子宮內(nèi)膜內(nèi)樹突狀細(xì)胞的免疫組化分析

羅海軍 趙林 練億香

從DC角度入手，人們在腫瘤、感染、免疫缺陷、移植排斥、變態(tài)反應(yīng)、自身免疫性疾病等發(fā)生機理的研究方面提出了許多新的認(rèn)識，對于某些分子機理有了更確切的了解，但這些研究結(jié)果或結(jié)論大多數(shù)來源于動物實驗，尚有待于臨床研究的確證。但是，到目前為止，有關(guān)DC臨床研究的報道還很少、空白點還很多。本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察正常子宮內(nèi)膜組織中DC的分布，形態(tài)特點及其在子宮內(nèi)膜各個不同時期表達的差異性，藉以推斷雌、孕激素對其數(shù)量的影響，進而探討女性子宮內(nèi)膜病變的發(fā)病機理。

1 對象和方法

2005～2008年長沙市中心醫(yī)院病理科的60例標(biāo)本，因患其他不涉及子宮內(nèi)膜的良性婦科疾病而接受子宮全切或者次全切除術(shù)的患者。所有標(biāo)本具有完整臨床資料。育齡患者均有正常月經(jīng)周期，術(shù)前至少半年未接受過放療、化療以及性激素治療，也未曾使用宮內(nèi)節(jié)育器避孕。術(shù)后經(jīng)病理診斷為正常子宮內(nèi)膜組織。行子宮全切或次全切除術(shù)后立即取離體子宮縱向剖開，于子宮底部取1cm×1cm×1cm大小子宮內(nèi)膜，貫穿子宮內(nèi)膜全層達子宮肌層，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的生理鹽水沖洗去表面血液。取下的標(biāo)本分別投入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的中性甲醛(廣州化學(xué)試廠)中固定12～24h，以備光鏡樣品制作。將充分洗凈預(yù)先干燥的玻片浸泡于稀釋后的多聚賴氨酸(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司)溶液數(shù)十秒或提拉十次，瀝干，于室溫下涼干12～24h待用。

應(yīng)用M icrosoft Excel進行數(shù)據(jù)的整理，采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計處理，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用x2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 正常子宮內(nèi)膜HE染色結(jié)果 增生期早期子宮內(nèi)膜比較薄，腺上皮呈立方形或者低柱狀，核位置參差不齊，呈假復(fù)層狀，間質(zhì)較致密。增生期中期子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量增多增長，呈彎曲狀，腺上皮細(xì)胞呈柱狀表現(xiàn)增生活躍。增生期晚期子宮內(nèi)膜腺上皮呈高柱狀。腺上皮仍繼續(xù)生長，核分裂相增多，腺體更長，形成彎曲狀;分泌期子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞表面可見分泌泡。腺體呈彎曲狀或鋸齒狀，細(xì)胞高柱狀，早期呈假復(fù)層，可見核上空泡及核下空泡，腺細(xì)胞頂漿分泌活躍。至分泌中晚期子宮內(nèi)膜較前更厚并呈鋸齒狀，腺體開口面向?qū)m腔，有糖原等分泌物溢出，腺腔呈磨損狀。間質(zhì)高度水腫疏松，螺旋小動脈增生，彎曲，血管管腔也顯著擴張。絕經(jīng)期子宮內(nèi)膜萎縮菲薄，腺體少而小，腺管窄而直，腺上皮為單層立方形或低柱狀細(xì)胞，間質(zhì)少而致密，膠原纖維相對增多。

2.2 正常子宮內(nèi)膜DC的形態(tài)和分布特點 在全部60例正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本中有27例標(biāo)本可見HLA-DR+DC，其中增殖期26例中有18例呈陽性表達，分泌期24例中有8例表達陽性，絕經(jīng)期10例中僅一例呈陽性表達，陽性率分別為69.2%,33.3%和10%。HLA-DR陽性DC為棕黃色細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，胞體較大，表面可見長短不一，數(shù)目不等的樹突狀突起，細(xì)胞核不規(guī)則。絕大多數(shù)DC位于子宮內(nèi)膜的功能層，呈區(qū)域性分布于腺體周圍的間質(zhì)內(nèi)，可見到幾個DC聚群包繞腺體的現(xiàn)象。光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)增殖期子宮內(nèi)膜組織中HLA-DR+DC與分泌期子宮內(nèi)膜組織中的HLA-DR+DC在細(xì)胞形態(tài)和分布方面沒有明顯差別。絕經(jīng)期子宮內(nèi)膜的陽性細(xì)胞數(shù)量很少，在內(nèi)膜中稀疏分布，其中陽性細(xì)胞著色較淺，表面分支減少，細(xì)胞多為無突起的圓形或橢圓形，胞漿突起變短、變少。陽性對照的胸腺組織內(nèi)可見大量散在分布的抗HLA-DR免疫染色陽性反應(yīng)細(xì)胞，細(xì)胞表面可見大量分支。陰性對照的胸腺組織皆呈抗HLADR免疫染色陰性。在全部60例正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本中共有24例標(biāo)本呈CDIa染色陽性，其中增殖期26例中有16例呈陽性表達，與18例HLA-DR+增殖期子宮內(nèi)膜中的16例吻合。分泌期24例有8例呈陽性，與HLA-DR標(biāo)記陽性的分泌期子宮內(nèi)膜均為相同病例，絕經(jīng)期10例均未見陽性表達，各組陽性率分別為61.5%,33.3%和0。CDIa+細(xì)胞形態(tài)及部位與HLA-DR+細(xì)胞形態(tài)及部位基本相同，但是陽性細(xì)胞數(shù)量較后者為少，而且大體分布相對后者更為表淺。

2.3 H LA-DR和CDIa陽性細(xì)胞與子宮內(nèi)膜分期的關(guān)系見表1。

陽性率的比較用x2檢驗:H LA-DR，x2=12.437，P=0.002＜0.05，CD Ia，x2=12.137，P=0.002＜0.05。陽性細(xì)胞數(shù)的比較采用獨立樣本t檢驗:H LA-DR，t=-2.517，P=0.045＜0.05，CDIa，t=-3.117，P=0.021＜0.05。免疫組化結(jié)果顯示，增殖期子宮內(nèi)膜與分泌期子宮內(nèi)膜、分泌期子宮內(nèi)膜與絕經(jīng)期子宮內(nèi)膜、增殖期子宮內(nèi)膜與絕經(jīng)期子宮內(nèi)膜HLA-DR和CDla染色陽性率均有顯著性差異(P＜0.05)。增殖期子宮內(nèi)膜和分泌期子宮內(nèi)膜陽性細(xì)胞數(shù)之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。

表1 HLA-DR陽性率、陽性細(xì)胞密度與子宮內(nèi)膜分期的關(guān)系(例，%)

3 討論

目前許多研究都集中在疾病的外周血或骨髓來源的DC的表型變化和免疫功能狀態(tài)上，但是，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為如果能夠研究病變局部或與病原體/致病因素相接觸的部位/微環(huán)境中的DC數(shù)量與功能，則更有臨床實際意義。盡管人們已經(jīng)認(rèn)識到DC的重要性，但是目前在人體泌尿生殖器官方面DC的研究遠不及血液、消化道、甲狀腺等組織DC的研究廣泛和深入。人們也越來越多地注意到，婦科領(lǐng)域的很多疾病的發(fā)生都與免疫有著密不可分的關(guān)系，比如不孕癥、流產(chǎn)、子宮內(nèi)膜異位癥甚至子宮肌瘤，宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌，絨癌等各種良、惡性腫瘤。因此，從免疫學(xué)角度闡明各種疾病的發(fā)生機理將為臨床上治療相關(guān)疾病提供理論依據(jù)，對這一領(lǐng)域的探索也勢必成為今后人們研究的熱點。已有的研究表明，正常宮頸上皮和妊娠蛻膜組織均含有DC，在子宮局部T細(xì)胞介導(dǎo)的針對腫瘤抗原，抵御病原體入侵的免疫反應(yīng)以及母胎之間的免疫調(diào)控過程中起了重要作用[1-2]。然而國內(nèi)外尚沒有關(guān)于正常子宮內(nèi)膜中DC的研究。子宮是性激素依賴器官，雌、孕激素對子宮的發(fā)育與功能活動的重要性己為人們所熟知，但其對DC在子宮的分布以及數(shù)量有何影響尚待研究。通過研究DC在各個時期子宮內(nèi)膜的表達及影響因素將為進一步探討各種子宮內(nèi)膜病變的免疫學(xué)發(fā)生機理打下基礎(chǔ)，給這些疾病的治療提供新的思路。

本研究通過免疫組織化學(xué)染色觀察人正常子宮內(nèi)膜在月經(jīng)周期不同時期DC的分布，并比較其在不同時期分布以及數(shù)量的差異，結(jié)果證明：人正常子宮內(nèi)膜組織中有DC的存在，DC在子宮內(nèi)膜不同時期分布和數(shù)量有差異，增殖期子宮內(nèi)膜組織HLA-DR和CDIa陽性率均高于分泌期子宮內(nèi)膜組織，增殖期子宮內(nèi)膜組織中陽性細(xì)胞數(shù)也多于分泌期子宮內(nèi)膜。而絕經(jīng)期婦女子宮內(nèi)膜中極少有DC的存在。提示性激素可能參與調(diào)控子宮內(nèi)膜DC的分布以及數(shù)量變化:雌二醇(E2)可以使增殖期子宮內(nèi)膜DC數(shù)量增加，而黃體酮可以使分泌期子宮內(nèi)膜DC數(shù)量減少。這種DC在子宮內(nèi)膜的周期性變化可能是為了適應(yīng)子宮內(nèi)膜在不同時期的功能狀況，如調(diào)低分泌期子宮內(nèi)膜的免疫應(yīng)答水平，導(dǎo)致母體對胚胎的免疫耐受，為受精卵在子宮內(nèi)膜的著床打下基礎(chǔ)，保證妊娠的順利進行。正常免疫反應(yīng)過程中，T細(xì)胞與捕獲抗原的APC之間直接的細(xì)胞間接觸啟動T細(xì)胞活化過程。機體組織器官發(fā)生癌變時，APC作為癌組織局部免疫活性細(xì)胞參與反應(yīng)，將信息傳遞給淋巴細(xì)胞，使淋巴細(xì)胞向癌灶浸潤。DC作為主要的APC，可以識別腫瘤特異性抗原，直接提呈抗原給T細(xì)胞，與T細(xì)胞發(fā)生聚集，促發(fā)一系列免疫反應(yīng)，若APC不遞呈抗原，則T細(xì)胞的誘導(dǎo)將不能發(fā)生。DC作為位于皮膚或黏膜中執(zhí)行免疫監(jiān)視系統(tǒng)傳入支的APC，其數(shù)量的減少可以直接影響機體局部的免疫狀態(tài)，造成局部病變的發(fā)生[3-4]。

因此DC在局部組織的浸潤程度代表了機體抗腫瘤免疫反應(yīng)的一個方面。本研究中絕經(jīng)期子宮內(nèi)膜DC檢出率很低，絕經(jīng)期DC位于子宮內(nèi)膜間質(zhì)內(nèi)孤立存在，只有少而短的細(xì)胞質(zhì)突起，表明這些細(xì)胞絕大多數(shù)處于非活化狀態(tài)。子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的三大惡性腫瘤之一，好發(fā)于絕經(jīng)期婦女。由本研究結(jié)果推測絕經(jīng)期婦女子宮內(nèi)膜癌高發(fā)的原因可能是由于絕經(jīng)期子宮內(nèi)膜組織中DC缺如以及子宮內(nèi)膜原位DC處于非活化狀態(tài)而無法激發(fā)特異性CTLS反應(yīng)，局部缺乏有效的免疫監(jiān)控機制進而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。絕經(jīng)期子宮內(nèi)膜組織中DC減少的機制尚未明了，是否因為絕經(jīng)期受到雌激素分泌減少的影響引起子宮內(nèi)膜原位DC數(shù)量的減少尚有待于進一步研究。

[1]龔選舉,閻玉虎,吳建平.肺癌組織中腫瘤浸潤樹突狀細(xì)胞對預(yù)后的影響[J].中華腫瘤雜志,2000,22(3):135-137.

[2]趙瑞景,馮惠東,王秀榮,等.樹突狀細(xì)胞浸潤與肺癌預(yù)后相關(guān)性研究[J].中國肺癌雜志,2002,5(2):112-114.

[3]申洪.免疫組織化學(xué)染色定量方法研究[J].中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,1995,4(1):89-92.

[4]廖劍輝.DAB同步浸染顯色法在免疫組織化學(xué)中的應(yīng)用[J].暨南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),1996,17:55.