為20%～40%，發(fā)達國家達40%～60%，只能發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌菌體。很難鑒別是死菌還是活菌[2]。羅氏培養(yǎng)，耗時是活菌才能生長，整個過程長達8～12周，已不適合現(xiàn)代短程化療的需要，但仍可繼續(xù)做藥物敏感性試驗、菌種鑒定和毒力試驗[3]。本文檢測結(jié)果證實，在確診的MTB患者中FQ-PCR的陽性檢出率可達58%，明顯高于培養(yǎng)法與涂片法，這與AL ZahraniK等[4]報道相反，其原因在于培養(yǎng)陽性率不高。由于FQ-PCR采用閉管操作，本文檢測的40例非MTB病人無一例為陽性，與LInuma等[5]報告的結(jié)果較為一致。因此，無論敏感性還是特異性，F(xiàn)Q-PCR法較涂片和培養(yǎng)法都有優(yōu)勢，應當列入MTB的常規(guī)檢驗項目。

結(jié)核桿菌培養(yǎng)仍是目前診斷MTB的金標準，尤其是藥敏實驗結(jié)果指導臨床用藥及耐藥性監(jiān)測等方面具有重要作用，涂片法和FQ-PCR都無法替代，但其耗時太長有待改進。我們建議將上述3種方法同時使用，涂片和FQ-PCR法可為臨床及時提供診斷依據(jù)，培養(yǎng)及藥敏結(jié)果可指導臨床用藥，F(xiàn)Q-PCR定量監(jiān)測TB-DNA可用于判斷療效。

[1]中國防癆協(xié)會.結(jié)核病診斷細菌學檢驗規(guī)程[J].中國防癆雜志,2006.

[2]金法祥.結(jié)核分枝桿菌實驗室診斷3種方法的初步評價[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，12：634～635.

[3]閏國蕊,臘勝明,楊建華,等.結(jié)核病五項實驗檢測方法的對比分析[J].中國防癆雜志,21：165～l66.

[4]Al Zahrani K,Al jahdali H,Poirier L,el al.Aceuracy utili～ofc0lnrnercilyavml～emcalionand ogict florthedi isofminit pllltT my tubel js[J].Am J Rcspir Cift Care Med,2000,l63:l323～1329.

[5]linuma Y,Ichiym～S,Yamori S,et a1.Dia0sticvueoftl1eAm—plio0rPcRas8ayf0_riniti～ di～ ismdassess～ ntof～ lncntre ef0rlJu1rrl('nnry1)ercu s[J].Mic～id hm～und,42:281～287.