高效液相色譜法測定濃縮當歸丸中阿魏酸含量

趙子明，曹英莉

（上海童涵春堂制藥有限公司，上海 201315）

濃縮當歸丸系收載于1998年《衛生部藥品標準·中藥成方制劑》（第十七冊），具有養血活血、調經止痛功效，用于治療血虛所致的月經不調、經來腹痛。原標準無含量測定方法，而阿魏酸為當歸的指標成分。為此，筆者用高效液相色譜（HPLC）法[1]測定產品中阿魏酸的含量，旨在有效控制產品質量。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；KQ5200DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。乙腈（色譜純，美國TEDIA公司）；阿魏酸對照品（批號為0773-9910，中國藥品生物制品檢定所）；濃縮當歸丸（批號分別為050310，050316，050322，上海童涵春堂制藥有限公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Shimpack VP-ODS 柱 （150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.085%磷酸溶液（17∶83）；檢測波長：316 nm；柱溫：35℃；進樣量：10 μL。理論塔板數按阿魏酸峰面積計不低于5 000。

2.2 溶液制備

精密稱取阿魏酸對照品10 mg，置50 mL棕色量瓶中，用70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取3 mL，置50 mL棕色量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻即得對照品溶液（每1 mL含阿魏酸12 μg）。取本品，研細，取約 1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加70%甲醇 50 mL，密塞，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）30 min，放冷，抽濾，用70%甲醇洗滌容器與濾渣，收集濾液與洗液，置水浴蒸至近干，殘渣加0.1 mol/L鹽酸溶液20 mL充分溶解，轉移至分液漏斗中，用乙醚振搖提取4次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣用70%甲醇溶解，并轉移至10 mL量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，濾過，續濾液即為供試品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗：按樣品制備項下方法制備缺當歸藥材的陰性樣品，照含量測定方法進行試驗。結果在阿魏酸對照品色譜峰位置處，陰性樣品不出峰，說明陰性不干擾測定（圖1）。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：取對照品溶液，逐級稀釋成每1 mL含48，24，12，6，3，1.5 μg 的溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以阿魏酸峰面積對進樣質量濃度進行線性回歸，回歸方程 A=1.282×105C-5.381×104（r=0.999 7），n=7。結果表明阿魏酸質量濃度在1.544～98.80 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取同一對照品溶液，連續進樣測定。結果峰面積的 RSD為0.25%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12 h時測定。結果峰面積的 RSD=2.91%（n=6），表明供試品溶液至少在12 h內穩定。

重現性試驗：取同批樣品，依法測定含量。結果阿魏酸平均含量為 0.105 1 mg/g，RSD=1.42%（n=6），表明方法重現性良好。

加樣回收試驗：取同一批已知含量的樣品，研細，取1.0 g，精密稱定，分別精密加入阿魏酸對照品，依法測定含量，計算加樣回收率。結果見表1。

表1 阿魏酸加樣回收試驗結果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取5個批號的樣品，依法測定。結果5批樣品中阿魏酸含量分別為 0.121，0.117，0.118，0.105，0.104 mg/g。

3 討論

考察了0.1，0.01，0.001 mol/L的鹽酸溶液，發現以0.1 mol/L鹽酸溶液為溶劑時，提取效率較高。同時對乙醚萃取次數進行了考察，發現4次萃取率已達99.2%。

在上述試驗條件下，儀器的精密度、指標成分的穩定性、方法的重現性和加樣回收率等均較好，符合定量檢測要求。根據以上測定結果，考慮到實際生產需要，同時考慮到藥材含量波動范圍，可訂濃縮當歸丸1 g含當歸（以阿魏酸計）不得少于0.06 mg。阿魏酸為脂溶性成分，該指標能客觀反映乙醇滲漉提取的生產工藝，從而能使生產工藝得到控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京:化學工業出版社，2005:89，附錄 33-35.