沙利度胺對伊立替康及其代謝物SN-38在大鼠體內藥動學的影響Δ

史愛欣，胡艷玲，胡 欣

（衛生部北京醫院藥學部，北京市 100730）

伊立替康（CPT-11）為選擇性拓撲異構酶Ⅰ抑制劑，用于治療轉移性結腸直腸癌復發和惡化，也可單用或與其它藥物聯合用于小細胞肺癌、非小細胞肺癌等其他腫瘤的治療。遲發型腹瀉是影響伊立替康應用的最重要的不良反應之一，伊立替康的體內活性代謝產物SN-38的濃度與伊立替康引起的遲發型腹瀉有很大相關性[1～3]，一般認為SN-38可引起腸道黏膜損害，導致腸道內離子轉運異常，向腸腔分泌水和電解質過多而引發遲發型腹瀉。因此，控制SN-38的濃度成為減輕腸毒性的新研究方向。沙利度胺具有抗血管形成、免疫調節和抗腫瘤作用，小規模臨床試驗證實沙利度胺可以減輕伊立替康的腸毒性[4，5]。本研究以SD♂大鼠為受試對象，考察伊立替康聯用沙利度胺后對伊立替康及SN-38體內藥動學的影響，為臨床減輕伊立替康的腸毒性及促進其合理用藥提供參考。

1 材料

1.1 試藥

伊立替康對照品（批號：160711012，純度：＞98%）、SN-38對照品（批號：20071024，純度：＞99%）均由江蘇恒瑞制藥公司提供；內標苯磺貝他斯汀對照品（天津田邊制藥有限公司提供，批號：06-02，純度：＞99.0%）；鹽酸伊立替康注射液（英國安萬特公司，商品名：開普拓，批號：D6D261，規格：100 mg·5 mL－1）；沙利度胺片（常州制藥廠有限公司，批號：0710081，規格：每片25 mg）；乙腈、甲醇均為色譜純；乙酸、醋酸銨、甲酸、甲酸銨均為質譜級；二甲亞砜為分析純；水為超純水。

1.2 儀器

2795型高效液相色譜系統、Quattro Premier串聯質譜（MS）檢測器（美國Waters公司）；D-37520 Biofuge高速離心機（德國Kendro公司）；LDZ5-2型離心機（北京醫用離心機廠）；AT201十萬分之一分析天平（瑞士METTLER-TOLEDO公司）。

1.3 動物

SD♂大鼠，體質量220～250 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，實驗動物許可證編號：SCXK（京）2007-0001。實驗前禁食12 h，不禁水。

2 方法與結果

2.1 伊立替康及SN-38血藥濃度測定方法學考察

2.1.1 建立LC-MS/MS法測定大鼠血漿中伊立替康及SN-38濃度的LC-MS條件，詳見文獻[6]。

2.1.2 溶液的制備。伊立替康對照品溶液：精密稱取伊立替康對照品適量，置于50 mL棕色容量瓶中，加入適量甲醇使其完全溶解，用甲醇定容，即得200 μg·mL－1的伊立替康貯備液。

SN-38對照品溶液：精密稱取SN-38對照品適量，置于50 mL棕色容量瓶中，加入二甲基亞砜30 mL使其完全溶解，用甲醇定容，即得200 μg·mL－1的SN-38貯備液。

內標溶液：精密稱取苯磺貝他斯汀對照品適量，置于100 mL棕色容量瓶中，滴加適量甲醇使其完全溶解，用純水定容，即得100 μg·mL－1的內標貯備液。以上所有溶液于4℃避光保存，并于臨用前取出放至室溫。

沙利度胺溶液：取適量沙利度胺片，置于研缽中研碎，混勻，精密稱取適量，置于50 mL容量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，震蕩搖勻，即得10 mg·mL－1的溶液，靜置。

2.1.3 方法專屬性。采用固相萃取方法進行樣品預處理。在本試驗條件下，血漿樣品中藥物與基質中的其它組分得到良好分離，不受內源性物質的干擾。空白血漿、空白血漿+伊立替康（1000 ng·mL－1）+SN-38（50 ng·mL－1）+內標和大鼠尾靜脈注射伊立替康（10 mg·kg－1）及沙利度胺+伊立替康（10 mg·kg－1）4 h后血漿樣品的LC-MS/MS圖見圖1。

2.1.4 線性關系、精密度、準確度、回收率、穩定性、基質效應及過程有效率、樣品稀釋誤差考察[6]。血漿中伊立替康和SN-38的線性回歸方程（Y：樣品與內標的峰面積之比，C：樣品濃度）分別為Y＝0.4540C+0.1972（r＝0.9996）；Y＝0.0030C+0.0011（r＝0.9999）。伊立替康及SN-38線性范圍分別為1～2000、0.5～100 ng·mL－1，定量下限分別為1、0.5 ng·mL－1。批內精密度分別為4.6%～6.4%、3.5%～4.9%，批間精密度分別為5.9%～6.7%、5.8%～8.1%；相對回收率分別為（96.09±2.96）%～（100.57±4.54）%、（98.04±3.43）%～（100.84±4.35）%。伊立替康及SN-38血漿處理后在4℃樣品室中至少能穩定放置24 h，RSD分別為4.11%、4.62%；在室溫環境下至少能穩定放置1.5 h，RSD分別為2.83%、3.29%；在－70℃冰凍環境下至少能穩定放置30 d，RSD分別為2.66%、2.47%；在反復凍融3次后仍保持穩定，RSD分別為2.35%和3.53%。伊立替康、SN-38和內標的基質效應均接近100%，RSD分別＜1.6%、＜4.7%、＜2.5%。伊立替康稀釋5倍的準確度與精密度分別為99.06%、2.25%，稀釋10倍后分別為99.00%、3.29%；SN-38稀釋5倍的準確度與精密度分別為100.08%、0.75%，稀釋10倍后分別為99.83%、0.66%。表明樣品經空白血漿稀釋后不影響測定準確度和精密度。

2.2 給藥方法

實驗分為伊立替康10、20 mg·kg－12個劑量組；每一劑量組均設1個對照組。實驗組為伊立替康與沙利度胺聯用，對照組單用伊立替康。實驗組先腹腔注射沙利度胺藥液20 mg·kg－1，0.5 h后尾靜脈注射伊立替康注射液；對照組先腹腔注射與沙利度胺藥液同體積的二甲亞砜，0.5 h后尾靜脈注射伊立替康注射液。于給藥前和給藥后0.083、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10、12 h頸靜脈插管采血1 mL，置于肝素化抗凝試管中，3000 r·min－1離心5 min，分離血漿，于－70 ℃冰箱中保存待測。

2.3 血藥濃度數據結果

各組給藥后伊立替康、SN-38血藥濃度均值-時間曲線見圖2。

由圖2A可見，2個劑量的伊立替康與沙利度胺合用后伊立替康血藥濃度及AUC0～t均明顯高于單用伊立替康；由圖2B可見，伊立替康（10 mg·kg－1）劑量組與沙利度胺合用后與單用伊立替康組比較，SN-38血藥濃度-時間曲線變化不明顯，而伊立替康（20 mg·kg－1）劑量組與沙利度胺合用后SN-38血藥濃度、AUC0～t明顯低于單用伊立替康組。

圖1 LC-MS/MS圖Ⅰ-A、Ⅱ-A、Ⅲ-A.空白血漿；Ⅰ-B、Ⅱ-B、Ⅲ-B.空白血漿+伊立替康+SN-38+內標；Ⅰ-C、Ⅱ-C、Ⅲ-C.大鼠尾靜脈注射伊立替康后4 h血樣；Ⅰ-D、Ⅱ-D、Ⅲ-D.大鼠尾靜脈注射沙利度胺+伊立替康后4 h血樣；Ⅰ.伊立替康；Ⅱ.SN-38；Ⅲ.內標Fig 1 LC-MS/MS chromatogramsⅠ-A，Ⅱ-A，Ⅲ-A.blank plasma；Ⅰ-B，Ⅱ-B，Ⅲ-B.blank plasma+irinotecan+SN-38+internal standard；Ⅰ-C，Ⅱ-C，Ⅲ-C.blood sample of rats at 4 h after administration of irinotecan via tail vein；Ⅰ-D，Ⅱ-D，Ⅲ-D.blood sample of rats at 4 h after administration of thalidomide+irinotecan via tail vein；Ⅰ.irinotecan；Ⅱ.SN-38；Ⅲ.internal standard

2.4 藥動學參數分析結果

血藥濃度數據經DASver2.0軟件擬合計算，比較實驗組和對照組的藥動學參數，結果見表1及表2。

2.5 統計分析

采用SPSS13.0軟件，對主要的藥動學參數AUC0～t、AUC0～∞、Cmax及t1/2進行統計分析。統計分析結果見表3。

圖2 各組給藥后伊立替康、SN-38血藥濃度均值-時間曲線A.伊立替康；B.SN-38Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of irinotecan and SN-38 of those groups after medicationA.irinotecan；B.SN-38

表1 伊立替康10 mg·kg－1劑量給藥后伊立替康及SN-38的藥動學參數Tab 1 Pharmacokinetic parameters of irinotecan and SN-38 in rats after administration of 10 mg·kg－1irinotecan

表2 伊立替康20 mg·kg－1劑量給藥后伊立替康及SN-38的藥動學參數Tab 2 Pharmacokinetic parameters of irinotecan and SN-38 in rats after administration of 20 mg·kg－1irinotecan

表3 伊立替康及SN-38主要藥動學參數的統計分析結果（P值）Tab 3 Analysis of main pharmacokinetic parameters of irinotecan and SN-38（P value）

由表1、表2、表3可知，聯用沙利度胺后，與單用伊立替康比較，伊立替康10 mg·kg－1劑量組中其 AUC0～t、AUC0～∞、Cmax顯著增加（P＜0.05），t1/2縮短，但無統計學意義；20 mg·kg－1劑量組中Cmax顯著增加（P＜0.05），AUC0～t及AUC0～∞雖有增加，但無統計學意義；對于SN-38，與對照組比較，2個實驗組的AUC0～t、AUC0～∞均顯著減少（P＜0.05），20 mg·kg－1劑量實驗組的Cmax顯著降低（P＜0.05），這說明沙利度胺可以增加伊立替康的AUC0～t同時減少SN-38的AUC0～t及Cmax。

3 討論

伊立替康為前體藥物，在體內經過羧酸酯酶轉化為活性代謝物SN-38，后者活性較伊立替康強100～1000倍。SN-38經肝臟尿苷二磷酸葡醛酰轉移酶（UGT）滅活，生成葡萄糖醛酸化SN-38（SN-38G）。SN-38G經腸道細菌產生的β-葡萄糖醛酸酶作用轉化為SN-38，造成腸道黏膜損害，導致遲發型腹瀉的發生[1～3]。腸道內SN-38可造成腸道結構和功能的損害，造成腸道黏膜受損，引起腸道內離子轉運異常，導致向腸腔分泌水和電解質過多而引發遲發型腹瀉。

本實驗以大鼠為對象，研究了聯用沙利度胺時伊立替康的藥動學特征，擬合得到大鼠體內伊立替康和SN-38的藥動學參數。迄今為止國內未見聯用沙利度胺對伊立替康的藥動學影響的研究報道。

聯用沙利度胺后，在增加伊立替康的AUC0～t同時減少SN-38 的 AUC0～t及 Cmax，此結果與國外文獻結果相似[4，7]：國外文獻中，伊立替康合用沙利度胺后，其AUC0～t、AUC0～∞分別增加 32.50%、39.02%，同時 SN-38 的 AUC0～t、AUC0～∞下降了24%、42%。說明沙利度胺與伊立替康合用后改變了伊立替康及其代謝物SN-38的藥動學特征。

本研究結果從藥動學方面解釋了沙利度胺能減輕伊立替康致遲發型腹瀉的作用機制，為進一步減輕伊立替康的腸毒性及促進其合理用藥提供參考和數據支持。

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