紅霉素藥物殘留檢測技術的研究進展

何方洋，郗日沫，萬宇平，馮才偉，羅曉琴 ，王建霞

（1.北京望爾康泰生物技術有限公司，北京 102206；2.南開大學藥學院，天津 300191）

1 紅霉素殘留危害及限量標準

紅霉素藥物屬大環內酯類抗生素，主要用于抗畜禽細菌及支原體感染，亦可作豬的飼料添加劑以促進增重和提高飼料轉換率，在畜禽、水產品養殖及其疾病治療過程中應用廣泛。但是紅霉素類化合物能對機體產生一些副作用，如胃腸道反應、膽汁郁積性黃疸以及靜滴時引起靜脈炎，還能引起壞死性肝病、精神障礙和關節炎綜合癥等，因此，紅霉素類藥物在生產上的大量使用會導致其在畜禽組織、蜂蜜、牛奶、魚蝦等產品中的殘留，危害公眾健康。目前農業部第235號文件中已規定，該藥物的最高殘留限量為 200μg/kg。

2 紅霉素殘留檢測方法研究進展

目前檢測紅霉素殘留量的方法主要有兩大類別：一種能夠同時進行分離、分析，具有高效分離技術和高檢測靈敏度，對紅霉素殘留情況進行定性、定量分析，主要包括液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）、薄層色譜法（TLC）、氣象色譜-質譜法（GC-MS）和液相色譜-質譜（HPLC-MS）聯用法等；另外一種是對紅霉素進行定性、半定量的生物學方法，該方法具有選擇性高、檢測限低的特點，主要有酶聯免疫分析法、微生物方法和放射性免疫法等。

2.1 高效液相色譜法 高效液相色譜法是目前廣泛應用的一種理化檢測方法，對于食品中有毒有害殘留物可進行精確定性及定量檢測。于慧娟等建立了高效液相色譜-熒光法對蝦組織中紅霉素殘留量的檢測，檢出限為150μg/kg，回收率≥75%?；菔|華等建立了以高效液相色譜法測定羅非魚中紅霉素殘留量的方法，提出了以乙腈為提取劑，經過液-液萃取、固相萃取、反萃取等步驟對樣品進行分離凈化的樣品處理方法，方法檢出限為400μg/kg。蔡友瓊等建立了高效液相色譜-電噴霧串聯質譜法測定水產品中紅霉素殘留量的方法，以紅霉素同位素標記物位內標，檢出限為 1.0μg/kg。

2.2 薄層色譜法 薄層色譜法是近年來發展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法，同時具備了柱色譜和紙色譜的優點，特別適用于揮發性較小或在較高溫度下易發生變化而不能用氣相色譜分析的物質。韓南銀等建立了薄層色譜法檢查蜂蜜中的殘留紅霉素藥物，利用固相萃取原理對蜂蜜中紅霉素進行提取，其檢測限量達到5mg/kg。因蜂蜜組成成分復雜，前處理比較麻煩，故采用薄層色譜法檢測可以排除許多干擾因素，取得良好的檢測結果。

2.3 氣相色譜-質譜法 氣相色譜-質譜聯用檢測法實現了高效層析分離和檢測聯機，可用微電腦控制層析條件、程序和數據處理，其特異性、靈敏度和重復性均較好，并可一次同時完成同一樣本中多種藥物及其代謝物的檢測。Stanley等通過液相色譜配電化學檢測器測定、電子噴霧電離質譜確證的方法測得紅霉素的回收率分別是（63.8±6.0）%和（75.5±5.4）%；Delepine等描述了采用PB/LC/MS方法檢測牛肌肉中5種大環內酯類抗生素的方法，其中采用梯度洗脫的反相液相色譜-MS檢測法證明在牛肌肉中有紅霉素、螺旋霉素、泰樂霉素、替米考星和交沙霉素的殘留。

2.4 液相色譜-質譜（HPLC-MS）聯用法 由于紅霉素藥物殘留樣本的復雜性以及畜禽、水產品存在基質干擾作用的影響，有時候僅僅使用HPLC很難精確檢測出殘留樣本中紅霉素藥物的含量。有研究建立了豬肉中紅霉素的高效液相色譜-電噴霧串聯質譜多殘留檢測方法，得出紅霉素檢測限為0.05μg/kg。其中，豬肉樣品用乙腈提取，經正己烷脫脂，C18固相萃取柱凈化，4%氨甲醇洗脫，氮氣吹干，50%乙腈溶解后上機檢測，采用多反應監測模式進行定性和定量分析；在豬肉中添加 50μg/kg、100μg/kg、200μg/kg三個濃度水平，紅霉素藥物的回收率、批內變異系數及批間變異系數分別為：66.4%～77.6%、2.4%～10.5%、7.4%～12.1%。

本方法靈敏、可靠，前處理過程簡單易行，檢測限低，準確度和精密度都滿足殘留檢測的要求。

2.5 微生物檢測法 采用微生物檢測方法測定畜禽及水產品中紅霉素藥物的殘留情況，該方法是應用較為廣泛的方法，如紙片法、TTC法等，因其測定原理是基于抗生素對微生物的生理機能、代謝的抑制作用，因而與臨床應用的要求一致，缺點是測定時間長且檢測結果的誤差較大。杯碟法是目前我國食品衛生標準中規定的檢查蜂蜜中紅霉素殘留量的測定方法（GB/T18932.8-2002）。

2.6 酶聯免疫分析法 酶聯免疫分析法是基于抗原和抗體特異性反應而建立的，該方法有兩個特點：一是抗原抗體免疫反應在固體表面進行，二是用酶作為標記物進行蛋白質測定。其中酶反應的催化效應起到放大反應效果的作用，從而提高ELISA檢測技術的靈敏度。酶聯免疫分析法已較多地應用于動物源性食品中各類抗生素殘留的定性和定量測定，在水產品抗生素殘留檢測領域也有所應用。北京望爾康泰生物技術有限公司等在2008年申請了“一種檢測紅霉素類化合物的方法及其專用酶聯免疫試劑盒”發明專利。該發明公開了一種檢測紅霉素類化合物的方法及其專用酶聯免疫試劑盒，試劑盒包括紅霉素特異性抗體及包被原和酶標記物；該發明的酶聯免疫試劑盒結構簡單、使用方便、價格便宜、攜帶便利，檢測方法高效、準確、簡便，能夠進行現場監控且適合大量樣本的定性和定量篩查，將在紅霉素的檢測中發揮重要作用。

近年來ELISA試劑盒檢測方法在畜禽產品、水產品的藥物殘留檢測工作中發揮了極其重要的作用，已發展成為一種應用最為廣泛和成熟度較高的生物檢測與分析技術。酶聯免疫檢測技術將酶聯免疫反應與生物技術相結合用于對食品中藥物殘留的檢測，常以ELISA檢測試劑盒的形式出現并且商品化，現已逐漸發展成為紅霉素藥物殘留含量檢測中最實用的檢測技術之一。

3 結語

紅霉素藥物殘留檢測分析技術中，高效液相色譜法（HPLC）和酶聯免疫測定（ELISA）方法是目前應用較為廣泛并且相互補充的兩種方法。HPLC，尤其是HPLC-MS聯用技術，具有很高的檢測靈敏度、高分離效率和高準確度，但實際檢測工作中需要配備相應的大型檢測儀器支持，且檢測成本較高，主要適用于畜禽產品（如畜禽組織、蜂蜜、牛奶等樣本）、水產品（魚蝦等）樣本中紅霉素藥物殘留的精確定量檢測。而ELISA檢測方法具有快速、靈敏、方便、檢測成本較低等特點，但檢測結果的準確度相對儀器檢測方法較不精確，側重在臨時大規模排查、檢測單位常規抽檢等工作中對紅霉素藥物的定性及半定量檢測。建立以酶聯免疫吸附法（ELISA）為輔的“篩選法”和液相色譜（HPLC）、氣相色譜-質譜（GC-MS）等儀器為“確證法”的多方法相結合的殘留檢測體系進行紅霉素殘留檢測，對于保障食品安全和人民群眾身心健康尤為重要。

[1]惠蕓華，于慧娟，姜朝軍，等，水產品中紅霉素殘留分析的現狀[J].安徽農業科學，2009，37（2）：795-796.

[2]于慧娟，沈曉盛，李 慶，等.高效液相色譜-熒光法測定對蝦組織中紅霉素的殘留量 [J].分析試驗室，2006，25（4）：82-84.

[3]惠蕓華，于慧娟，蔡友瓊，等.羅非魚中紅霉素殘留量的高效液相色譜法測定[J].海洋漁業，2006，28（4）：321-325.

[4]于慧娟，蔡友瓊，惠蕓華，等.高效液相色譜-電噴霧串聯質譜法測定水產品中紅霉素的殘留[J].分析化學研究簡報，2009，37（1）：91-94.

[5]韓南銀，周 婷.蜂蜜中紅霉素殘留量的檢測[J].食品科學，2003，24（2）：118-120.

[6]Biledeeau S M，Heinze T M，Shtonen P H.Liquid chromalography analysis of erythromycin in salmon tissue by electrachemical detection with confirmation by electrospray ionization mass spectrometry[J].Agric.Food Chem.，2003，51（6）：1534-1538.

[7]Delepine B，Hurtaud P D，Sanders P.Multiresidue method for confimation of macrolide antibiotics in bovine muscle by liquid chromatography/mass spectrometry[J].AOAC lnt.，1996，79（2）：397-404.

[8]趙東豪.HPLC-MS/MS法測定豬肉中大環內酯類抗生素殘留的研究[D].華南農業大學-基礎獸醫學碩士論文，2008.

[9]趙慧明，江秀明，林賢福.水產品體內抗生素殘留分析研究現狀[J].水產科學，2004，23（8）：40-41.