退色瘧原蟲血片標本的不同復染法比較

丑莉莉

退色瘧原蟲血片標本的不同復染法比較

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目的探討已退色瘧原蟲血片復染的最佳方法。方法采用五種染色方法，用不同濃度的染液，不同的緩沖液及染色時間，進行對比實驗。結果瘧原蟲血片標本用傳統的單一染色法復染，效果均不佳。瑞氏與吉氏復合染色法，蟲體結構清晰著色均勻。結論瑞氏與吉氏復合染色法復染退色瘧原蟲血片可滿足教學重復利用。

瘧原蟲血片，退色，復染

瘧原蟲標本不易采集，而且長期保存的標本易退色。傳統的單一染色法存在某種缺陷：瑞氏染液染色法具有方法簡便，染色快速的優點，但保存的時間不長；吉氏染液染色法，不容易褪色，但細胞漿與中性顆粒著色較淡，顏色分辨不清楚。為使退色標本重復使用，滿足教學實驗課的要求，并制作出高質量的瘧原蟲標本，作者對退色的瘧原蟲標本進行復染，摸索出瑞氏與吉氏復合染色法復染方法，效果較佳。

1 材料

退色瘧原蟲血片，二甲苯，2%鹽酸酒精，磷酸緩沖液，美藍，吉氏染液，瑞氏染液，吉氏生理鹽水染液，瑞氏-吉氏復合液。

2 方法

2.1 各種染液配制

按文獻方法配制磷酸緩沖液、瑞氏染液、吉氏染液、吉氏生理鹽水染液和瑞氏-吉氏復合液［1］。

2.2 瘧原蟲血片的退色

2.2.1 清除污垢

先選薄血膜較完整的退色瘧原蟲標本片，將血片放入盛有二甲苯的染色缸1～2d，使膠溶解，蓋片脫落，然后取出血片，放入潔凈二甲苯染色缸中蘸洗幾次，用擦鏡紙擦凈，未加蓋片的舊血片，可直接投入二甲苯中2～3h除垢即可。

2.2.2 退色

將除去污垢的血片垂直浸入盛有2%鹽酸乙醇液的染色缸中，待血膜上原吉氏液顏色退凈后，用自來水沖洗10min晾干備用。

2.3 瘧原蟲血片的復染

2.3.1 吉氏（Giemsa）染液染色法 分別用pH6.8，pH7.2的磷酸緩沖液配制2%，3%，5%，10%的吉氏染液，在室溫約27℃下，將上述退色的血涂片分為十四組，用2%吉氏液分別染色30min、50min及1h,3%吉氏液分別染色30min和50min，5%、10%的吉氏染液各染色30min。用肉眼觀察染色情況，至顏色合適后用緩沖液沖洗，晾干鏡檢，結果顯示濃度為2%的吉氏染液染1h及3%吉氏染液染50min（緩沖液的pH為7.2）較其他各組好，但各期蟲體形態特征及顏色對比仍不能完全滿足教學，且有細胞粘連。而其他各組效果均不佳[2]。

2.3.2 吉氏（Giemsa）染液加美藍染色法 在上述方法下加適量美藍于吉氏染液中以復染舊片（即40ml吉氏染液原液加1g美藍，搖勻）。加適量美藍可使舊片血膜中顏色變淡的瘧原蟲胞質恢復原色，如此著色較佳。但染色時間不宜過長。結果顯示此法復染血片效果不如單純吉氏染液染色法。

2.3.3 吉氏生理鹽水染液染色法 取吉氏原液5～7ml加0.85%生理鹽水（中性的）至100ml，染色0.5～1h。此法可使白細胞及瘧原蟲著色更為鮮明，被寄生紅細胞的薛氏點和門氏點亦更清晰。此法初染效果較好，但復染效果不佳。

2.3.4 瑞氏與吉氏復合染色 在室溫約27℃下用瑞氏染液先染5～10min，然后用pH分別為6.8和7.2的吉氏原液、3%吉氏液、5%吉氏液、10%吉氏液各染10min，30min，50min。結果顯示用pH為7.2的緩沖液，濃度為10%的吉氏染液染色30min后蟲體形態結構清晰，效果較好，基本符合教學要求，缺點是顏色對比不非常鮮明。

2.3.5 瑞氏-吉氏復合液 在室溫約27℃下，用瑞氏-吉氏復合液各染10min，20min及30min。結果顯示：用此法染色20 min后各期蟲體形態特征清楚，結構清晰，此時紅細胞為淺紅色，瘧原蟲胞漿為蘭色，細胞核為紅色，胞漿里的瘧色素為棕褐色。適合教學實驗使用。

3 結果

我們采用5種方法，通過不同濃度，不同時間及pH值染色效果對比，在室溫約27℃下，用瑞氏-吉氏復合液染色20min效果較其他染色法效果好。由于瑞氏與吉氏復合染色實驗所用的瑞氏染液偏于酸性，吉氏染液用pH7.0～7.2的緩沖液所稀釋，略偏堿性，此時瑞氏染液和吉氏染液互相彌補了對細胞核和細胞質著色不足的缺陷，使蟲體結構清晰，著色均勻，顏色鮮明，易于觀察，適合教學實驗使用。該方法可以進行大批染制。

4 體會

復染片必須潔凈無油，而且血膜上原吉氏液顏色需完全退凈。染色時應根據瘧原蟲采集、使用時間的長短，染液的質量和配置的新舊、染液的稀釋度和進行染色時的氣溫高低選擇染色時間。一般說來，以染液稀釋的較淡，染色時間延長些，效果較為滿意。稀釋染液用的緩沖液以pH7.2為佳。如果染色過深，可以適當延長沖洗時間予以糾正。沖洗時宜將緩沖液滴加在復染片上，切忌先傾去染液，以免染液殘渣粘附其上，影響觀察。

［1］ 陳佩惠.人體寄生蟲學檢驗技術［M］.北京：科學出版社，1988：217.

［2］ 王唯唯.瘧原蟲薄片標本退色后的復染效果［J］.中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志, 2002 ，20（6）：324.

Objective To explore the best ways for redyeing biology specimen of plasmodium blood smear. Methods The plasmodium blood smears were redyed by fi ve different ways in different density, pH and time, Results Compared with traditional single dying method, compound staining of Wright-Giemsa was well done with plasmodium polypide pigmented and clear structure. Conclusion Compound staining of Wright-Giemsa can be carried out to perform teaching process satisfactorily.

Plasmodium blood smear;Fade; Redyeing

10.3969/j.issn.1009-4393.2010.32.102

132011 北華大學醫學檢驗學院（丑莉莉）