解脲支原體濃度與精液活動(dòng)力的相關(guān)性研究

陳早慶 張濤 邢發(fā)樞

解脲支原體是一種無(wú)細(xì)胞壁、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的原核微生物。大小0.3～0.5μm，菌落小，直徑15～30μm。國(guó)內(nèi)外對(duì)支原體感染是否會(huì)影響精液質(zhì)量，以及精液檢查支原體陽(yáng)性者應(yīng)否抗感染治療存在截然不同的觀點(diǎn)。臨床中見有支原體感染，但精液質(zhì)量正常，且生育沒(méi)有受到影響的病人。亦可見有病例在支原體殺滅后，精液質(zhì)量明顯改善。我們研究支原體感染濃度與精液活動(dòng)力是否存在相關(guān)性，以指導(dǎo)臨床治療。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

2008年5月～2010年1月男科門診育前檢查，177例精液培養(yǎng)法解脲支原體陽(yáng)性的自愿者，年齡22～33歲，平均26歲。外生殖器體檢無(wú)異常，抗精子抗體陰性。精液淋球菌培養(yǎng)陰性。

1.2 標(biāo)本采集

手淫取精液，注意無(wú)操作。取精后立即接種。

1.3 方法

1.3.1 精液分析 將精液置于37℃孵育10m in，液化后檢測(cè)精液量、精子密度、存活率、活動(dòng)力形態(tài)等。

1.3.2 PCR法 由中山大學(xué)達(dá)安基因股分有限公司提供的解脲支原體PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒。

1.3.3 DNA提取 標(biāo)本處理：取0.1m l精液加入1m l滅菌生理鹽水，充分震蕩搖勻，吸取全部液體轉(zhuǎn)至1.5m l離心管中，12000rpm離心5m in。去上清，沉淀加滅菌生理鹽水1m l混勻，12000rpm離心5m in。去上清，沉淀中加入50μl DNA提取液充分混勻，100℃恒溫處理(10±1)m in。12000rpm離心5m in，備用。將陰性質(zhì)控品、臨界陽(yáng)性質(zhì)控品、強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控品、陽(yáng)性定量參考品分別離心備用。

1.3.4 PCR擴(kuò)增 于PE Gene Am p5700操作。取PCR反應(yīng)管若干，分別加入處理后的樣品上清液2μl，8000rpm離心數(shù)秒，放入儀器樣品 。反應(yīng)溫度及時(shí)間分別為93℃預(yù)變性2m in，93℃變性45s，55℃復(fù)性60s，10個(gè)循環(huán)；93℃變性30s，55℃復(fù)性45s，30個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，儀器自動(dòng)分析標(biāo)本支原體數(shù)值。

2 結(jié)果

精液PCR法檢測(cè)支原體濃度與精液活動(dòng)力分析見表1。精液活動(dòng)力具有向前運(yùn)動(dòng)的精子(a+b級(jí))＞50%或a級(jí)＞25%為正常；小于此值為異常。

兩組支原體感染后精子活動(dòng)力使用x2檢驗(yàn)，P＜0.05，有顯著性差異。檢測(cè)結(jié)果顯示，支原體感染濃度＞105拷貝組，精子活動(dòng)力正常的僅占8.3%，支原體感染濃度＜105拷貝組，精子活動(dòng)力正常的占54.3%。隨著感染的支原體濃度增高，精子的活動(dòng)力明顯降低。＜103拷貝的病例，精子活動(dòng)力未見異常。

3 討論

3.1 支原體感染對(duì)精子活動(dòng)力影響的可能機(jī)制

表1 兩組精液活動(dòng)力比較(例)

解脲支原體是泌尿生殖系感染常見的病原體。其可感染副性腺，引起精漿異常；亦可感染睪丸，引起精子形態(tài)、發(fā)育異常。其對(duì)精子的活動(dòng)力的影響，可通過(guò)多方面機(jī)制起作用。

支原體性前列腺炎／精囊炎對(duì)精子活動(dòng)力的影響。作為副性腺，前列腺、精囊分泌的前列腺液、精囊液對(duì)精子起營(yíng)養(yǎng)、活化作用。前列腺炎／精囊感染支原體后，前列腺、精囊分泌減少，尤其使精液液化的蛋白水解酶的減少[1]，精子的活動(dòng)力降低。臨床上可表現(xiàn)有尿頻、尿急、會(huì)陰脹痛、精液量少等。支原體帶菌者，由于感染的病原體少，前列腺及精囊的炎癥反應(yīng)輕，前列腺液和精囊液沒(méi)有改變，精子的活動(dòng)力沒(méi)有受到影響。

有研究認(rèn)為，支原體感染后可吸附在精子頭尾部，造成精子膜的結(jié)構(gòu)損傷。精子變得臃腫、形態(tài)異常，尾部發(fā)生折角卷曲。有些精子發(fā)生凝集現(xiàn)象。支原體感染后精子畸形率上升，尖頭、大頭、雙頭、無(wú)尾等異常形態(tài)增多，經(jīng)洗滌分離后精子與支原體共孵育過(guò)夜后，精子運(yùn)動(dòng)速度、運(yùn)動(dòng)軌跡等參數(shù)和精子形態(tài)較對(duì)照組改變明顯，精子膜完整性及功能異常[2]。

3.2 支原體感染濃度與精子的活動(dòng)力有明顯的相關(guān)性

我們的研究發(fā)現(xiàn)，并非所有的支原體感染會(huì)影響精子活動(dòng)力。當(dāng)?shù)蜐舛鹊闹гw感染時(shí)(＜105拷貝)，泌尿生殖系癥狀和體征不明顯，精液質(zhì)量亦沒(méi)有明顯的降低，或降低比例小。＜103拷貝，精液活動(dòng)力基本無(wú)影響，我們稱之為支原體帶菌者。當(dāng)濃度達(dá)到＞105拷貝時(shí)，病人有尿頻、尿急、會(huì)陰脹等不適，精子的活動(dòng)力明顯降低。我們稱之為有意義的支原體感染者。這類感染有較強(qiáng)的致病力。

并非所有的支原體病原學(xué)檢查陽(yáng)性，就需要抗生素治療。對(duì)于精液中支原體＞105拷貝，提示為高濃度支原體感染，給予積極、有效的抗感染治療是必須的；而對(duì)于精液支原體濃度＜103拷貝，提示為支原體帶菌者，可無(wú)需治療；濃度介于兩者之間的病例，若無(wú)泌尿生殖系感染癥狀，精液檢查提示質(zhì)量沒(méi)有受到影響，亦可無(wú)需治療。在我們研究的病例中，有意義的支原體感染病人，經(jīng)有效的抗感染治療后，復(fù)查精子的活動(dòng)力得到明顯改善，a+b級(jí)精子數(shù)占比大部恢復(fù)正常。而對(duì)于極個(gè)別精液活動(dòng)力低下的支原體帶菌者，即使給予足夠療程的抗生素治療，復(fù)查精液活動(dòng)力亦無(wú)進(jìn)一步改善。

臨床工作中，對(duì)懷疑有支原體感染者，應(yīng)常規(guī)行支原體PCR濃度測(cè)定。嚴(yán)格把握支原體感染的治療標(biāo)準(zhǔn)，避免濫用抗生素，防止過(guò)度治療，減少耐藥菌株的形成。

[1]錢憲明,王益鑫,江峰,等.男性生殖道非特異性感染性不育的精液變化[J].中國(guó)男性學(xué)雜志,1991,5(3):153.

[2]武蓉珍,金帆,潘永苗.解脲支原體與男性不育之間的關(guān)系及其機(jī)制[J].國(guó)際生殖健康/計(jì)劃生育雜志,2008,27(4):230-232.