息喘丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

謝仕偉， 李國榮， 梁少強(qiáng)， 楊光英， 楊 樂， 林慧菁

（廣東省東莞市藥品檢驗(yàn)所，廣東東莞 523109）

息喘丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

謝仕偉， 李國榮， 梁少強(qiáng)， 楊光英， 楊 樂， 林慧菁

（廣東省東莞市藥品檢驗(yàn)所，廣東東莞 523109）

息喘丸；苦杏仁；胡頹子葉；甘草；TLC；鹽酸麻黃堿；HPLC

目的：提高息喘丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：增加了苦杏仁、胡頹子葉和甘草的薄層色譜鑒別，以及鹽酸麻黃堿的HPLC法含量測定。鹽酸麻黃堿的色譜條件：色譜柱為Agilent TC-C18反相柱（5 μm×250 mm×4.6 mm），流動相為乙腈-0.3%三乙胺水溶液（4∶96，磷酸調(diào)至pH 2.5），流速為1.0 mL/min，檢測波長為205 nm，柱溫為35℃。結(jié)果：薄層色譜鑒別中，供試品在與苦杏仁對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與胡頹子葉、甘草對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，紫外光燈（365 nm）下分別顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。HPLC法含量測定中，鹽酸麻黃堿在0.066 2～1.655 μg（r=1.00）呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為99.2%（RSD=0.82%）。結(jié)論：所建立方法簡便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，能有效的控制息喘丸的質(zhì)量。

息喘丸收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第20冊［1］，由無患子根、墨旱蓮、苦杏仁（去油）、五指柑、甘草、胡頹子葉和黨參等十四味中藥和鹽酸麻黃堿組成，功能為益氣養(yǎng)陰，清肺平喘，止咳化痰，臨床上用于氣陰不足，痰熱阻肺，喘息氣短，吐痰黃膩，咽干口渴和慢性支氣管炎等。但該標(biāo)準(zhǔn)只有鹽酸麻黃堿的薄層鑒別項(xiàng)，尚無藥材的定性和含量測定指標(biāo)。為有效地控制該制劑的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)建立了苦杏仁、胡頹子葉和甘草的薄層色譜法（TLC）鑒別，以及采用高效液相色譜法（HPLC）對有效成分鹽酸麻黃堿進(jìn)行含量測定。提高后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法操作簡便、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)，結(jié)果科學(xué)準(zhǔn)確，適合作為本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（美國Agilent公司，型號：Agilent 1200系列），電子天平（Sartorius BP211D），超聲波清洗器（美國Branson公司，型號B5510E，頻率40 kHz）。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

各對照藥材和對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供，其中鹽酸麻黃堿對照品批號為110714-9202；息喘丸（批號：J00001，J00002，J00003，KF0001 均由廣東中一藥業(yè)有限公司生產(chǎn)并提供）；乙腈為色譜純（天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司），水為超純水，其他試劑為分析純。硅膠G（薄層色譜用，Merck）。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

2.1.1 苦杏仁 取本品適量，研細(xì)，稱取約5 g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液與適量柱層析用硅膠G混合均勻，蒸干，得到的干燥粉末直接加在層析柱（內(nèi)徑2.0 cm，長度15 cm，濕法裝柱）上，用石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（1∶1）100 mL洗脫，棄去洗脫液，再用乙酸乙酯100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，濾過，即得供試品溶液。另取苦杏仁對照藥材0.5 g，同法制得對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）為展開劑，展開，晾干，噴以10%磷鉬酸硫酸溶液，105℃下加熱至斑點(diǎn)清晰，置日光下觀察。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)，見圖1。

2.1.2 胡頹子葉 取本品適量，研細(xì)，稱取約7 g，置具塞錐形瓶中，加入乙酸乙酯20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL溶解，濾過，即得供試品溶液。另取胡頹子葉對照藥材1 g，同法制得對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷－三氯甲烷-甲醇（3∶5∶1）為展開劑，展開，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，晾干，于105℃加熱數(shù)分鐘后置紫外光燈（365 nm）下觀察。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)，見圖2。

圖1 苦杏仁TLC薄層色譜圖

圖2 胡頹子葉TLC薄層色譜圖

2.1.3 甘草 取“胡頹子葉”項(xiàng)下的供試品溶液，另取甘草對照藥材0.5 g，水煎煮1 h，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)尤胍宜嵋阴?0 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，加乙酸乙酯2 mL溶解，濾過，即得對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷－三氯甲烷－甲醇（4∶5∶1）為展開劑，展開，晾干，噴以30%硫酸乙醇溶液，晾干，于105℃加熱數(shù)分鐘后置紫外光燈（365 nm）下觀察。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)，見圖3。

圖3 甘草TLC薄層色譜圖

2.2 鹽酸麻黃堿的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent TC-C18反相柱（5 μm×250 mm×4.6 mm）；流動相：乙腈-0.3%三乙胺水溶液（4∶96，磷酸調(diào)至pH 2.5）；流速：1.0 mL/min；柱溫：35℃；檢測波長：205 nm；進(jìn)樣量：10 μL。理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算不得低于3 000，鹽酸麻黃堿峰與相鄰的其他峰的分離度應(yīng)大于1.5。

2.2.2 鹽酸麻黃堿對照品溶液的制備取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，用流動相溶解（必要時超聲處理）制成每1 mL 含100 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 專屬性試驗(yàn) 取按處方比例及制法制備的缺鹽酸麻黃堿陰性樣品，按2.2.3項(xiàng)下方法制備陰性對照溶液。精密分別吸取上述對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，按上述色譜條件測定，結(jié)果陰性對照無干擾見圖4。

圖4 HPLC色譜圖

2.2.5 線性關(guān)系 分別精密吸取同一份對照品溶液（濃度為66.2 μg/mL）1、2、5、10、15、20、25 μL 注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。以進(jìn)樣量（X）作為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）作為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程：Y=156.4X－1.934，r=1.00。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿在0.066 2～1.655 μg的范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別于配制后 0、4、8、12、24、48 h 進(jìn)樣 10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，結(jié)果鹽酸麻黃堿峰面積的RSD為0.14%（n=7），表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 取同一份鹽酸麻黃堿對照品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，測定，計(jì)算鹽酸麻黃堿峰面積的RSD為0.35%，結(jié)果表明精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號的息喘丸按供試品溶液制備方法平行制備6份，測定鹽酸麻黃堿的峰面積，計(jì)算鹽酸麻黃堿含量，結(jié)果其RSD為1.0%，表明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 分別精密稱取鹽酸麻黃堿對照品0.021 50 g，置20 mL量瓶中，加入流動相溶解并稀釋至刻度，即得對照品貯備液（濃度為1.075 mg/mL）。取同一供試品（批號：KF0001；含鹽酸麻黃堿9.10 mg/g）6份，按表1加入適量本品和鹽酸麻黃堿對照品，置具塞錐形瓶中，按上述供試品制備方法和色譜條件測定，計(jì)算。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.10 樣品測定 分別取3批不同批號的息喘丸，按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，取對照品溶液與供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，計(jì)算鹽酸麻黃堿的含量及RSD。結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果（n=4）

3 討論

3.1 本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過反復(fù)比較供試品提取方法和展開條件，優(yōu)選了正文的TLC條件對本品中苦杏仁、胡頹子葉和甘草進(jìn)行鑒別，結(jié)果表明靈敏度高，專屬性強(qiáng)，鑒別效果清晰，且操作較簡便。

3.2 取一定濃度的對照品溶液，照分光光度法（中國藥典2005年版一部附錄V A）在200～400 nm下掃描。結(jié)果顯示，鹽酸麻黃堿在（205±2）nm處有最大吸收，故選擇205nm為測定波長。

3.3 藥典收載“麻黃”含量測定項(xiàng)下的流動相為乙腈-0.1%磷酸（9∶87）［2］，發(fā)現(xiàn)該條件下鹽酸麻黃堿的峰形和分離度均不佳；據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［3-5］，流動相中加入掃尾試劑三乙胺和適量磷酸，鹽酸麻黃堿的峰形尖銳對稱，且與其他相鄰雜質(zhì)達(dá)到基線分離。最后，考慮到保留時間的適中和穩(wěn)定等其它因素，把流動相確定為乙腈-0.3%三乙胺水溶液（4∶96，磷酸調(diào)至pH 2.5）。

［1］中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑（第20冊）［S］.1998：267.

［2］中國藥典［S］.一部.2005：223.

［3］鄧開英，胡太德.RP-HPLC測定鎮(zhèn)咳寧糖漿中鹽酸麻黃堿的含量［J］. 華西藥學(xué)雜志，2004，19（3）：230-231.

［4］郭德銘，蔣 瓊，陳 波.HPLC測定小兒化痰止咳顆粒中的鹽酸麻黃堿［J］. 華西藥學(xué)雜志，2008，23（5）：598-599.

［5］吳龍?jiān)疲瑒?元，宋志釗，等.HPLC法測定麻杏止咳糖漿中鹽酸麻黃堿的含量［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，2009，18（9）：22-23.

R927.2

B

1001-1528（2010）07-1257-04

2009-06-02

謝仕偉（1981－），男，碩士，主管藥師，研究方向：天然藥物分析。Tel：13826438012 E-mail：ken181@21cn.com