千斤腦康寧膠囊治療脾腎兩虛、腦髓不足之癡呆藥效學研究

劉 元， 李星宇， 宋志釗， 李友娣， 何 飛

（廣西中醫藥研究院，廣西南寧 530022）

千斤腦康寧膠囊治療脾腎兩虛、腦髓不足之癡呆藥效學研究

劉 元， 李星宇， 宋志釗， 李友娣， 何 飛

（廣西中醫藥研究院，廣西南寧 530022）

千斤腦康寧膠囊；大鼠、小鼠癡呆模型；抗急性腦缺氧；陽虛、脾虛模型

目的：觀察千斤腦康寧膠囊的治療脾腎兩虛、腦髓不足之癡呆藥效學作用。方法：采用三氧化鋁致大鼠、小鼠癡呆、30%乙醇致小鼠記憶再現障礙、斷頭致小鼠急性腦缺氧、氫化可的松致小鼠陽虛及利血平致小鼠脾虛等模型，觀察千斤腦康寧膠囊的治療老年癡呆藥效學作用。結果：千斤腦康寧膠囊能明顯增強癡呆模型大鼠、小鼠及記憶再現障礙小鼠的學習記憶能力；明顯延長急性腦缺氧小鼠大腦存活時間；并能明顯增強陽虛、脾虛模型小鼠體質。結論：千斤腦康寧膠囊具有抗癡呆、抗急性腦缺氧、增強陽虛、脾虛模型小鼠體質作用。

千斤腦康寧膠囊是我研究院根據廣西地方民族經驗方，經篩選后進行研制的中草藥制劑，主要由千斤拔、扶芳藤、鹿角膠、山萸肉等中藥組成，具有補腎益脾，活血化痰，健腦生髓之功效，對脾腎兩虛，痰瘀阻絡，腦髓不足所致之癡呆療效顯著。根據其作用特點，我們從抗癡呆、抗急性腦缺氧、增強陽虛、脾虛模型小鼠體質等方面，觀察千斤腦康寧膠囊的活性作用，為臨床用于治療老年癡呆提供藥效學資料。

1 材料

1.1 動物

昆明種小鼠，清潔級；Wistar大鼠，SPF級，均由廣西醫科大學實驗動物中心提供。動物合格證號：SCXK（桂）2003-0003。

1.2 藥品

千斤腦康寧膠囊，批號061008，由南寧市冠峰制藥有限公司提供，0.5 g/粒，每粒膠囊相當于1.22 g生藥。腦復康片，0.4 g/片，批號：20050203，由廣西南寧市制藥企業集團公司出品。參芪片，0.25 g/片，批號：20040914，由吉林制藥股份有限公司出品，以上藥品試驗時均用蒸餾水配制成所需濃度藥液供動物灌胃給藥。

2 方法與結果

2.1 千斤腦康寧膠囊對癡呆大鼠、小鼠學習與記憶的影響

2.1.1 三氯化鋁致大、小鼠癡呆模型復制方法［1-2］：大鼠以戊巴比妥鈉32 mg/kg（小鼠44 mg/kg）腹腔麻醉，剪去皮膚，暴露頭骨，于左側腦室部位（前囟后1 mm，中線旁開2 mm處）埋置外徑1.38 mm、內徑為0.66 mm的外套管，深度為4 mm（小鼠為2.5 mm），以牙托粉和502膠水固定，0號大頭針制成活套內芯封閉管口。造模給藥時，拔除內芯，以注射針頭經外套管向腦室內注射，深度約5 mm（小鼠約3.5 mm）。從手術日起，連續8 d im青霉素鈉2萬u/只/d（小鼠0.8萬u/只/d），以防感染。手術后第4天起，每鼠每天腦室注射0.5%三氯化鋁10 μL（小鼠2 μL），連續5 d。手術對照組腦室折射等容量人工腦脊液。

2.1.2 對癡呆大鼠學習與記憶的影響（Y型電迷路法）：選用240～280 g的♀性大鼠56只，隨機分為7組，每組8只。分組后給藥或給等體積蒸餾水，給藥劑量見表1。每天灌胃1次，連續19 d。第15天至19天，每天給藥后1 h，用Y型電迷路法測試大鼠的空加學習記憶能力。

電迷路法［3］：大鼠在迷路儀內的一臂（起步區）靜置2 min，按兩臂交替法給予燈光條件刺激5 s，繼而施以電擊（控制電壓60 V）至其逃避至安全區，燈光繼續作用15 s，然后熄燈15 s，接著給予第2次測驗。每天依次重復訓練15次，記錄正確反應次數。實驗規定，大鼠受電擊后，20s內從起步區直接逃至安全區視為“正確反應”，其余均屬“錯誤反應”（包括電擊前自動逃離安全區，5 s內不知返回等情況）。連續測試5 d，每天數值換算成正確反應百分率并組內平均，組間比較，結果見表1。

結果表明，千斤腦康寧膠囊可明顯提高訓練正確反應百分率。

2.1.3 對癡呆小鼠學習與記憶的影響：選用27～37 g的♂性小鼠70只，隨機分為7組，每組10只。分組后給藥或給等體積蒸餾水，給藥劑量見表2～4。每天灌胃1次，連續26 d。第16，18天及26天給藥后1 h，用避暗法、跳臺法及Y型水迷路法測定千斤腦康寧膠囊對癡呆小鼠學習與記憶的影響。

避暗法［4］：將小鼠背對洞口放入明室，小鼠通過洞口進入暗室，受電擊后（電壓36v）又逃回明室，訓練5 min，24 h（給藥后1 h），再將小鼠放入明室，記錄自放入至第1次進入暗室的時間為潛伏期及5min內進入暗室受電擊的次數。5 min內未鉆洞者，潛伏期按300 s計算，結果見表2。

表1 千斤腦康寧膠囊對癡呆大鼠學習記憶的影響（Y型電迷路法n=8）

跳臺法［4］：將小鼠置入跳臺儀中平臺上，先適應環境3 min，然后通電（電壓36v），當小鼠跳下平臺受電擊后會重新跳上平臺，逃避電擊。跳下時以小鼠雙足同時接觸銅柵為觸電，視為錯誤反應，訓練5 min，并記錄5 min內觸電次數（錯誤次數），24 h后（給藥后1 h）再將小鼠置于平臺上，記錄自放入至第一次跳下平臺受電擊的時間為潛伏期及5 min內跳下平臺受電擊的次數（錯誤次數）。5 min內未跳下平臺者，潛伏期按300 s計算。結果見表3。

表2 千斤腦康寧膠囊對癡呆小鼠學習記憶的影響（避暗法）（x ± s，n=10）

表3 千斤腦康寧膠囊對癡呆小鼠學習記憶的影響（跳臺法）（x ± s，n=10）

Y型水迷路法［3］：將小鼠置于Y型迷路儀中訓練（水深10 cm），水溫（25±0.5）℃，將小鼠尾對Y型迷路儀叉口，以其在15 s內從入水區直接抵達平臺為正確反應，否則作為錯誤，小鼠抵達平臺后休息15 s再重復訓練，每只小鼠學習（訓練）10次，記錄正確反應次數并換算成正確反應百分率。24 h（給藥后1 h）再次同法測試記憶情況。結果見表4。

結果表明，千斤腦康寧膠囊能使小鼠記憶潛伏期明顯延長，錯誤次數明顯減少，學習和記憶正確反應百分率明顯提高。

2.2 千斤腦康寧膠囊對30%乙醇致小鼠記憶再現障礙的影響（避暗法）

選用體重18～22 g的♂性小鼠60只，隨機分為6組，每

組10只。訓練前小鼠灌胃給藥，給藥劑量見表5。每天灌胃給藥1次，連續11 d。末次藥后1h開始訓練（避暗法），訓練時小鼠鉆洞1次后即取出。24 h后測試。測試前30 min灌胃給30%乙醇15 mL/kg，正常對照組給等容量蒸餾水，記錄鉆洞潛伏期及5 min內鉆洞次數（錯誤次數）。實驗電壓為36v，結果見表5。

表4 千斤腦康寧膠囊對癡呆小鼠學習記憶的影響（Y型水迷路法）（x ± s，n=10）

表5 千斤腦康寧膠囊對乙醇所致小鼠記憶再現障礙的影響（避暗法x ± s，n=10）

結果表明，千斤腦康寧膠囊能使記憶再現障礙小鼠鉆洞潛伏期明顯延長，錯誤次數明顯減少。

2.3 千斤腦康寧膠囊對癡呆小鼠急性腦缺氧的影響［4］

小鼠癡呆模型造模方法同2.1項，然后選用18～22 g的♂性小鼠70只，隨機分為7組，每組10只。給藥劑量見表6。每天灌胃給藥1次，連續30 d。第30天給藥后1 h，用斷頭臺沿耳根部快速切斷，以張口呼吸停止為指標記錄小鼠大腦存活時間。結果見表6。

表6 千斤腦康寧膠囊對癡呆小鼠急性腦缺氧的影響（±s，n=10）

表6 千斤腦康寧膠囊對癡呆小鼠急性腦缺氧的影響（±s，n=10）

t檢驗，與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 劑量/（粒/kg）大腦存活時間/s正常對照組20.5±2.42手術對照組 21.1±1.67模型組 20.6±2.32腦復康片 0.3 23.6±2.72*千斤腦康寧膠囊 3.0 24.0±1.70**1.5 22.6±1.35*0.75 21.3±1.89

結果表明，千斤腦康寧膠囊能明顯延長小鼠大腦存活時間，對小鼠急性腦缺氧有一定的保護作用。

2.4 千斤腦康寧膠囊對陽虛小鼠游泳時間的影響（抗疲勞實驗）［3］

選用18～22 g♂性小鼠60只，隨機分為6組，每組10只。給藥劑量見表7。每天灌胃給藥1次，連續9 d。在給藥同時，小鼠皮下注射氰化可的松30 mg/kg（正常對照組除外），第10天ig給藥后1 h（不再皮下注射氰化可的松），進行抗疲勞實驗，將每一組的動物放入一游泳箱內（體積52 cm×40 cm×22 cm，水深20 cm，水溫23℃ ±0.5℃），6組動物同時進行實驗。小鼠不負重，當小鼠頭部沉入水中15 s不能浮出水面者即為體力耗竭，記錄小鼠入水起至體力耗竭時止所需的時間為小鼠游泳時間。結果見表7。

表7 千斤腦康寧膠囊對陽虛小鼠游泳時間的影響（x ± s，n=10）

結果表明，千斤腦康寧膠囊能使陽虛小鼠游泳時間明顯延長。

2.5 千斤腦康寧膠囊對脾虛小鼠游泳時間的影響（抗疲勞實驗）［3］

選用18～22 g♂性小鼠60只，隨機分為6組，每組10只。給藥劑量見前實驗。每天灌胃給藥1次，連續9 d。在給藥同時，小鼠皮下注射利血平0.2 mg/kg（正常對照組除外），末次藥后4.5 h進行抗疲勞實驗，將每一組的動物放入一游泳箱內（體積52 cm×40 cm×22 cm，水深20 cm，水溫23℃ ±0.5℃），6組動物同時進行實驗。小鼠不負重，當小鼠頭部沉入水中15 s不能浮出水面者即為體力耗竭，記錄小鼠入水起至體力耗竭時止所需的時間為小鼠游泳時間。結果見表8。

表8 千斤腦康寧膠囊對脾虛小鼠游泳時間的影響（x ± s，n=10）

結果表明，千斤腦康寧膠囊能使脾虛小鼠游泳時間明顯延長。

3 討論

阿爾茨海默病（Alzheimer’Disease，AD）亦稱老年性癡呆癥。是老年人中最常見的神經退行性疾病之一［5］。中醫學認為癡呆為神態病，其病倦在腦：但靈機、記性，與腦髓不足有十分密切關系，亦與心脾腎等臟腑功能失調有關。蓋“腎為先天之本”，腎主骨生髓而通于腦，年老之人，腎精虧虛，腦髓失沖，神機失控而迷惑愚鈍，動作笨拙，反應遲緩；“脾為后天之本，氣血生化之源”，脾胃虛弱，健運失司，氣血生化之源不足，氣血虧虛，精虧血少，少以養心，亦無以上充于腦，致使髓海不足，心腦失所滋養，故神不守舍，產生癡呆諸癥。病因病機多因人至老年，體力漸衰，脾腎虧虛，精血虛少，腦髓不足所致。千斤腦康寧膠囊是為脾腎兩虛，痰瘀阻絡，腦髓不足之癡呆癥而設，以補腎益脾，活血化痰，健腦生髓為法。實驗結果說明，千斤腦康寧膠囊能明顯增強癡呆模型大鼠、小鼠及記憶再現障礙小鼠的學習記憶能力；明顯延長急性腦缺氧小鼠大腦存活時間；而且對陽虛、脾虛模型小鼠體質有明顯增強作用，體現了中醫整體治療的特色。

［1］徐叔云.藥理實驗方法學［M］.北京：人民衛生出版社，1991：613.

［2］李 玲，陳汝筑.腦室注射氯化鋁對小鼠學習記憶功能的影響［J］.貴陽醫學院學報，1998：23（3）272.

［3］李儀奎.中藥藥理實驗方法學［M］.上海：上海科學技術出版社，1991：176，174，331，149.

［4］陳 奇.中藥藥理研究方法學［M］.上海：人民衛生出版社，1993：892，894，783.

［5］肖 飛.Alzheimer Disease病因研究現狀［J］.中風與神經疾病雜志，2008：25（4）510-512.

R285.5

B

1001-1528（2010）07-1220-04

2009-06-12

廣西壯族自治區科技攻關項目（桂科攻0537018-13）

劉 元（1965－），女，副研究員，研究方向：中藥藥理學研究及新藥開發。Tel：（0771）5877473 E-mail：liuyuan0821@vip.163.com