降乳散對雌激素誘發大鼠催乳素瘤防治作用

王 暉，徐 春

長時間給予雌激素可以導致大鼠垂體PRL細胞增生，PRL分泌增加，最后形成PRL瘤。E誘發大鼠垂體PRL瘤模型對研究PRL瘤形成機理和尋求有效的治療措施具有重要意義。筆者秉用17-β雌二醇皮下植入，同時用中藥降乳散灌胃，研究降乳散對雌激素誘發大鼠PRL瘤的防治作用。

1 材料和方法

1.1 材料 動物：雌性Wistar大鼠由解放軍總醫院實驗動物中心提供。在控光鼠房中分籠飼養，溫度18～20℃，濕度43%，食用標準飼料，飲瓶裝自來水。降乳散組成：柴胡15 g，郁金5 g，白芍 15 g，夏枯草15 g，生麥芽30 g，川牛滕15 g，香附30 g，當歸15 g，仙靈脾10 g，巴戟10 g，元胡10 g，浙貝10 g。 大鼠PRL抗原、標準品和一抗，由美國NIDDK的Dr.Parlow惠贈。

1.2 方法

1.2.1 大鼠PRL瘤模型的制備 24只成年雌性Wistar大鼠，體重120～150 g，腹腔內注射10%水合氯醛50～80 mg/kg麻醉，常規消毒，于背部腰椎兩側做長約2～3 cm的縱形切口，暴露腹腔，結扎子宮，切除卵巢，并逐層縫合。于其背部中線尾骨上約3 cm偏左處做一約1 cm長縱形切口，游離皮下組織，將一含有17β-雌二醇10 mg的硅膠管 （長20 mm，內徑1.5 mm，外徑2.41 mm)或空白硅膠管植入皮下。全部動物隨機分3組，每組8只。①對照組（C組），皮下植入空白硅膠管；②雌激素組（E組）：皮下植入含有雌激素的硅膠管；③降乳散組（J組），皮下植入雌激素硅膠管的同時，用降乳散湯劑灌胃（15 mg/kg·d）。用藥第8周處死動物。乙醚麻醉大鼠后，于心臟穿刺取血，分離血清于-70℃保存，打開顱骨，翻開腦組織，摘下垂體，稱重后將1/2凍于液氮中，1/2放于4%多聚甲醛中固定。

1.2.2 血清PRL水平的放免測定 靈敏度：0.312 ng/ml，批內CV 4.5%，批間CV 10.5%。

1.2.3 組織學及免疫組織化學觀察 垂體組織在4%多聚甲醛中固定，石臘包埋、切片后行HE染色.部分切片采用免疫組化方法顯示垂體組織PRL蛋白的表達和分布。

1.2.4 統計學處理 實驗結果求出均數±標準差，組間比較采用t檢驗。

2 結 果

2.1 各組大鼠垂體重量 E組垂體重量為 （78.6±8.4）mg，明顯高于C組的（13.4±0.9）mg（P<0.01），J組的（20.2±2.4）mg（P<0.01）。J組與C組亦存在顯著性差異（P<0.01）。

2.2 各組大鼠血清PRL水平 E組大鼠血清PRL為（4226.3±446.9）ng/ml，明顯高于 C組的（16.2±5.6）mg（P<0.01）；J組大鼠血清 PRL的水平為（526.7±43.6）ng/ml，顯著低于E組（P<0.01），但明顯高于C組（P<0.01）。

2.3 各組大鼠垂體組織學的改變 在HE染色下，C組垂體細胞呈圓形，胞漿少，胞核大小一致，血竇形態規則，分布均勻。E組細胞數目明顯增加，細胞呈圓形或多角形，胞體增大，胞漿帶增寬，細胞分化差，核大小不一致，可見大核細胞，有核異型性，血竇數目減少，分布不均，形態不規則，均被增生的細胞擠壓變形。J組出現細胞異常增生，部分區域可見形態分布正常的血竇。

2.4 各組大鼠垂體PRL免疫組織化學的改變 每200倍視野隨機數5個小格的陽性細胞 （壓上線和左線的細胞計數，壓下線和右線的細胞不計數），每組數5個切片，取其平均值。C組PRL陽性細胞散在分布，平均為（1.4±1.1）個/格，E組的陽性細胞廣泛存在并且分布密集，平均（20.6±2.4）個/格，明顯高于C組（P<0.01）；J組的陽性細胞數為（16.0±1.6）個/格明顯低于E組（P<0.05）而高于C組（P<0.01）。

3 討 論

在雌激素作用下，大鼠出現高PRL血癥和PRL細胞增生，作用8周后，E組垂體平均重量為（78.6±8.4）mg，根據Welsch等判斷垂體PRL瘤的標準50 mg[1]，此組已成功的誘發出PRL瘤。E誘發大鼠PRL模型的諸多研究，盡管在動物型別和用藥方法方面各有不同，但均得出同樣的結論[1-3]，說明雌激素具有刺激PRL基因表達和PRL細胞增生的作用。一例長期服用E的換性者（男性→女性）發生垂體PRL瘤，瘤組織表達豐富的雌激素受體ER和較低的多巴胺受體[4]，此例PRL瘤的發生是偶然，還是由于E直接作用或通過介導其它機制如生長因子、癌基因的激活、抑制癌基因的抑制或其它異常基因的作用，尚不清楚，但是，此病例提示E刺激在內分泌腫瘤的發生中起一定的作用。

中醫理論認為高PRL血癥屬肝淤腎虛，根據辨證調理原則解放軍總醫院中醫科楊明會主任醫師配制成的降乳散，由柴胡、白芍、當歸、仙靈脾、穿山甲、郁金、夏枯草等15味中藥組成，臨床用于治療高PRL血癥有效。筆者將此中藥用于雌激素誘發的大鼠PRL瘤，發現其具有降低血清PRL和垂體重量的作用。中藥降乳散的治療法則為舒肝解淤，補腎健脾。至于其降低PRL的機制還有待進一步研究。

本文結果顯示，J組的垂體重量、血清PRL水平和PRL陽性細胞計數均明顯高于C組，提示降乳散對雌激素刺激的PRL過渡分泌僅能起部分抑制作用。光鏡下J組出現明顯的細胞增生，胞漿增寬，血竇擠壓變形及核異型性等改變，這些均說明降乳散不能完全阻止E誘導的大鼠PRL瘤的形成和發展。中藥的劑量不足可能是原因之一，本組用藥劑量根據人的治療劑量換算成的大鼠用量，設計方案中沒有關于降乳散劑量逐漸增加的觀察。

總之，在皮下植入雌激素誘發PRL瘤的同時，用中藥降乳散給大鼠灌胃，能夠明顯降低大鼠血清PRL的水平及垂體的重量，提示其對雌激素誘發的PRL瘤具有一定的防治作用。

[1]Welsch CW，Jenklins T，Amenomori Y，et al.Tumorous development of in situ and grafted anterior pituitary in female rats treated with diethylstilbestrol.Experimentia，1979，27:1350-1352.

[2]許榮琨，郭傳海，黃曼影，等.17β-雌二醇誘發大鼠垂體PRL瘤的形成和原癌基因c-myc的表達.基礎醫學與臨床，1993，13:29-32.

[3]薛毅龍，段國升，張燦遠.雌酮誘發大鼠垂體腺瘤動物模型.中華實驗外科雜志，1992，9:136.

[4]Kovacs K，Stefaneanu L，Ezzat S，et al.Prolactin-producing pituitary adenoma in a male-to-female transsexual patient with protracted estrogen administration.A morphologic study.Arch Pathol Lab Med，1994，118(5):562.