HPLC法測定補腦丸中阿魏酸的含量

張 紅 唐志書 王海峰 陜西中醫學院(咸陽 712046)

補腦丸為部頒標準收載品種,主要由當歸、膽南星、枸杞子等十幾味中藥組成,其中當歸為方中君藥,當歸中主要含多種有機酸類化合物以及揮發油等。本試驗參考有關文獻,并經試驗摸索,建立高效液相色譜法測定本品中阿魏酸的含量,該方法分離效果較好,操作簡便,結果準確。

1 儀器與試藥 島津 LC-2010A型高效液相色譜儀 ,UV-VIS紫外-可見檢測器,阿魏酸對照品購自中國藥品生物制品檢定所(供含量測定用,批號:0773-9809);甲醇為色譜純試劑,水為重蒸水,其它試劑均為分析純。

2 色譜條件 色譜柱 Shim-pack VP-ODS柱(250mm× 4.6mm,0.45 μ m),甲醇:1% 醋酸 (20:80)為流動相;檢測波長為 320nm;流速 1mL/min;柱溫30℃。在選定色譜條件下,測得供試品中阿魏酸峰理論塔板數均大于 3000,與相鄰峰的分離度大于 1.5。

3 方法與結果

3.1 供試品溶液的制備 取本品 50丸,除糖衣,研碎,取 5g精密稱定,置 50mL具塞錐形瓶中,精密加 50%甲醇 25mL,稱定重量,超聲處理 40min,放冷后,再稱定重量,用 50%甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取適當的續濾液離心 25min,轉速為 3000轉 /min。取離心液 ,微孔濾膜(0.45 μ m)濾過,取續濾液,即得。

3.2 空白試驗 取對照品溶液、供試品溶液及空白對照溶液各 10 μL,依法測定,結果表明,空白樣品中無干擾。

3.3 線性范圍的考察 精密稱取阿魏酸對照品適量,用流動相配成濃度為 1.2mg/mL的溶液,然后用流動相分別稀 釋成 12 μ g/mL、 10 μ g/mL、 8 μ g/mL、6 μ g/mL、4 μ g/mL的系列對照品溶液 ,進樣 10 μL記錄色譜圖,測定峰面積,以所得的峰面積為橫坐標,以進樣量為縱坐標,在濃度為 40～ 120ng范圍內呈良好的線性關系。回歸方程 C=0.0046A+9.023,r=0.9999。

3.4 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液10 μL,重復進樣 5次,依法測定,計算,阿魏酸峰面積RSD=1.30%。

3.5 重現性試驗 分別精密稱取同一批號樣品5份,按供試品溶液的制備方法配制,依法測定,阿魏酸含量 RSD=1.58%。

3.6 穩定性試驗 精密稱取同一批號樣品 4.9352g,按供試品溶液的制備方法配制,分別在放置 0,1,2,4,8h,精密吸取 10 μL,注入液相色譜儀,依法測定,阿魏酸峰面積 RSD=0.95%,試驗結果表明,供試品溶液在 8h內穩定性良好。

3.7 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品(0.0404mg/g)的供試品共 6份,分別加入不同量的對照品溶液(0.1mg/mL)1.1mL、 1.1mL,0.9mL、0.9mL,1.3mL、1.3mL,依法測定,結果:阿魏酸回收率分別為:102.37,101.53,98.34,100.09,99.99和 99.27%,平均回收率為 100.26%,RSD為 1.29%.

3.8 樣品測定 按擬定的含量測定方法,對三批樣品中的阿魏酸依法測定,結果 3批樣品阿魏酸含量分別為 6.13,6.06,6.24 μ g/丸。

4 討 論 4.1本試驗根據文獻報道方法測定本品中阿魏酸的含量,但結果均不理想,后經反復試驗,以甲醇∶1%醋酸(20∶80)為流動相;采用 ODS柱;檢測波長為 320nm;流速 1ml/min;柱溫 30℃。結果樣品中阿魏酸峰獲得良好的分離,峰形對稱,重現性較好。

4.2 樣品處理方法簡單可行,陰性對照未見干擾,可用于控制補腦丸中阿魏酸的含量。

[1] 王 蘭.柏子養心丸中阿魏酸的含量測定.陜西中醫,2004,25(7)11:58.

[2] 蔣心惠.RP-HPLC測定普藏紅膠囊中阿魏酸的含量.華西藥學雜志,2001,16(4):374-375.