廣藿香多糖的優化提取工藝及抗氧化作用

烏蘭格日樂， 白海泉， 翁 慧， 德力根

(1.內蒙古民族大學化學化工學院，內蒙古通遼028043;2.內蒙古科右中旗高力板中學，內蒙古興安盟029000)

廣藿香，又名刺蕊草、藿香(Pogostemon patchoul)。本品為唇形科植物廣藿香，氣味芳香，味微苦。功能與主治:化濁，開胃止嘔，化表解暑。用于濕濁中阻，脘痞嘔吐，暑濕倦怠，胸悶不舒，寒濕閉暑，腹痛吐瀉，鼻淵頭痛［1］。近年來研究表明，多糖具有清除活性氧、延緩機體衰老之功能。有關廣藿香多糖的提取及抗氧化性方面的研究作者未見相關報道。本文利用正交實驗對廣藿香多糖的提取進行了優化選擇并用分光光度法測定了廣藿香多糖對活性氧的清除作用。

1 儀器與試劑，材料

1.1 儀器

NICOLET5700 FT—IR紅外光譜分析儀(美國惠普公司)、UV—240型分光光度計(日本島津)、透析袋(36DM，上海進口分裝)、旋轉蒸發器RE52CS(上海亞榮生化儀器廠)、PHS-3B型酸度計(上海雷磁儀器廠)、722型可見分光光度計(上海第三分析儀器廠)。

1.2 試劑與材料

苯酚、濃硫酸、鄰苯三酚、過氧化氫、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)、硫酸亞鐵銨、三羥甲基氨基甲烷(Tris，)等均為國產分析純。藩紅花紅T(生化試劑，sigma公司)，氯化硝基四氮唑蘭NBT(生化試劑，sigma公司)，對照品葡萄糖和甘露醇為分析純，購于上海汕頭光華化學試劑有限公司，廣藿香購于通遼市中草藥店。實驗用水為重蒸水。

2 方法

2.1 正交實驗設計

采用L9(33)正交表進行實驗設計，(見表1)選擇提取溫度，提取時間，醇析時間等三因素，每個因素選取3個水平，分析這些因素對提取水溶性多糖的影響。

表1 試驗因素水平表

2.2 水溶性多糖的提取、精制

根據表1的正交實驗設計要求，準確稱取風干粉碎為60目的廣藿香10.00 g，用重蒸水作溶劑，回流加熱、濾液濃縮，醇沉靜置、過濾洗滌、干燥，重蒸水復溶、脫色、saveg法除蛋白，透析除去一些低聚糖等小分子雜質，濾液濃縮、洗滌、干燥、稱重，計算得率(見表2)。

2.3 水溶性多糖的含量測定

以葡萄糖為對照品，采用硫酸-苯酚法［2］測定多糖含量(見表2)。

2.4 多糖抗氧化性的測定

2.4.1 廣藿香多糖對·OH的清除作用 測定方法參考文獻方法［3］。·OH 由 EDTA-Na2-Fe(Ⅱ)-H2O2體系產生，由于·OH可使藩紅花紅T褪色，根據褪色程度用比色法來衡量·OH的含量。實驗結果以清除率E%表示，EC50表示達到50%清除率體系中的藥物濃度。E%=(A1－A0)/A1×100%進行計算［4］，(A0表示空白液吸光度;A1表示試液吸光度)結果見表3。

表2 L 9(33)正交實驗設計及結果

表3 廣藿香多糖及甘露醇對·OH的清除作用(n=5)

2.4.2 廣藿香多糖對O－2·的清除作用 鄰苯三酚在堿性條件下易氧化產生超氧自由基(O－2·)，O－2·與NBT作用形成紫色化合物在530 nm處有吸收，以A值反映O－2·的含量。加入不同濃度試液，測定樣品對A值的影響。測定方法參考文獻方法［3］。測定結果以清除率E%=(A0－A1)/A0×100%計算［4］，(A0表示空白液吸光度;A1表示試液吸光度)結果見表4。

表4 廣藿香多糖及甘露醇對O－2·的清除作用(n=5)

2.5 統計分析

用SPSS17軟件完成。正交試驗部分進行方差分析，藥效學部分數據用±s表示，組間差異進行方差分析及t檢驗。

3 結果與討論

3.1 正交試驗方差和極差分析結果

通過多糖得率和含量兩個指標綜合分析影響因素提取溫度A、提取時間B、醇析時間C對多糖得率和含量影響上無顯著性差異(P>0.05)，所以在提取多糖時須同時考慮三個因素的影響。同時通過極差r(R)的大小直觀分析各因素對指標影響的程度［5］:對廣藿香多糖得率而言，因素B影響作用最大(其P值接近0.05)，因素C次之，因素A影響較小;而對廣藿香多糖含量而言，因素C影響作用最大(其P值也最小)，因素A次之，因素B影響較小。根據正交試驗結果，選取各影響因素的最優水平組合為A2B2C2。即廣藿香多糖的最佳提取條件為:提取溫度70℃，提取時間為3 h，醇析時間為30 h。

3.2 驗證試驗

按照上述研究結果所確定的最佳提取條件，提取廣藿香多糖3批，并分別考察廣藿香多糖的得率和含量。通過3次驗證試驗可以看出得率和含量的誤差小，說明該工藝科學、合理、穩定性好。見表5。

表5 驗證試驗結果

3.3 廣藿香多糖的光譜分析

廣藿香多糖的紫外吸收光譜在260 nm和280 nm處未見吸收峰，表明精制后的廣藿香多糖中不含氨基酸和蛋白質。其紅外光譜890.57 cm－1處有吸收峰，表明廣藿香多糖的分子結構中存在β-糖苷鍵。

3.4 廣藿香多糖對氧自由基的清除能力

從表3可以看出廣藿香多糖對·OH的平均清除能力大于對照品甘露醇，且同濃度的清除能力與甘露醇比較具有極顯著性差異(P<0.01)。從表4可以看出廣藿香多糖對O－2·有很強的清除作用，不僅清除能力均大于甘露醇。且清除能力與甘露醇比較具有極顯著性差異(P<0.01)。其清除能力強的原因有可能與分子中存在β-糖苷鍵有關［6］。本實驗結果顯示廣藿香多糖對·OH和O－2·有很強的清除作用，而且隨濃度增大，效果增強。表明廣藿香多糖是良好的氧自由基清除劑，可作為其在防衰老、抗炎癥、降血脂、抗腫瘤、增強免疫等功效的藥理基礎。

［1］張 英，張金超，陳 瑤，等.廣藿香生藥、化學及藥理學的研究進展［J］.中草藥，2006，37(5):586-590.

［2］劉曉河，梁惠花，譚曉紅，等.茵陳中多糖的含量測定［J］.中草藥，2003，34(6):519-520.

［3］烏蘭格日樂，白海泉，趙玉英，等.嘎日迪-15多糖的提取及對活性氧自由基的清除作用［J］.中成藥，2008，30(6):917-919.

［4］李貴榮.枸杞多糖的提取及其對活性氧自由基的清除作用［J］.中國現代應用藥學雜志，2002，19(2):94-96.

［5］張 玉，戴立泉，王凱平.正交試驗優化當歸多糖鐵的合成條件研究［J］.中成藥，2007，29(4):581-583.

［6］李 平，王艷輝，馬潤宇.山茱萸多糖PFCA III的理化性質及生物活性研究［J］.中國藥學雜志 ，2003，38(8):583-586.