超聲波輔助Urea-Free試劑結(jié)合熱變性快速酶解蛋白質(zhì)

摘 要 建立了一個(gè)超聲功率-超聲時(shí)間的安全區(qū)域，在此范圍內(nèi)進(jìn)行超聲波輔助酶解時(shí)，能避免超聲波隨機(jī)斷裂蛋白質(zhì)；在此安全區(qū)域內(nèi)采用響應(yīng)面法獲得最佳超聲功率和超聲時(shí)間。建立了超聲波輔助Urea-Free試劑結(jié)合熱變性快速酶解蛋白質(zhì)的方法，將蛋白質(zhì)依次進(jìn)行10 min超聲波浴輔助Urea-Free還原烷基化反應(yīng)、90 ℃熱變性15 min， 超聲波輔助胰蛋白酶酶解15 s。應(yīng)用此快速酶解方法鑒定3種典型標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)(牛血清白蛋白、細(xì)胞色素Ｃ和肌紅蛋白)，在25 min內(nèi)達(dá)到與傳統(tǒng)整夜酶解方法相同的鑒定結(jié)果，并獲得更高的序列覆蓋率。

關(guān)鍵詞 超聲波輔助； 熱變性； 蛋白質(zhì)； 酶解； 質(zhì)譜