激光誘導(dǎo)熒光毛細(xì)管電泳法優(yōu)化隨機(jī)寡核苷酸文庫(kù)聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增的條件

摘 要 寡核苷酸文庫(kù)的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增是指數(shù)富集系統(tǒng)配基進(jìn)化技術(shù)（SELEX）篩選適配子技術(shù)中的重要步驟。本研究采用毛細(xì)管電泳技術(shù)結(jié)合激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器（CE-LIF），通過(guò)對(duì)雙鏈產(chǎn)物、PCR副產(chǎn)物以及剩余引物的考察，研究了寡核苷酸文庫(kù)PCR擴(kuò)增時(shí)的影響因素，并對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，隨機(jī)寡核苷酸文庫(kù)的擴(kuò)增與傳統(tǒng)均一模板的擴(kuò)增顯著不同，其在擴(kuò)增十幾個(gè)循環(huán)時(shí)產(chǎn)物就達(dá)到最大值；此外，初始模板數(shù)、退火溫度、DNA聚合酶濃度等條件也有所不同。因此， 在進(jìn)行SELEX篩選之前必須對(duì)文庫(kù)PCR條件進(jìn)行詳細(xì)優(yōu)化。本研究中N39文庫(kù)優(yōu)化后的PCR擴(kuò)增條件為：初始模板的量為105個(gè)分子，DNA聚合酶濃度0.05 U/μL，退火溫度70 ℃，18個(gè)循環(huán)。本研究為利用SELEX技術(shù)有效篩選適配子，降低篩選的假陽(yáng)性及提高特異性提供了參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞 毛細(xì)管電泳；指數(shù)富集系統(tǒng)配基進(jìn)化技術(shù)；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；寡核苷酸文庫(kù)； 適配子