高蛋白飲食對犬體內司帕沙星藥動學的影響

康紀平，何海霞，李秋波，馮曉科（.四川省養麝研究所，都江堰市 6830；2.重慶醫科大學附屬第一醫院臨床藥理研究室，重慶市 40006）

司帕沙星（Sparfloxacin，SPFX）是第3代氟喹諾酮類廣譜抗菌藥，已在臨床廣泛應用，其具有口服吸收良好、組織分布廣、血漿蛋白結合率低、消除t1/2長等藥動學特點。文獻[1]報道，進食幾乎不影響其吸收，但高蛋白飲食是否對其吸收等有影響未見文獻報道，為此，本研究將探討高蛋白飲食是否影響SPFX在Beagle犬體內的藥動學參數，以為該藥的合理用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 試藥

SPFX片（河南帥克制藥有限公司，批號：20081201，規格：每片0.1 g）；SPFX對照品（重慶蕓峰藥業有限公司，批號：030612，純度：99.1%；使用時精確稱取SPFX 20 mg，置于50 mL容量瓶中，用適量甲醇溶解，加甲醇至刻度，即為400 μg·mL－1的SPFX標準貯備液，備用；再用雙蒸水稀釋為400 ng·mL－1的工作濃度備用）；內標諾氟沙星（NF，山西博達制藥有限公司，純度：99.0%。使用時精密稱取NF對照品10 mg，置于50 mL容量瓶中，用適量雙蒸水溶解，加雙蒸水至刻度，混勻，即為200 μg·mL－1的NF標準貯備液；再用雙蒸水稀釋為20 μg·mL－1的工作濃度）；乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純；高蛋白飲食為雀巢奶粉。

1.2 動物

健康合格Beagle犬8只，♀♂各半，體質量10 kg左右，由四川養麝研究所提供。實驗動物合格證為：川實動管質第63號，環境設施合格證號為：川實動管第64號。

1.3 儀器

1100系列高效液相色譜（HPLC）儀，包括1100泵系統、可調波長紫外檢測器和1100工作站（美國Agilent公司）。

1.4 分組及給藥

選取犬8只，♀♂各半，隨機分為SPFX空腹組和合用高蛋白飲食組，即分別為空腹組與高蛋白飲食組，每組4只。犬于實驗前禁食12 h，實驗開始時，高蛋白飲食組供給牛奶每只200 g，同時給予SPFX 10 mg·kg－1[2]；空腹組僅給予SPFX 10 mg·kg－1和水（每只200 mL），然后送回籠中，8 h后統一進食。各組于給藥后1、2、3、4、5、6、8、12、24、48 h經大隱靜脈采血3 mL，分離血漿，－20℃保存，待測。2周后2組交叉實驗，取血樣時間等均同前。

1.5 血藥濃度測定

1.5.1 色譜條件。色譜柱：Hypersil C18（200 mm×5.0 mm，5 μm）；固定進樣環：100 μL；流動相：甲醇-0.008 mol·L－1磷酸鹽緩沖液-0.5 mol·L－1四丁基溴化銨＝25∶75∶4；流速：1.0 mL·min－1；紫外檢測波長：292 nm；柱溫：室溫；內標：NF。

1.5.2 樣品處理。參照文獻[2]，取1.0 mL犬血漿樣品，加入NF 0.1 mL（20 μg·mL－1）、0.05 mol·L－1NaOH 0.1 mL 和 4 mL CHCl2，旋搖1 min，3000 r·min－1離心2 min，去有機層，置于40℃水浴中，氮氣吹干。取0.1 mL流動相復溶，進樣50μL。

1.5.3 方法學研究。（1）色譜行為：在本實驗所采用的色譜條件下，取SPFX+NF對照品溶液、空白血漿、空白血漿+SPFX+NF、犬服藥后2 h血漿+NF進樣分析，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.SPFX+NF對照品；B.空白血漿；C.空白血漿+SPFX+NF；D.犬服藥后2 h血漿+NF；1.NF；2.SPFXFig 1 HPLC chromatographyA.SPFX+NF control；B.blank plasma；C.blank plasma+SPFX+NF；D.plasma 2 h after administration+NF；1.NF；2.SPFX

由圖1可見，血漿中SPFX的tR為7.6 min左右，內標NF的tR為4.5 min左右。SPFX和NF峰形良好，且不受血漿內源性物質的干擾。

（2）標準曲線、線性關系與最低定量濃度：在空白血漿中分別添加SPFX使血藥濃度相當于4.0000、2.0000、1.0000、0.5000、0.2500、0.1250、0.0625、0.03125 μg·mL－1，按“樣品處理”項下操作，將所得數據SPFX峰面積/NF峰面積比Y與SPFX濃度X進行回歸，得標準曲線方程為Y＝3.5307X－0.1346（r＝0.9994，n＝5）。結果，SPFX檢測濃度線性范圍為0.03125～4.0000 μg·mL－1，最低定量濃度為0.03125 μg·mL－1（RSD＝15.66%，n＝5）。

（3）精密度和重復性：取高、中、低3種質控樣本（4.0000、0.5000、0.0625 μg·mL－1），每個濃度5份，考察批內和批間變異。批內誤差（每個濃度同日內測定5次）、日內變異性結果及批間誤差（每個濃度連續測5 d，每天測1次）、日間變異性結果見表1。

表1 精密度及重復性試驗結果（n＝5）Tab 1 Results of precision and repeatability（n＝5）

（4）回收率：取高、中、低3種質控樣本（4.0000、0.5000、0.0625 μg·mL－1），每個濃度5份，按規定方法評價本法的回收率。結果高、中、低濃度的回收率分別為（101.11±5.43）%、（99.34±3.58）%、（105.28±5.35）%。

（5）凍融穩定性考察：將含藥血漿反復冷凍（－20℃）、融化，按“樣品處理”項下方法處理及測定，5周內測定5次。結果表明，血漿樣品在5周內經反復凍融，穩定性良好，RSD＝6.15%。

1.6 數據處理

采用中國藥理數理學會編制的3p97計算機軟件，計算各個體的藥動學參數。數據以表示，組間行t檢驗。

2 結果

2.1 藥-時曲線

空腹組與高蛋白飲食組SPFX的平均血藥濃度-時間曲線見圖2。

圖2 2組平均血藥濃度-時間曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of 2 groups

2.2 藥動學參數

受試犬血藥濃度-時間數據采用計算機3p97程序自動擬合，空腹組與高蛋白飲食組的口服吸收過程分別符合二室、一室模型。求得有關藥動學參數見表2。

表2 2組藥動學參數比較（，n＝8）Tab 2 Comparison of pharmacokinetic parameters between 2 groups（，n＝8）

表2 2組藥動學參數比較（，n＝8）Tab 2 Comparison of pharmacokinetic parameters between 2 groups（，n＝8）

與空腹組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.fasting group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

由表2可見，高蛋白飲食組與空腹組比較，lag time、tmax延長（P＜0.01），t1/2β/t1/2ke降低，Cmax無顯著性差異，AUC（0～t）增加。

3 討論

目前對SPFX的血藥濃度檢測幾乎均選HPLC法測定，但測定條件如流動相等各有不同。在本研究中，筆者選用甲醇和磷酸鹽緩沖液，同時加入四丁基溴化銨作為流動相，結果表明檢測結果較好、方法簡單、重現性好、保留時間恰當。原因是SPFX結構中同時具有芳胺和芳酸結構，整體呈現酸性，如果采用三乙胺和磷酸鹽組成緩沖液與甲醇混合可致SPFX的保留時間過短，不能使藥物與有關雜質峰充分分離，而加入離子對四丁基溴化銨可使SPFX保留時間延長1倍以上，保證藥物與雜質充分分離。

文獻[1]報道，進食對SPFX的吸收幾乎無影響。本研究結果表明，合用高蛋白飲食后，與空腹相比較lag time延長，導致吸收滯后，故tmax也延長。雖然高蛋白飲食可推遲藥物的tmax，并可加速藥物自體內的排出，提高了AUC（0～t）值，但Cmax間比較無顯著性差異。

總的來說，高蛋白飲食可延緩SPFX的吸收速度，但可增加吸收量，加快其排出速度，可明顯影響司帕沙星藥動學。該作用是否因高蛋白與SPFX間形成一定的復合物而減慢吸收，促進其排泄引起，尚待進一步研究。

[1]杜黎明，衛洪清，郜 艷，等.反相高效液相色譜法測定人尿中的司帕沙星[J].分析化學，2001，29（9）：1108.

[2]張 斌，汪華蓉，康紀平，等.脂質飲食對加替沙星藥動學的影響[J].中國藥房，2008，19（25）：1952.